原料乳中嗜冷菌蛋白酶的纯化及特性研究

摘要

采用硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose FF离子交换层析、Sephacryl S-100 HR凝胶过滤层析方法对从原料乳中分离出一株荧光假单胞菌胞外耐热蛋白酶进行纯化及特性研究,将纯化后的单一蛋白酶进行SDS-PAGE分子质量测定、最适温度、最适pH值、热稳定性、金属离子对其影响及氨基酸种类分析.纯化后蛋白酶的分子质量为47kD,经纯化后蛋白酶比活提高了近61.38倍;最适温度和pH值分别为30℃和7.0;二硫苏糖醇对蛋白酶活性具有一定的抑制作用,Fe2+可以促进蛋白酶活性的提高;该酶具有较强耐热性,原酶液经130℃热处理3min后,残留酶活仍超过原酶液的47.67％;该蛋白酶氨基酸组成中甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)和谷氨酸(Glu)的含量占明显优势,其中Gly含量最高,摩尔分数高达42％.研究将有助于进一步理解荧光假单胞菌蛋白酶的特性和该蛋白酶与UHT乳陈化、凝胶之间关系.