X线照射联合RNA干扰STAT3基因对人食管癌细胞增殖、凋亡的影响

摘要

背景与目的:STAT3是近期研究较多的一类癌基因,在多种实体瘤如头颈部鳞癌、食管癌、前列腺癌等中均有异常表达和活性增强.本研究探讨x线照射联合RNA干扰STAT3基因对人食管癌Eca-109细胞增殖、凋亡的影响.方法:针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(SiRNA)的DNA模板,构建pRNAT-u6.1-SiRNA-STAT3重组质粒,转染Eca-109细胞,G418筛选获得阳性克隆,分别用RT-PCR和Western blot方法检测细胞STAT3 mRNA和蛋白表达.转染细胞分别接受0、2、4、6和8 Gy X线照射,平板克隆形成实验检测细胞存活分数,流式细胞仪检测4 Gy X线照射的细胞凋亡.结果:成功构建了pRNAT-U6.1-siRNA-STAT3重组质粒,经测序鉴定正确;RT-PCR和Western blot检测显示,STAT3-siRNA有效地抑制了肿瘤细胞STAT3 mRNA和蛋白表达;平板克隆形成实验和流式细胞仪分析表明,不同剂量X线照射联合STAT3-siRNA可抑制肿瘤细胞增殖,4 Gy X线照射可诱导肿瘤细胞凋亡.结论:X线照射联合RNA干扰STAT3基因表达可抑制人食管癌Eca-109细胞增殖,诱导细胞凋亡.