NK细胞活性

摘要： 目的探讨复方万年青胶囊联合氟尿嘧啶注射液(5-FU)对胃癌荷瘤小鼠NF-kb p65/p38水平的影响及其免疫调节作用,为明确药效机制提供实验依据。方法①建立BALB/c小鼠胃癌皮下移植肿瘤模型,除空白组外,将成瘤小鼠随机平分为6组,即模型对照组、5-FU对照组(70mg/kg)、复方万年青胶囊1倍临床剂量对照组(0.5g/kg)、复方万年青胶囊3倍临床剂量对照组(1.5g/kg)、复方万年青胶囊1倍临床剂量+5-FU联合组(0.5g/kg+70mg/kg)、复方万年青胶囊3倍临床剂量+5-FU联合组(1.5g/kg+70mg/kg),检测荷瘤小鼠治疗后NK细胞活性及血清酶学的变化;②Western Blot法检测荷瘤小鼠瘤体组织中NF-kb p65及p38蛋白表达情况。结果①复方万年青胶囊3倍临床剂量+5-FU联合组荷瘤小鼠血清中IgM、IgG、TNF-α活性不同程度降低(P<0.05,P<0.001),复方万年青胶囊1倍临床剂量+5-FU联合组荷瘤小鼠血清中IgM、IgG明显降低(P<0.01);与5-FU对照组比较,复方万年青胶囊3倍临床剂量+5-FU联合组荷瘤小鼠血清中IgG活性明显降低(P<0.01),复方万年青胶囊1倍临床剂量+5-FU联合组荷瘤小鼠血清中IgG活性极明显降低(P<0.001)。各实验组小鼠NK细胞杀伤率分别为81.5%、41.1%、159.6%、96.2%、86.3%、120.6%和194.2%。②5-FU对照组与复方万年青胶囊1倍、3倍临床剂量+5-FU联合组能够下调NF-kb p65/p38水平。结论复方万年青胶囊联合5-FU可通过增强NK细胞杀伤活性的途径来提高机体免疫力,其抗癌机制可能通过降低NF-kb p65/p38水平,抑制Bcl-2活化,从而抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡的发生。

摘要： 为研究羊奶粉的免疫调节功能,本试验以Balb/C健康小鼠为动物模型,生理盐水作对照,灌胃不同剂量的羊奶粉,探究羊奶粉对小鼠体重、胸腺/体重比、脾脏/体重比、小鼠脾淋巴细胞转化能力、迟发型变态反应(DTH)、抗体生成细胞、血清溶血素、自然杀伤细胞(NK cells)活性的影响,评价羊奶粉对小鼠的免疫调节作用。结果显示,与对照组相比,低剂量和高剂量羊奶粉对小鼠体重增长、脏器/体重比值均无显著影响(P>0.05);高剂量组小鼠淋巴细胞增殖能力显著增加(P0.05);各剂量组DTH程度显著提高(P0.05)。以上结果表明,羊奶粉具有增强小鼠免疫力的作用。

摘要： 目的:探讨噬血细胞综合征(hemophagocytic syndrome,HPS)的临床、实验室检查结果及预后影响因素,以提高对噬血细胞综合征的认识,了解影响预后的相关因素。方法:分析2012年01月至2020年01月我院收治的27例HPS患者的病因、临床表现、实验室检查结果及转归。结果:27例患者中,淋巴瘤相关HPS 10例,感染相关性HPS 9例,自身免疫病相关HPS 3例,1例伴UNC13D突变的原发性HPS,4例病因不明。HLH-2004诊断标准中各指标的符合率:发热、铁蛋白升高、NK细胞活性减低(100%),两系或三系血细胞减少(92.59%),sC D25升高(90.91%),脾大(85.19%),低纤维蛋白原血症(77.78%),高甘油三脂血症(74.07%),噬血现象(72.22%)。比较存活组和死亡组初诊时各实验室结果指标,血小板、纤维蛋白原、血清铁蛋白、乳酸脱氢酶水平两组差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析显示血小板减少是患者的独立预后危险因素(OR=0.955,95%CI:0.917~0.996,P=0.031)。结论:HPS临床表现多样,病情进展迅速,死亡率高,发热、至少两系血细胞减低、NK细胞活性降低、铁蛋白及sC D25水平明显升高在诊断中的灵敏度高。谷草转氨酶增高、β_(2)-微球蛋白增高、高密度胆固醇降低、低钠血症有利于诊断HPS。血小板计数减少是疾病的独立不良预后因素。

摘要： 鸡病毒性疾病对养鸡业危害严重,目前在兽医临床上尚无特效药物可以治疗。干扰素是一类动物机体产生的具有多重生物学功能的蛋白质,它能够激活机体内抗病毒效应从而起到抗病毒作用。尤其是α干扰素,其属于细胞水平上的广谱抗病毒、抗肿瘤和具有免疫激活功能活性的细胞因子,其主要通过抑制病毒增殖、增强抗肿瘤活性以及加强NK细胞活性,增强其杀伤病毒感染细胞的能力,是一类具有临床应用价值的抗病毒制剂。

摘要： 目的 总结非霍奇金淋巴瘤(NHL)相关性嗜血细胞综合征(HLH)的临床特点及诊治方法。方法 回顾性分析13例NHL相关性HLH患者的临床资料。结果 13例NHL相关性HLH患者中,原发病为NK/T细胞淋巴瘤3例,T细胞淋巴瘤6例,B细胞淋巴瘤4例。13例患者均出现持续性不规则高热,10例患者伴有脾肿大,10例患者出现双下肢水肿,仅1例患者伴有肝肿大,1例伴有皮疹。13例患者血清铁蛋白水平异常升高。12例患者进行了可溶性CD25(sCD25)水平及NK细胞活性检测,1例未进行检测。12例患者均出现sCD25水平异常升高,仅6例患者检测到NK细胞活性减低。5例患者仅接受甲强龙或泼尼松治疗,4例患者接受EP方案(依托泊苷+甲强龙)治疗,3例接受R-DEP方案(芦可替尼+阿霉素脂质体+依托泊苷+甲强龙)治疗,1例NK/T细胞淋巴瘤相关性HLH患者初始在EP联合芦可替尼的基础上接受了西达本胺及tislelizumab治疗,嗜血症状得到控制后随即进入NK/T细胞淋巴瘤的治疗,最后成功进行了造血干细胞移植。截止至2021年9月1日,11例患者死亡,1例治疗后存活至今,另1例目前正在接受抗嗜血治疗中。13例患者中位生存时间64 d(14~347 d)。结论 NHL相关性HLH临床表现复杂多样且缺乏特异性,目前尚缺乏统一的诊断标准,多数参照HLH-2004标准,目前治疗上仍推荐HLH-94方案作为首选诱导治疗方案,芦可替尼有望与化疗联合作为诱导治疗方案。

摘要： 本研究探索了一种益生菌植物提取物复合生物制剂制备方法并验证了其在提高动物机体免疫力方面的应用效果。通过菌株复配的方式开发免疫效果协同增强的复合益生菌,经过添加植物提取物之后制成益生菌植物提取物复合生物制剂;再通过对NK细胞(自然杀伤细胞)活性的影响、对小鼠免疫机能的影响、在育雏蛋鸡中的应用等实验来验证其提高动物免疫力的效果。本研究中制备的益生菌植物提取物复合生物制剂不仅能生成多种有机酸和酶类物质,抑制肠道内有害微生物的增殖,又可促进有益菌的增殖,形成一个良性循环;不仅可以为益生菌提供营养,还可以作为免疫刺激的辅助因子发挥作用,从而显著提高了动物的机体免疫能力。

摘要： 目的:拟通过5项免疫功能试验,评价乳清蛋白和小麦蛋白与酵母β-葡聚糖组合物是否具有增强免疫力的功效.方法:BALB/c小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组、组合物低、中、高剂量组.组合物剂量组灌胃组合物溶液,阳性对照组灌胃转移因子口服溶液,30 d后通过脾淋巴细胞增殖试验、迟发型变态反应试验、血清溶血素试验、小鼠碳廓清试验以及NK细胞活性试验.结果:与阴性对照组相比,组合物低剂量组可增强巨噬细胞的吞噬能力,中剂量组可提高小鼠脾淋巴细胞的增殖能力、血清溶血素的生成水平及增强巨噬细胞的吞噬能力,高剂量组可提高小鼠脾淋巴细胞的增殖能力及NK细胞活性.结论:乳清蛋白、小麦蛋白与酵母β-葡聚糖组合后具有良好的免疫增强功效,其作用以提高细胞免疫及增强巨噬细胞吞噬能力为主,以提高体液免疫及增强NK细胞活性为辅.

摘要： 目的 探讨全麻复合硬膜外麻醉对肺癌根治术患者外周血T细胞亚群及NK细胞活性的影响.方法 收集接受肺癌根治术的84例患者的病历资料,按照患者所行麻醉方式的不同对其进行分组,单纯行全麻者42例归为对照组,行全麻复合硬膜外麻醉者42例纳入观察组,分析不同麻醉方式对患者外周血T细胞亚群及NK细胞活性影响的差异性.结果 术后24 h观察组与对照组患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK细胞水平均较术前明显降低,且术后24 h相比对照组患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK细胞水平,观察组患者以上指标水平明显更高(P0.05),但NK细胞水平较术前明显降低(P<0.05),且术后1周相比对照组患者,观察组患者的NK细胞水平更高(P<0.05).观察组患者的术后苏醒时间、术后拔管时间、自主呼吸恢复时间均明显短于对照组患者,2组差异有统计学意义(P<0.05).结论 相比单纯全麻,全麻复合硬膜外麻醉对肺癌根治术患者外周血T细胞亚群及NK细胞活性的影响更小,有助于患者术后的恢复.

摘要： 目的 研究灵芝沙棘雪莲片对小鼠免疫功能的影响.方法 分别以人体推荐量的10倍、20倍、30倍剂量,即0.17 g/kg·BW、0.34 g/kg·BW、0.50 g/kg·BW剂量经口给予小鼠30 d,测定小鼠体重、脏器/体重比值、细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞吞噬功能以及自然杀伤(NK)细胞活性.结果 与对照组相比,0.50 g/kg·BW剂量组能增强小鼠对绵羊红细胞(SRBC)诱发的迟发性变态反应(DTH)反应(P＜0.05),增强小鼠抗体生成细胞数量和血清溶血素水平(P＜0.05),提高小鼠碳廓清吞噬指数、巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬百分率和吞噬指数(P＜0.05).各剂量组对小鼠体重增长、脏器/体重比值、刀豆蛋白A (Con A)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力、NK细胞活性均无显著影响(P＞0.05).结论 灵芝沙棘雪莲片具有增强小鼠免疫力的功能.

摘要： 目的:探讨慢性疲劳大鼠睡眠剥夺后对血清细胞因子,海马TNF-αmRNA、IFN-γmRNA表达及脾脏NK细胞活性的影响. 方法:采用负重力竭游泳法制备CFS大鼠模型,用小平台水环境法剥夺睡眠12h,将20只SD大鼠随机分为对照组和睡眠剥夺组,连续应激21d后,Morris水迷宫测量大鼠学习记忆能力;采用ELISA检测血清TNF-α、IFN-γ、TGF-β的含量;Rael time-PCR检测海马TNF-αmRNA、IFN-γmRNA的表达;LDH释放法检测脾脏NK细胞活性. 结果:与对照组相比,睡眠剥夺组体重在7d、21d明显降低(p＜0.01),14d降低(p＜0.05);力竭时间7d增长(p＜0.05),14d减少(p＞0.05),21d明显增长趋势(p＞0.05);Morris水迷空间搜索实验,总路程、平均速度提高(p＜0.05),经过平台次数降低(p＜0.05);血清IFN-γ含量和海马IFN-γmRNA表达升高(p＜0.05);脾脏NK细胞活性降低(P＜0.05). 结论:CFS出现的认知功能下降、抑郁等神经精神症状很可能是睡眠质量差导致,长期睡眠不足使NK细胞活性降低,是机体对致病微生物的抵抗能力崩渍的主要原因.

摘要： 目的:探讨慢性疲劳大鼠睡眠剥夺后对血清细胞因子,海马TNF-αmRNA、IFN-γmRNA表达及脾脏NK细胞活性的影响. 方法:采用负重力竭游泳法制备CFS大鼠模型,用小平台水环境法剥夺睡眠12h,将20只SD大鼠随机分为对照组和睡眠剥夺组,连续应激21d后,Morris水迷宫测量大鼠学习记忆能力;采用ELISA检测血清TNF-α、IFN-γ、TGF-β的含量;Rael time-PCR检测海马TNF-αmRNA、IFN-γmRNA的表达;LDH释放法检测脾脏NK细胞活性. 结果:与对照组相比,睡眠剥夺组体重在7d、21d明显降低(p＜0.01),14d降低(p＜0.05);力竭时间7d增长(p＜0.05),14d减少(p＞0.05),21d明显增长趋势(p＞0.05);Morris水迷空间搜索实验,总路程、平均速度提高(p＜0.05),经过平台次数降低(p＜0.05);血清IFN-γ含量和海马IFN-γmRNA表达升高(p＜0.05);脾脏NK细胞活性降低(P＜0.05). 结论:CFS出现的认知功能下降、抑郁等神经精神症状很可能是睡眠质量差导致,长期睡眠不足使NK细胞活性降低,是机体对致病微生物的抵抗能力崩渍的主要原因.

摘要： 目的:探讨慢性疲劳大鼠睡眠剥夺后对血清细胞因子,海马TNF-αmRNA、IFN-γmRNA表达及脾脏NK细胞活性的影响. 方法:采用负重力竭游泳法制备CFS大鼠模型,用小平台水环境法剥夺睡眠12h,将20只SD大鼠随机分为对照组和睡眠剥夺组,连续应激21d后,Morris水迷宫测量大鼠学习记忆能力;采用ELISA检测血清TNF-α、IFN-γ、TGF-β的含量;Rael time-PCR检测海马TNF-αmRNA、IFN-γmRNA的表达;LDH释放法检测脾脏NK细胞活性. 结果:与对照组相比,睡眠剥夺组体重在7d、21d明显降低(p＜0.01),14d降低(p＜0.05);力竭时间7d增长(p＜0.05),14d减少(p＞0.05),21d明显增长趋势(p＞0.05);Morris水迷空间搜索实验,总路程、平均速度提高(p＜0.05),经过平台次数降低(p＜0.05);血清IFN-γ含量和海马IFN-γmRNA表达升高(p＜0.05);脾脏NK细胞活性降低(P＜0.05). 结论:CFS出现的认知功能下降、抑郁等神经精神症状很可能是睡眠质量差导致,长期睡眠不足使NK细胞活性降低,是机体对致病微生物的抵抗能力崩渍的主要原因.

摘要： 目的:探讨慢性疲劳大鼠睡眠剥夺后对血清细胞因子,海马TNF-αmRNA、IFN-γmRNA表达及脾脏NK细胞活性的影响. 方法:采用负重力竭游泳法制备CFS大鼠模型,用小平台水环境法剥夺睡眠12h,将20只SD大鼠随机分为对照组和睡眠剥夺组,连续应激21d后,Morris水迷宫测量大鼠学习记忆能力;采用ELISA检测血清TNF-α、IFN-γ、TGF-β的含量;Rael time-PCR检测海马TNF-αmRNA、IFN-γmRNA的表达;LDH释放法检测脾脏NK细胞活性. 结果:与对照组相比,睡眠剥夺组体重在7d、21d明显降低(p＜0.01),14d降低(p＜0.05);力竭时间7d增长(p＜0.05),14d减少(p＞0.05),21d明显增长趋势(p＞0.05);Morris水迷空间搜索实验,总路程、平均速度提高(p＜0.05),经过平台次数降低(p＜0.05);血清IFN-γ含量和海马IFN-γmRNA表达升高(p＜0.05);脾脏NK细胞活性降低(P＜0.05). 结论:CFS出现的认知功能下降、抑郁等神经精神症状很可能是睡眠质量差导致,长期睡眠不足使NK细胞活性降低,是机体对致病微生物的抵抗能力崩渍的主要原因.

摘要： 目的:探讨慢性疲劳大鼠睡眠剥夺后对血清细胞因子,海马TNF-αmRNA、IFN-γmRNA表达及脾脏NK细胞活性的影响. 方法:采用负重力竭游泳法制备CFS大鼠模型,用小平台水环境法剥夺睡眠12h,将20只SD大鼠随机分为对照组和睡眠剥夺组,连续应激21d后,Morris水迷宫测量大鼠学习记忆能力;采用ELISA检测血清TNF-α、IFN-γ、TGF-β的含量;Rael time-PCR检测海马TNF-αmRNA、IFN-γmRNA的表达;LDH释放法检测脾脏NK细胞活性. 结果:与对照组相比,睡眠剥夺组体重在7d、21d明显降低(p＜0.01),14d降低(p＜0.05);力竭时间7d增长(p＜0.05),14d减少(p＞0.05),21d明显增长趋势(p＞0.05);Morris水迷空间搜索实验,总路程、平均速度提高(p＜0.05),经过平台次数降低(p＜0.05);血清IFN-γ含量和海马IFN-γmRNA表达升高(p＜0.05);脾脏NK细胞活性降低(P＜0.05). 结论:CFS出现的认知功能下降、抑郁等神经精神症状很可能是睡眠质量差导致,长期睡眠不足使NK细胞活性降低,是机体对致病微生物的抵抗能力崩渍的主要原因.

摘要： 目的:由于裸鼠具有B细胞免疫功能及NK细胞活性,故在其体内很难形成全身系统的白血病模型,多数仅能于皮下成瘤.裸鼠体内白血病成瘤实验多需放射或手术手段.本研究试图使用非手术方法,在裸鼠建立白血病体内播散模型.方法：4～6周龄雌性BALB/c裸鼠12只购自中山大学医科大学动物中心,在SPF级动物合格环境下饲养.

摘要： 目的:由于裸鼠具有B细胞免疫功能及NK细胞活性,故在其体内很难形成全身系统的白血病模型,多数仅能于皮下成瘤.裸鼠体内白血病成瘤实验多需放射或手术手段.本研究试图使用非手术方法,在裸鼠建立白血病体内播散模型.方法：4～6周龄雌性BALB/c裸鼠12只购自中山大学医科大学动物中心,在SPF级动物合格环境下饲养.

摘要： 目的:由于裸鼠具有B细胞免疫功能及NK细胞活性,故在其体内很难形成全身系统的白血病模型,多数仅能于皮下成瘤.裸鼠体内白血病成瘤实验多需放射或手术手段.本研究试图使用非手术方法,在裸鼠建立白血病体内播散模型.方法：4～6周龄雌性BALB/c裸鼠12只购自中山大学医科大学动物中心,在SPF级动物合格环境下饲养.

摘要： 目的:由于裸鼠具有B细胞免疫功能及NK细胞活性,故在其体内很难形成全身系统的白血病模型,多数仅能于皮下成瘤.裸鼠体内白血病成瘤实验多需放射或手术手段.本研究试图使用非手术方法,在裸鼠建立白血病体内播散模型.方法：4～6周龄雌性BALB/c裸鼠12只购自中山大学医科大学动物中心,在SPF级动物合格环境下饲养.

摘要： 目的：探讨五味中药复方制剂对小鼠细胞免疫和NK细胞活性的影响。方法：给予6-8周龄,18-22g,雌性BALB／C小鼠此五味中药复方制剂,剂量分别为0,0.53,1.6和4.8g／kg.bw,干预30天后,进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应(DTH)和NK细胞活性检测,测定其淋巴细胞增殖能力、DTH的程度和NK细胞活性。结果：与对照组相比,五味中药复方制剂能明显增加小鼠淋巴细胞的增殖能力、DTH的程度和NK细胞的活性。结论：五味中药复方制剂具有增加小鼠细胞免疫和NK细胞活性的功能。

摘要： 本发明涉及NK细胞的活性检查方法，其包括：特异性地刺激样品内的NK细胞上的可区别的2种以上的因子的步骤；测定所述NK细胞的协同活化程度的步骤；及对正常NK细胞对比所述NK细胞的协同活化程度进行比较的步骤，及NK细胞的活性检查用组合物。另外，本发明涉及与NK细胞的协同活性关联的疾病的诊断用试剂盒，其包含所述组合物。

摘要： 一种基于流式细胞术检测NK细胞杀伤活性的方法，包括以下步骤：步骤1，接种并培养细胞；步骤2，收集细胞并染色：采用CD2‑APC荧光染料对NK细胞和肿瘤细胞进行分群，随后采用Annexin V‑FITC/SYTOX Green对凋亡和坏死的靶细胞进行染色；步骤3，流式上机检测。本发明使用Annexin V‑FITC/SYTOX Green双染，采用相同检测通道将凋亡细胞和坏死细胞全部标记出来，显著降低了对NK杀伤后肿瘤细胞各种不同状态(早期凋亡、中晚期凋亡或坏死细胞)的漏检。

摘要： 本发明涉及NK细胞的活性检查方法，其包括：特异性地刺激样品内的NK细胞上的可区别的2种以上的因子的步骤；测定所述NK细胞的协同活化程度的步骤；及对正常NK细胞对比所述NK细胞的协同活化程度进行比较的步骤，及NK细胞的活性检查用组合物。另外，本发明涉及与NK细胞的协同活性关联的疾病的诊断用试剂盒，其包含所述组合物。

摘要： 本申请针对可用于减少受试者中髓系衍生的抑制细胞(MDSC)、肿瘤相关巨噬细胞(TAM)或两者的数量的方法和组合物。所述方法包括向受试者施用与由MDSC和/或TAM表达的抗原结合的抗原结合蛋白，或施用表达与由MDSC和/或TAM表达的抗原结合的抗原结合蛋白的经修饰的T细胞或NK‑92细胞，或施用两者的组合。例如，所述抗原结合蛋白可以结合由MDSC和/或TAM表达的CD33。所述方法和组合物可用于治疗与MDSC和/或TAM浸润到组织或肿瘤中有关的疾病。

摘要： 本发明公开了葡甘聚糖在提高NK细胞杀伤活性、制备NK细胞培养基方面的应用。自然杀伤细胞(NK细胞，CD3‑CD56+)作为机体固有免疫的重要成员，是抗肿瘤免疫的先行者，在肿瘤免疫方面发挥着至关重要的作用。如何提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤力，是大规模使用NK细胞进行细胞免疫治疗的关键。本发明实验结果表明，魔芋葡甘聚糖具有提高NK细胞对肿瘤细胞杀伤力的活性，可以用于制备提高NK细胞对肿瘤细胞杀伤力的细胞培养基。

摘要： 本发明的目的在于，提供能够使T细胞或NK细胞高效地增殖并且维持该细胞的状态(例如未分化性)的T细胞或NK细胞的制造方法、T细胞或NK细胞的培养用培养基、T细胞或NK细胞的培养方法、维持未分化T细胞的未分化状态的方法和T细胞或NK细胞的增殖促进剂。本发明涉及T细胞或NK细胞的制造方法等，其包括如下步骤：在含有式(X‑1)或式(X‑2)所示的双苄基异喹啉生物碱或者其中的1个醚键断裂后的化合物或其药学上可接受的盐的培养基中培养T细胞或NK细胞。

摘要： NK细胞活化方法中，通过CD52激动剂刺激含T细胞和NK细胞的单核细胞而使NK细胞活化。采用CD52激动剂的单核细胞的刺激在细胞因子的存在下进行。

摘要： 本发明涉及生物医药技术领域，提供了白细胞介素‑2拟似物SIL‑2、适用于NK细胞体外扩增的饲养细胞系及其构建，以及提升NK细胞增殖活性与杀伤活性的方法。饲养层细胞分泌的IL‑2拟似物相较于天然IL‑2具有更高的白细胞介素2受体βγ(IL‑2βγ)的亲和力，在千皮克/mL浓度下即可维持NK细胞的增殖活性；该IL‑2拟似物可以促进NK细胞表面OX40的表达，并形成OX40‑OX40L正反馈环，促进NK细胞的增殖与细胞毒活性。本发明实现了NK的无细胞因子的规模化扩增，在21天的扩增周期中实现2000倍以上的扩增效率，扩增细胞对淋巴瘤、肝细胞肝癌、卵巢癌等多种肿瘤具有显著的体内杀伤活性，为肿瘤的NK过继性免疫治疗提供了一种有效且低成本的的扩增方法，并可显著提高扩增NK的杀伤活性。

摘要： 本发明公开一种体外稳定扩增高纯度、高细胞毒活性NK细胞的扩增组合物，体外稳定扩增NK细胞方法包括以下步骤：(1)分离单个核细胞；(2)免疫分选去除CD3+T淋巴细胞；(3)加入含NK细胞扩增所需细胞因子(终浓度为10‑500ng/ml咖啡碱、10‑500ng/ml茶多酚、和500‑2000U/ml IL‑2)的无血清培养基；(4)第2‑5天NK细胞全换液；(5)NK细胞收获。该方法减少现有技术中使用各种细胞因子，降低成本，通过使用茶叶中的咖啡碱和茶多酚等即可建立稳定的、大量扩增高纯度、高细胞毒活性的NK细胞，简单可行。同时开发茶叶中有效成分的咖啡碱和茶多酚的用途和使用价值；同时获得的大量高纯度、高细胞毒活性NK细胞，可用于肿瘤细胞免疫治疗。

摘要： 本发明涉公开了一种提升脐血来源NK细胞细胞活性的体外培养方法，包括以下原料：生物安全柜，流式细胞仪，水平温控离心机，灭菌锅，CO2培养箱，倒置显微镜，三分类血液分析仪，细胞计数仪，移液器，‑20°C冰箱4°C冰箱，75cm2培养瓶，225cm2培养瓶，2L培养袋，10ml移液管，50ml高效离心管，15ml和50ml离心管、250ml离心管，医用无菌手套，一次性无菌帽子和无菌手套，无血清培养基LonzaX‑VIVO15，重组白细胞介素2，重组白细胞介素15，0.4％苔盼蓝溶液，生理盐水，人淋巴细胞分离液，γ干扰素，重组白细胞介素1α。该方法由于对相关细胞因子加香菇多糖培养脐血NK细胞，使该方法培养NK细胞成本不高，增殖速度快13‑15天，增值倍数高270倍左右，细胞活性高，细胞表型91％。