树舌培养条件优化及其发酵液对小鼠糖代谢调节作用的研究

摘要

糖代谢主要是指葡萄糖在体内的一系列复杂的化学反应。葡萄糖通过体内氧化为机体提供能量。人体的生理活动和病理过程都伴随着葡萄糖代谢水平的变化,调节体内的葡萄糖代谢水平,对于人类预防及治疗因糖代谢异常引起的疾病有重大意义。
　　 本试验首先建立了葡萄糖消耗量的测定方法,并以葡萄糖消耗量为指标,优化了药用真菌树舌液体发酵培养基的组成。同时研究了树舌发酵液对小鼠肝脏糖代谢的调节作用,并对其调节机理进行了分析。主要结论如下:
　　 (1)建立了一种新的试验方法用于检测葡萄糖的消耗量。检测方法为反应液组成包括0.6 mL肝脏匀浆上清液,1 mLpH7.40.2 mol／L磷酸盐缓冲液(含葡萄糖20 mg／mL和苯甲酸钠5 mg／mL)。37℃水浴48 h后,根据DNS法测定反应液中的葡萄糖含量,并计算出葡萄糖的消耗量。
　　 (2)本试验以小鼠肝脏糖耗量为指标,通过单因素试验和正交试验优化了树舌液体发酵培养的工艺条件,其培养基组成为:葡萄糖5g·L-1,甘露醇5 g·L-1,蛋白胨1 g·L-1,硫酸铵1 g·L-1,硫酸亚铁0.5 g·L-1,氯化锌0.5g·L-1,氯化钾0.5g·L-1。培养工艺参数为:初始pH7.5,摇床转速为160r／min,装液量为120mL／250mL。使用此培养基液体培养所得发酵液的葡萄糖消耗量可达到88.62％,显著高于未优化培养基的74.87％。
　　 (3)分析了树舌发酵液对于糖尿病小鼠肝脏糖代谢的影响。结果显示添加树舌发酵液后糖尿病小鼠肝脏糖耗量显著增强,对参与糖代谢的酶活分析显示树舌发酵液能增强己糖激酶、丙酮酸羧化酶、苹果酸脱氢酶、细胞色素氧化酶活性,降低乳酸脱氢酶活性；对糖代谢中间代谢产物分析显示树舌发酵液降低了糖尿病鼠肝脏内丙酮酸、乳酸含量。根据结果可以推断出树舌发酵液主要是通过增加糖的好氧代谢途径来提高葡萄糖消耗量。

目录

文摘

英文文摘

第一章 绪论

1.1 糖代谢

1.1.1 糖代谢的调节作用

1.1.2 糖代谢与非传染性疾病关系

1.1.3 目前检测糖代谢的技术方法

1.2 树舌

1.2.1 树舌的概况

1.2.2 树舌的化学成分

1.2.3 树舌的药用价值

1.3 本课题研究目的和意义

1.4 主要研究内容

第二章 葡萄糖消耗量测定方法的建立

2.1 材料与仪器

2.1.1 材料

2.1.2 主要仪器

2.1.3 试验动物

2.2 试验方法

2.2.1 肝组织匀浆

2.2.2 葡萄糖消耗速率的计算

2.2.3 葡萄糖含量的测定

2.2.4 数据处理

2.3 结果与分析

2.3.1 葡萄糖标准曲线的制作

2.3.2 防腐剂及其添加量对测定结果的影响

2.3.3 苯甲酸钠浓度对葡萄糖消耗速率的影响

2.3.4 pH对葡萄糖消耗速率的影响

2.3.5 酶浓度对葡萄糖消耗速率的影响

2.3.6 葡萄糖浓度对葡萄糖消耗速率的影响

2.3.7 方法稳定性和重现性

2.3.8 葡萄糖消耗的反应动力学方程

2.3.9 讨论

2.4 本章小结

第三章 树舌发酵液培养基工艺条件的优化

3.1 试验材料与仪器

3.1.1 材料

3.1.2 主要仪器

3.1.3 试验动物

3.2 试验方法

3.2.1 培养基

3.2.2 肝组织匀浆

3.2.3 树舌培养工艺流程

3.2.4 葡萄糖消耗量的测定

3.2.5 单因素试验

3.2.6 正交试验

3.2.7 数据处理

3.3 结果与分析

3.3.1 不同添加量发酵液对葡萄糖消耗量的影响

3.3.2 单因素试验

3.3.3 正交试验

3.3.4 培养基优化前后的树舌发酵液糖耗量比较

3.4 本章小结

第四章 树舌发酵液对糖代谢的调节作用

4.1 试验材料与仪器

4.1.1 试剂与材料

4.1.2 仪器与设备

4.1.3 试验动物

4.2 试验方法

4.2.1 树舌发酵液的制备

4.2.2 高血糖鼠造模

4.2.3 肝组织匀浆

4.2.4 葡萄糖消耗量的测定方法

4.2.5 反应液中酶活力的测定

4.2.6 分析测定

4.2.7 数据处理

4.3 结果与讨论

4.3.1 树舌发酵液对提高葡萄糖代谢的影响

4.3.2 树舌发酵液对中间代谢产物的调节作用

4.3.3 树舌发酵液对糖代谢过程中酶的调节作用

4.3.4 树舌发酵液成分分析

4.3.5 树舌发酵液提高葡萄糖消耗量的机理分析

4.4 讨论

4.5 本章小结

第五章 工作总结及展望

5.1 主要研究结论

5.2 工作展望

参考文献

致谢

硕士研究生期间发表的论文