转录因子Klf4通过抑制Cdh1/Skp2/p27通路促进乳腺癌细胞增殖

摘要

背景与目的：乳腺癌的发病率越来越高，已严重威胁到女性的身心健康和生活质量。乳腺癌病因复杂，包括环境因素、遗传因素及个人生活习惯等。近来大量研究表明Klf4在细胞增殖、分化及细胞多能性等多个生物学过程中发挥了重要作用。细胞的过度增殖和异常分化则是肿瘤的一个主要生物学特性。Klf4与多种癌症的发生发展有关，并且在不同组织中扮演着癌基因或抑癌基因两种截然相反的作用。目前Klf4在乳腺癌中的作用及其可能的作用机制鲜有文献报道。本研究试图探索Klf4在乳腺癌细胞增殖中的作用及可能作用机制，进而为乳腺癌的治疗提供一个新的潜在治疗靶点。
　　材料和方法：本实验通过在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中，瞬时过表达或干扰Klf4表达，采用蛋白免疫印迹及实时荧光定量PCR检测有关细胞周期蛋白的变化；接着建立稳定敲减Klf4或稳定过表达Klf4的乳腺癌MDA-MB-231细胞系，采用CCK-8增殖实验、平板克隆实验研究Klf4对乳腺癌细胞增殖能力的影响;最后利用免疫组织化学方法检测了40例乳腺癌患者病理标本中Klf4的表达情况，应用SPSS16.0软件进行统计分析， P≤0.05为差异具有统计学意义。
　　结果：
　　1.在MDA-MB-231细胞中干扰Klf4后，Cdh1在mRNA和蛋白水平均上调，Skp2在蛋白水平出现下调，而mRNA水平无明显变化，p27在蛋白水平上调而mRNA水平无明显变化；在MDA-MB-231细胞中过表达Klf4后，Cdh1在mRNA和蛋白水平均下调，Skp2在蛋白水平出现上调，而mRNA水平无明显变化，p27在蛋白水平出现下调而mRNA水平无明显变化.
　　2.干扰 Klf4后, MDA-MB-231细胞增殖能力明显下降；过表达 Klf4后， MDA-MB-231细胞增殖速度明显加快；
　　3. Klf4主要定位于乳腺癌细胞核，并且在72.5％的乳腺癌组织中高表达。
　　结论：
　　转录因子Klf4通过抑制Cdh1/Skp2/p27通路促进乳腺癌细胞增殖。

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第1章 前言

1.1 研究背景

1.2本研究主要研究目标和内容

第2章 材料与方法

2.1质粒、菌株和细胞系

2.2抗体

2.3质粒 DNA 的转化：

2.4质粒小提操作步骤

2.5质粒大提操作步骤

2.6 细胞总蛋白的提取

2.7 BCA法蛋白浓度测定

2.8免疫印迹（Western）实验步骤

2.9 TRIzol法提取乳腺癌细胞总RNA

2.10 总RNA逆转录成cDNA

2.11荧光定量PCR

2.12 siRNA瞬时干扰实验

2.13 Klf4瞬时过表达实验

2.14建稳定过表达Klf4的MDA-MB-231细胞系

2.15建稳定敲减Klf4的MDA-MB-231细胞系

2.16 CCK-8细胞增殖实验

2.17平板克隆实验

2.18乳腺癌临床组织标本收集及免疫组化步骤

2.19统计学处理

第3章 结果与分析

3.1 Klf4在不同乳腺癌细胞株中的表达情况

3.2 MDA-MB231细胞中沉默内源性Klf4表达后细胞增殖相关基因表达变化情况。

3.3 MDA-MB-231细胞中过表达Klf4后细胞增殖相关基因表达变化情况。

3.4 CCK-8法检测Klf4对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响

3.5平板克隆验证Klf4对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响

3.6 Klf4在人乳腺癌标本中的表达情况。

第4章 讨 论

第5章 结论

参考文献

综述

附录 试剂配置

论文发表情况

个人简历

致谢