丹参素促大鼠心肌细胞及心脏干细胞增殖的作用

摘要

目的:大鼠原代心肌细胞及心脏干细胞(CSCs)培养条件的筛选及丹参素(DS-182)对两种细胞体外增殖的影响.方法:对比组织块培养法及差速培养法,选取适宜培养基、消化液浓度、消化时间、差速贴壁时间及心脏成纤维细胞(CFs)抑制剂等因素.分别用MTT比色法、ELISA法及流式细胞术(FCM)检测丹参素对大鼠心肌细胞及CSCs体外增殖的影响.结果:确定DMEM/F121∶1培养基、100ml/L胎牛血清(FBS)、2.5g/L胰蛋白酶、5min/次×5次的消化时间及120min的差速贴壁时间为最适分离纯化条件.MTT比色法检测显示,与空白对照组相比,经浓度为7.8×10-4～1×10-1mol/L的DS-182处理12、24、48和72 h后,细胞的吸光度(A)值明显增加(P＜0.05).ELISA法检测显示,与空白对照组相比,经浓度为3.9×10-4～1×10-1 moL/L的DS-182处理24h后,细胞的A值明显增加(P＜0.05).FCM检测显示,经浓度为0.1mol/L的DS-182处理24h后,c-kit+的细胞数占细胞总数的比例增加了27.0％.结论:改良了一套较为完整的大鼠心肌细胞及CSCs的分离纯化方法.DS-182在一定浓度下(7.8×10-4～1×10-1mol/L)对大鼠心肌细胞及CSCs的增殖具有明显的促进作用.