脂多糖通过TLR4-MyD88信号通路诱导BV2小胶质细胞激活模型的建立

摘要

目的 探讨不同活化程度的BV2小胶质细胞与炎性介质之间的关系及可能的细胞信号转导途径,建立高效稳定的BV2小胶质细胞激活模型.方法 体外常规培养BV2小胶质细胞,CCK-8法绘制细胞生长曲线;采用不同浓度的脂多糖(LPS) (0.25、0.5、1、2、4μg/mL)诱导BV2小胶质细胞24 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;应用CCK-8法和Griess法分别检测细胞活性和一氧化氮(NO冰平;应用蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR (qRT-PCR)分别检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88 (M yD88)蛋白和mRNA的表达.同时选取浓度为1μg/mL的LPS诱导BV2小胶质细胞24 h,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)浓度.结果 CCK-8法和Griess法结果显示:BV2小胶质细胞传代培养后第2～3天处于对数生长期;LPS能明显降低BV2小胶质细胞存活率及提高NO释放量(均P＜0.05),且在实验剂量范围内呈现剂量-效应关系.Western blot和qRT-PCR结果显示:TLR4、MyD88 mRNA及蛋白的表达随着LPS浓度增加呈现先升高后降低的趋势,且均在LPS为1μg/mL时达到峰值(均P＜0.05).ELISA结果显示:LPS (1μg/mL)显著提高TNF-α和IL-1β浓度,与对照组比较差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 LPS可能通过TLR4-MyD88信号通路诱导BV2小胶质细胞活化,进而上调其炎性介质的水平;1 μg/mL LPS是建立高效稳定BV2小胶质细胞激活模型的最佳浓度.