Nestin阳性肾源性干/祖细胞的分离与鉴定及其在肾损伤修复中的作用研究

摘要

目的:最近的研究结果提示肾源性干细胞治疗不可逆的肾病成为研究的热点.神经干细胞标志物Nestin在小鼠胚胎肾及成熟肾组织中有表达,本研究观察Nestin是否为肾祖细胞重要标志物.rn 方法:利用Nestin-GFP转基因小鼠观察Nestin在肾组织中的表达及分离Nestin阳性细胞鉴定自我更新及分化能力及判定在肾损伤修复中的作用.rn 结果:本研究发现,利用Nestin-GFP转基因小鼠,通过流式分选获得的Nestin阳性细胞,培养后可见克隆球形成;细胞传代三十代后仍可见克隆球的形成;可从单个细胞形成克隆球,并且明显表达Nestin;染色体核型正常.通过CCK8活性检测发现具有明显的增殖能力。经体外不同诱导分化培养后，发现其可向成骨，成脂，成神经，成肌细胞分化，提示该Nestin阳性细胞具有向多胚层细胞分化能力。Nestin阳性细胞经静脉注入到肾缺血再灌注损伤小鼠体内，3天后在肾小球中可见标记的Nestin阳性细胞，7天后可分化为nephrin，vementin阳性的足细胞。并且，降低了血肌配水平及细胞凋亡，改善了肾功能的恢复。rn 结论:上述结果表明肾源性Nestin阳性细胞具有较强的自我更新能力及多组织器官分化能力。提示其是肾胚胎发育过程中遗留下来的，最有力的肾源干/祖细胞标志物，尤其是肾小球足细胞的前体细胞的重要标志物。