三角褐指藻Δ5-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及功能验证

摘要

Δ5-脂肪酸脱氢酶是合成花生四烯酸的关键酶.根据已报道的Δ5-脂肪酸脱氢酶基因设计引物,分别从三角褐指藻基因组DNA和总cDNA中扩增得到1520bp和1410bp的特异片段,序列分析结果显示,结构基因中含有一个大小为110bp的内含子,这是国内外首次报道.将Δ5-脂肪酸脱氢酶基因亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2.0中,在大肠杆菌中筛选到含有目的片段的重组质粒pYPTD5,用电击转化的方法将重组质粒pYPTD5转化到营养缺陷型酿酒酵母菌株INVSc1中,在缺省培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株YPTD5.在合适的培养条件下,添加外源底物双高γ-亚麻酸和诱导物半乳糖,培养并收集菌体。通过脂肪酸甲酯气相色谱分析,表明三角褐指藻Δ5-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效的表达,可将双高γ-亚麻酸转化为花生四烯酸,其底物转化率达到了45.9%.