过表达酪氨酸激酶受体B对肾癌细胞株786-O增殖能力的影响

摘要

目的构建含人酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptorB,TrkB）基因的重组慢病毒质粒,建立稳定过表达Trk B的肾癌细胞株786-O并观察TrkB过表达后细胞增殖能力变化。方法扩增TrkB编码序列（coding sequence,CDS）,并与pLV-EGFP（2A）puro载体连接。将连接产物导入HEK293V细胞包装成病毒颗粒并感染肾癌细胞株786-O。Western blotting检测TrkB蛋白表达。MTS法和克隆形成实验检测786-O增殖能力变化。结果重组慢病毒质粒pLV-EGFP（2A）puro-h TrkB构建成功,感染靶细胞后获得稳定过表达Trk B的肾癌细胞株786-O。重组质粒组TrkB蛋白表达显著升高。MTS实验中,重组质粒组490 nm吸光值明显降低（P〈0.05）;克隆形成实验中,重组质粒组克隆形成数明显低于空载体组（P〈0.05）。结论稳定过表达TrkB可能抑制肾癌细胞786-O细胞增殖。