摘要:
目的:基于蛋白组学阐明小儿开胃增食合剂(Xiaoer-Kaiwei-Zengshi mixture,XKZM)治疗小儿厌食症(infantile anorexia,IA)大鼠的作用机制,鉴定其关键蛋白,并探索其可能的通路。方法:利用特制饲料诱导建立SD大鼠IA模型,随后将造模成功的大鼠随机分为模型组(model组)、西药多潘立酮(domperidone,DPD)对照组(DPD组)、低剂量XKZM(low-dose XKZM,LXKZM)组、中剂量XKZM(medium-dose XKZM,MXKZM)组和高剂量XKZM(high-dose XKZM,HXKZM)组,另设空白对照组(control组),每组6只。对造模期间和干预期间大鼠的进食量和体重进行测量;HE染色观察大鼠空肠组织病理变化;基于串联质量标签(tandem mass tag,TMT)定量蛋白质组学技术对大鼠空肠组织中的差异蛋白进行检测,对差异蛋白进行GO(Gene Ontology)分析、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析及相互作用分析,Western blot实验验证XKZM调控的差异蛋白表达,筛选XKZM的核心靶点。结果:与control组相比,model组大鼠体重和进食量显著降低(P<0.05),空肠组织出现结构损伤和炎症反应;给予IA大鼠XKZM干预后,LXKZM、MXKZM和HXKZM组大鼠体重和进食量较model组均显著增加(P<0.05),胃组织的病理变化明显改善,并均呈剂量依赖性。蛋白组学结果显示,本次研究中共定量了4 116种蛋白,与control组比较,model组空肠组织中检测到32个差异蛋白(上调和下调蛋白数分别为20和12);与model组比较,XKZM组检测到71个差异蛋白(上调和下调蛋白数分别为29和42);GO分析表明这些差异蛋白主要被富集到细胞过程、ATP结合、抗氧化活性、蛋白结合和信号转导等过程;KEGG通路分析表明差异蛋白被富集到了糖酵解和葡萄糖代谢合成、生物合成、胰岛素相关信号等信号通路。蛋白相互作用分析结果表明,Nqo1[NAD(P)H quinone dehydrogenase 1]、Gsta4(glutathione S-transferase alpha 4)、ApoE(apolipoprotein E)、Gpx1(glutathione peroxidase 1)、Gpd2(glycerol-3-phosphate dehydrogenase 2)等蛋白作为枢纽与其它蛋白发生相互作用。Western blot结果表明,与control组比较,model组大鼠空肠组织中SULT1C2(sulfotransferase family 1C member 2)和CRABP2(cellular retinoic acid-binding protein 2)蛋白表达减少(P<0.05),ENO3(enolase 3)和KRT5(keratin 5)蛋白表达增加(P<0.05);与model组比较,XKZM组SULT1C2和CRABP2蛋白表达增加(P<0.05),ENO3和KRT5蛋白表达减少(P<0.05)。这些差异蛋白的表达变化趋势同蛋白组学结果一致。结论:XKZM可提高IA大鼠空肠组织中血脂代谢相关因子表达,进一步可能通过促进血脂代谢,影响与之相关的糖酵解和葡萄糖代谢合成、氨基酸的生物合成、碳代谢、ATP生成等信号通路,达到治疗IA的效果。