地高辛对人T细胞淋巴瘤Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制的研究

摘要

目的：通过体外培养人T细胞淋巴瘤Jurkat细胞,观察地高辛对其增殖、凋亡及细胞周期分布的影响,并检测Survivin、Caspase-3、CycIinAmRNA在细胞中的表达情况,初步探讨强心甾类药物地高辛对Jurkat细胞的作用,并通过研究其对Survivin、Caspase-3、CyclinA的影响进而研究其发挥抗肿瘤作用可能的分子机制,为地高辛抗肿瘤的临床应用提供理论依据.方法:体外培养Jurkat细胞，用25nmol/L,50nmol/L, 100nmol/L,200nmol/L浓度的地高辛进行干预。应用MTT比色法检测细胞生长情况;流式细胞术(FCM)分析地高辛对细胞周期的影响并检测细胞凋亡的情况;应用RT-PCR法检测细胞中Survivin,Caspase-3,CycIinA mRNA的表达水平。结果:1.MTT比色试验结果显示:实验组地高辛作用于Jurkat细胞24,48,72h后，与对照组相比，各实验组吸光度值(OD)均有不同程度的下降，具有统计学差异(P<0.05).2.流式细胞术检测结果显示:各实验组地高辛作用于Jurkat细胞48h后，G2/M期细胞数增加，GO/G1期和S期细胞数减少。实验组Jurkat细胞G2/M期细胞数与对照组相比有统计学差异(P<0.05).3.流式细胞术检测结果显示:各实验组地高辛作用于Jurkat细胞48h后，出现明显的凋亡峰，对照组未见凋亡峰或仅有低平的凋亡峰。各浓度组地高辛作用Jurkat细胞48h后的细胞凋亡率与对照组相比具有统计学差异(P<0.05).结论:1.强心幽类药物地高辛体外对T淋巴瘤细胞(Jurkat细胞)生长具有明显的抑制作用，且在50-200nmol/L范围内呈时间、剂量依赖性。2.地高辛可使Jurkat细胞G2/M期细胞数增多，GO/G1和S期细胞数减少。细胞G2/M期阻滞可能与CycIinA基因表达受抑有关。通过阻滞细胞于G2/M期，抑制Jurkat细胞的增殖，此可能为地高辛抗肿瘤的作用机制之一。3.地高辛能够诱导淋巴瘤Jurkat细胞凋亡，并可使Jurkat细胞中Survivin mRNA的表达减少，Caspase-3 mRNA的表达增加，并呈明显的剂量依赖关系，认为地高辛诱导Jurkat细胞凋亡的作用部分是通过下调Survivin的表达进而激活Caspase-3来实现的，这可能是地高辛抗肿瘤的又一重要机制。