拓扑异构酶Ⅱ基因区PCR-RFLP法鉴别常见皮肤癣菌

摘要

目的:探讨拓扑异构酶Ⅱ基因区PCR-RFLP法鉴别常见皮肤癣菌的可行性.方法:用真菌拓扑异构酶Ⅱ基因区通用引物dPsD1、dPsD2,先后对6种34株临床常见皮肤癣菌和2株白念珠菌以及4株曲霉的DNA进行巢式PCR(nested PCR)扩增,扩增后的阳性产物分别用限制性内切酶Hinc Ⅱ和HinfⅠ酶切,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,根据结果来鉴定皮肤癣菌并在种的水平上区分这6种常见皮肤癣菌.结果:通用引物dPsD1对6种皮肤癣菌均能扩增出3 390bp、dPsD2能扩增出2 380 bp的片段,而白念珠菌和曲霉则未见阳性扩增条带.扩增出的产物分别经HincⅡ和HinfⅠ酶切后表现为58～1 670bp长短不等的片段组合,根据这些特异性条带谱可以区分这6种临床常见皮肤癣菌.结论:拓扑异构酶Ⅱ基因区的巢式PCR-RFLP方法,是鉴定和区分常见皮肤癣菌的有效方法.