人乳头瘤病毒HPV33型E6E7蛋白的表达及多克隆抗体的制备

摘要

目的：人乳头瘤病毒感染是宫颈癌发生的最重要的原因之一，它们在生殖肿瘤的病因学的中起着关键作用。表达人乳头瘤HPV33型病毒癌蛋白E6E7,并免疫小鼠制备抗体. 方法：从HPV33型基因组中扩增出E6E7的基因片段,通过基因测序加以证实;将其克隆至原核表达载体pET28a中,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达,经HIS亲核层析对重组蛋白进行纯化,收集重组蛋白免疫的小鼠阳性血清,经ProteinA/G亲核层析柱纯化得到多克隆抗体,同时将E6E7克隆至真核表达载体Pcdna3.1/His C中,转染293细胞,分别采用免疫荧光法和Western Blot进行检测抗体的特异性. 结果：用得到高纯度的重组蛋白E6,E7制备的E7多克隆抗体,具有良好的特异性. 结论：这种高纯度重组E7蛋白和抗体有望用于HPV33型人乳头瘤疾病的临床检测及发生机制的研究.