阿昔莫司对巨噬细胞ATP结合盒转运子A1表达及其调控的影响

摘要

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的早期特征性病理改变，是单核-巨噬细胞过度聚集脂质而转变为泡沫细胞，因此促使细胞内胆固醇流出即胆固醇逆转运(RCT)，能延缓AS的发生发展，是目前抗AS的主要机制之一。RCT是使外周细胞中多余的胆固醇从细胞内流出，与血浆脂蛋白结合，形成HDL，转运至肝脏，通过胆汁分泌排出体外。其中ATP结合盒转运子A1(ABCA1)是此过程中的一种重要转运蛋白，ABCA1介导细胞内胆固醇流出，由此启动RCT过程。ABCA1在体内受多种因素调控，调节因子中研究最多的是肝脏X受体(LXR)，有LXRα、LXRβ两种亚型，LXRα发挥主要作用，能上调ABCA1的表达。
　　烟酸类药是最早应用于临床的调脂药，阿昔莫司为烟酸类衍生化合物，临床应用不良反应较烟酸低。烟酸类药具有广泛而显著的降脂效果，与其它调脂药相比，烟酸上调HDL的作用最为显著，还有大量降脂效应外的抗AS效应。但众多不良反应限制了它的应用，随着烟酸缓释剂及复合制剂的问世，大大降低了烟酸类药物的副作用，烟酸类药的作用又被重新认识和评价。已有研究表明烟酸能促使细胞内胆固醇流出，烟酸的这种作用可为解释其升高HDL的机制提供方向，但烟酸类药促使细胞内胆固醇外流的相关机制尚不太明确。
　　[目的]：
　　本实验以RAW264.7巨噬细胞为研究对象，研究不同浓度阿昔莫司作用下，巨噬细胞内ABCA1的mRNA及蛋白表达的变化，进一步了解阿昔莫司对ABCA1上游调控因子LXRα的mRNA及蛋白表达的影响，从而探讨阿昔莫司促进细胞内胆固醇流出，抗动脉粥样硬化的可能机制。
　　[方法]：
　　1.体外培养RAW264.7巨噬细胞。
　　2.在体外，分别将不同浓度阿昔莫司与巨噬细胞共培养24h，提取各组细胞总RNA和蛋白质。
　　3.用RT-PCR技术测定各组ABCA1、LXRαmRNA水平。
　　4.用Western-blot技术测定各组ABCA1、LXRα蛋白表达。
　　5.用闪烁计数法测定细胞内胆固醇流出率。
　　6.统计学分析。
　　[结果]：
　　1.通过半定量RT-PCR检测显示，不同浓度阿昔莫司干预组ABCA1的mRNA水平较对照组明显升高(P<0.05)，且此作用随着阿昔莫司浓度的增加而逐渐增强(P<0.05)。
　　2.通过半定量RT-PCR检测显示，不同浓度阿昔莫司干预组LXRα的mRNA水平较对照组明显升高(P<0.05)，且此作用随着阿昔莫司浓度的增加而逐渐增强(P<0.05)。
　　3.通过Western-blot检测显示，不同浓度阿昔莫司干预组ABCA1蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05)，且此作用随着阿昔莫司浓度的增加而逐渐增强(P<0.05)。
　　4.通过Western-blot检测显示，不同浓度阿昔莫司干预组LXRα蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05)，且此作用随着阿昔莫司浓度的增加而逐渐增强(P<0.05)。
　　5.闪烁计数法测定细胞内胆固醇流出率，结果显示，不同浓度阿昔莫司干预组细胞内胆固醇流出率较对照组均明显增高，且此作用随着阿昔莫司浓度的增加而逐渐增强(P<0.05)。
　　[结论]：
　　实验证实，阿昔莫司能浓度依赖性地上调RAW264.7巨噬细胞ABCA1的mRNA及蛋白表达，同时阿昔莫司还能浓度依赖性地上调ABCA1的上游调控因子LXRα的mRNA及蛋白表达，阿昔莫司能通过LXRα通路上调ABCA1的表达，从而促进细胞内胆固醇外流，抑制泡沫细胞的形成，阿昔莫司的这种有益效应可为延缓AS提供实验依据。