靶向Pim-3的免疫刺激性双功能shRNA载体对小鼠肝癌的治疗作用

摘要

目的:本研究利用富含GU序列的ssRNA能够活化TLR7信号通路从而激活免疫应答的特点,将编码ssRNA和靶向肝癌原癌基因Pim-3的shRNA串联起来,构建既能沉默原癌基因Pim-3的表达,促进肿瘤的凋亡,又能通过活化TLR7激发机体抗肿瘤免疫应答的双功能表达载体,在体内外观察该双功能表达载体对小鼠肝癌的治疗作用.方法:首先分别检测pim-3在小鼠肝癌细胞和正常的小鼠肝细胞及临床肝癌组织中表达的差异;继而用双功能表达载体转染肝癌细胞系,通过Real-time PCR和Westernblot技术检测对Pim-3的沉默作用;通过Annexin V/PI染色和TUNEL技术检测肝癌细胞凋亡的变化,同时检测Bad、p-Bad、BCL-2、BCL-XL等凋亡相关分子表达的变化;并观察该双表达载体对TLR7信号通路的激活作用.通过用小鼠肝癌细胞系Hepa1-6对C57BL/6小鼠进行皮下荷瘤,观察瘤内注射双功能表达载体对小鼠肿瘤生长的影响,并通过细胞清除和过继转输实验探讨其激发免疫应答的确切机制.结论:靶向Pim-3的兼具靶基因沉默效果和免疫激活作用的双功能shRNA表达载体较shRNA和ssRNA具有更好的抗肿瘤作用,有望成为新的用于肝癌等肿瘤治疗的新策略.