成骨细胞和骨肉瘤细胞BMP-2和Noggin的差异性表达及Noggin抑制骨肉瘤细胞增殖的实验研究

摘要

目的：测定人正常成骨细胞株hFOB 1.19和人骨肉瘤细胞株MG-63中BMP受体以及内源性BMP-2、Noggin的表达水平及差异性,并观察不同剂量外源性Noggin蛋白在体外对骨肉瘤细胞株增殖活性的影响,探讨Noggin抑制骨肉瘤细胞增殖活性的可能机制,为临床进一步应用Noggin治疗骨肿瘤提供实验依据。 方法：采用RT-PCR方法对人正常成骨细胞株hFOB 1.19和人骨肉瘤细胞株MG-63中的BMP受体(BMPR-IA、BMPR-IB和BMPR-II)以及内源性BMP-2、Noggin的mRNA表达水平进行检测。倒置相差显微镜下观察不同剂量Noggin外源性蛋白作用下的MG-63细胞生长和形态变化情况,并应用MTT比色法检测不同剂量的Noggin外源性蛋白(1μg/ml,10μg/ml,20μg/ml浓度梯度)作用骨肉瘤细胞24,48,72和96h后的细胞增殖活性。 结果：人正常成骨细胞株hFOB 1.19和人骨肉瘤细胞株MG-63中均存在BMPR-IA、BMPR-II受体的表达,且在人骨肉瘤细胞株MG-63中的表达高于在人正常成骨细胞株hFOB 1.19中的表达,而两者中均未检测到BMPR-IB的表达；人正常成骨细胞株hFOB1.19和入骨肉瘤细胞株MG-63中均存在内源性BMP-2和Noggin的表达,与正常成骨细胞hFOB1.19相比,人成骨肉瘤细胞株MG-63中的BMP-2 mRNA水平有显著升高,Noggin的mRNA水平无显著差异。加入外源性Noggin蛋白后,MG-63细胞的生长明显受到抑制,并且具有剂量和时间依赖性。倒置相差显微镜观察加入外源性Noggin蛋白组细胞较空白组细胞生长慢,且有较多的漂浮细胞,可见部分细胞皱缩,周缘起泡,部分细胞变圆,折光性增强,浮起死亡.且死亡细胞随Noggin蛋白作用时间的延长而增多。MTT检测显示,浓度为1μg/ml的外源性Noggin蛋白对MG-63细胞的增殖有抑制作用,但是与对照组相比在作用24h时无显著差异,48、72、96h时有明显抑制作用；浓度为10、20μg/ml的外源性Noggin蛋白对MG-63细胞的增殖在各时间点均具有显著的抑制作用；不同浓度的Noggin蛋白对MG-63细胞的增殖抑制作用也存在明显的时间依赖性,以72h作用为最强,在作甩72h后B组抑制率为15.30％,C组抑制率为38.55％,D组抑制率为56.70％。 结论：人正常成骨细胞和人骨肉瘤细胞均存在BMPR-IA、BMPR-II受体的表达,且在人骨肉瘤细胞株MG-63中的表达高于在人正常成骨细胞株hFOB 1.19中的表达,而两者中均未检测到BMPR-IB的表达；骨肉瘤细胞和正常成骨细胞之间存在BMP-2差异性表达,人骨肉瘤细胞MG-63中内源性BMP-2的mRNA表达水平均明显增高；两者中内源性Noggin的mRNA表达水平无显著差异。在体外实验中,应用外源性Noggin蛋白可以明显抑制骨肉瘤细胞的生长,并且这种作用具有剂量和时间依赖关系。因此Noggin可以作为人骨肉瘤治疗的可能方法之一。

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论文说明：缩略词表

声明

摘要

前言

第一部分BMP受体以及内源性BMP-2、Noggin在人正常成骨细胞和人成骨肉瘤细胞中的差异性表达

实验材料和方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

第二部分外源性Noggin蛋白抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖性的体外实验

实验材料和方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

综述：骨肿瘤中的骨形成蛋白表达及其意义

致谢