胸腺肽β4对氧化应激诱导的脊髓源性神经干/祖细胞损伤的作用及机制

摘要

目的:探讨胸腺肽β4(thymosin beta 4,Tβ4)在过氧化氢(hydrogen peroxide,HO)诱导的脊髓源性神经干/祖细胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)氧化应激损伤中的作用及机制。方法:分离Sprague-Dawley(SD)成年雄性大鼠中的原代NSPCs,将其分为对照组(未处理的NSPCs细胞),HO处理组(500μM HO损伤的NSPCs细胞),Tβ4处理3组(HO处理组基础上分别用1、2.5、5μg/ml Tβ4处理的NSPCs细胞),TAK-242处理组[HO处理组基础上用Tβ4(5μg/ml)和Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)抑制剂TAK-242处理的NSPCs细胞]。采用髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)过表达慢病毒感染NSPCs细胞,构建MyD88过表达细胞系,并经HO和Tβ4处理。qRT-PCR和Western blot检测Tβ4,TLR4,My D88的表达水平;MTT法和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测细胞活力;采用Fluo-3/AM探针法检测细胞内Ca水平;流式细胞术和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9试剂盒检测细胞凋亡水平;相应试剂盒分别检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,超氧化物歧化酶(superoxi dedismu-tase,SOD)活性和谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量。酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素(interleukin,IL)-6和IL-1β的含量。结果:HO损伤的NSPCs中Tβ4的表达降低(P<0.05)。与HO处理组相比,Tβ4处理3组和TAK-242处理组NSPCs的细胞活力、Ca浓度显著增加(P<0.05),LDH释放量、细胞凋亡显著减少(P<0.05),ROS和促炎细胞因子的生成显著减少(P<0.05),TLR4和MyD88蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。MyD88过表达后NSPCs细胞活力,SOD活性和GSH含量降低,LDH释放量、细胞凋亡显著增加(P<0.05);而MyD88过表达后NSPCs经Tβ4处理后,细胞活力、SOD活性和GSH含量升高,LDH释放量以及细胞凋亡降低(P<0.05)。结论:Tβ4通过抑制TLR4,MyD88途径减轻HO诱导的NSPCs氧化应激、凋亡和炎症等损伤。