大豆疫霉TaqMan MGB探针实时荧光PCR检测方法

摘要

大豆疫病是大豆的毁灭性病害,本研究以大豆疫霉及其近似种或相关种共15种37个菌株为研究对象,通过对这些真菌rDNA内间隔转录区(ITS)序列进行测定,并结合基因库报道的疫霉属真菌rDNA序列和线粒体序列进行序列比较和分析,设计了检测大豆疫病菌的TaqMan MGB实时荧光PCR的引物和探针,优化了反应条件,筛选出特异性探针,建立了大豆疫霉TaqMan MGB探针单重荧光PCR检测方法和双重荧光PCR检测方法,其中双重荧光PCR检测方法实现了在同一反应管中既能特异性检测出大豆疫霉菌,又能通过通用探针实现实验过程的质量控制.本研究建立的检测方法特异性强,结果可靠,检测速度快.与其他病原菌实时荧光PCR检测方法相比,本方法由于反应体系仅为5μ1,而使检测成本明显降低,在实际检测过程中,特别在口岸具有推广应用价值.