人乳头瘤病毒6b型早期蛋白E6和E7基因的克隆及表达

摘要

目的:从尖锐湿疣(CA)标本中克隆出人乳头瘤病毒6b型(HPV-6b)早期蛋白E6、E7基因,并进行序列分析比对及原核表达,为HPV感染的检测和基因工程疫苗研究奠定基础.方法:用PCR法,从CA标本中扩增HPV-6的E6、E7基因,构建pUC/HPV-6 E6、pUC/HPV-6 E7两个重组体,酶切鉴定及测序分析比对.经双酶切与表达载体pGEX-5X-1定向连接,构建pGEX-5X-1重组表达质粒,转入BL21大肠杆菌,IPTG诱导GST融合蛋白表达及Western blot鉴定.结果:克隆出HPV-6b早期蛋白E6、E7基因,成功构建pUCm/HPV-6b E6、pUCm/HPV-6b E7重组质粒,克隆获得HPV-6b E6、E7基因与GenBank标准株序列完全相同,经双酶切定向克隆,成功构建重组表达质粒pGEX-5X-l/HPV-6b E6和pGEX-5X-l/HPV-6b E7,转入BL21大肠杆菌,高效表达GST融合蛋白.结论:本研究克隆出的HPV-6b E6、E7基因与标准株相同,HPV-6b E6、E7 GST融合蛋白获得高效表达,为HPV-6b E6、E7基因表达产物的纯化、体外活性以及E6、E7为靶位的基因疫苗研究奠定基础.