NADPH

摘要： 目的研究白藜芦醇(resveratrol, RSV)缓解脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤的机制。方法随机选择40只8周龄雄性ICR小鼠,将其随机分成5组,对照组、模型组、实验组(100、300、500 mg/kg),分别用生理盐水或白藜芦醇灌胃预处理2周。用4%水合氯醛麻醉小鼠,经气道滴入2.5 mg/kg LPS复制急性肺损伤模型,对照组滴加生理盐水。构建模型后6 h,处死成功诱发急性肺损伤的小鼠,取其肺组织进行肺湿重与干重(W/D)比测定,进行组织病理学观察;利用NADP;/NADPH检测试剂盒检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性,利用qRT-PCR与免疫印迹法对NADPH氧化酶亚基p47phox、p22phox表达水平进行检测。结果通过气道滴入LPS成功构建急性肺损伤小鼠模型;通过病理学观察、测定肺W/D,证明白藜芦醇以剂量依赖的方式有效缓解了LPS诱导的肺损伤;与模型组相比,实验组NADP;/NADPH比值显著降低;qRT-PCR和Western blot实验结果显示,与模型组相比,白藜芦醇显著降低了NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox的表达水平。结论白藜芦醇通过降低NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox的表达水平,降低肺组织NADP;/NADPH比值,缓解LPS诱导的急性肺损伤。

摘要： 建立了超高效液相色谱-质谱联用法同时测定细胞内4种吡啶核苷酸辅酶(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP^(+))以及它们的还原态(NADH和NADPH))的方法。样品经甲醇低温快速提取后,在新型混合模式Atlantis PREMIER BEH C_(18)AX色谱柱上分离,10 mmol/L甲酸铵-乙腈作为流动相在8 min内完成梯度洗脱分离,采用质谱多反应检测(MRM)模式,负离子[M-H]^(-)扫描检测。对于4种吡啶核苷酸辅酶,本方法均在较宽浓度范围内呈良好线性关系,检出限和定量限分别在0.03~0.30 pmol和0.06~1.20 pmol范围内;检测准确度在92.7%~107.6%之间,相对标准偏差在1.98%~7.57%之间。该方法操作简便、分析快速、准确度高、灵敏度好,适用于人和微生物等多种细胞样品中吡啶核苷酸辅酶的快速定量测定,为细胞生理代谢研究提供可靠的技术支持。

摘要： 非蛋白氨基酸5-氨基乙酰丙酸是合成四氢吡咯化合物的前体物,被广泛应用于医药、农业和畜牧业。为提升5-氨基乙酰丙酸合成效率,该研究以谷氨酸棒杆菌Corynebacterium glutamicum ATCC13032为出发菌株,首先敲除L-谷氨酸输出蛋白编码基因NCgl1221阻断其分泌,菌株5-氨基乙酰丙酸产量达到0.62 g/L。然后利用脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)脚手架体系组装关键酶谷氨酰-tRNA还原酶和谷氨酸-1-半醛氨基转移酶,当二者比例为2∶1时最有利于5-氨基乙酰丙酸的合成,产量为0.84 g/L;为增强三羧酸(tricarboxylic acid,TCA)循环,分别通过过表达pyc、ppc和pckA强化回补途径,结合过表达gltA强化柠檬酸合成,结果表明以共表达pckA和gltA的效果最佳;在此基础上通过敲除aceA并过表达pntAB以增强α-酮戊二酸和NADPH供应,所获菌株ALA-10的5-氨基乙酰丙酸产量为1.47 g/L。该研究可为提升5-氨基乙酰丙酸的发酵合成效率提供参考。

摘要： 目的探讨NADPH氧化酶中的NOX2和NOX4介导的活性氧(ROS)在特发性炎性肌病(IIM)发病机制中的作用及意义。方法将14只健康雌性BALB/c小鼠随机分为对照组(n=6)和EAM组(n=8),EAM组小鼠采用豚鼠骨骼肌匀浆蛋白免疫诱导实验性自身免疫性肌炎动物模型。观察小鼠的体重变化、临床表现,测定其血清肌酶水平、四肢肌力及骨骼肌组织病理改变;并采用免疫组织化学法、分光光度法和ELISA法分别检测各组小鼠骨骼肌组织中NOX2、NOX4、NADPH及ROS的表达情况或含量。结果与对照组相比,末次免疫后1周EAM组小鼠体重下降,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,对照组小鼠骨骼肌纤维大小、形态、结构基本正常,有少量炎性细胞浸润,未见肌纤维萎缩、变性、坏死;EAM组小鼠骨骼肌纤维大小不一、粗细不等,有大量炎性细胞浸润,可见不同程度的萎缩、变性、坏死;EAM组小鼠骨骼肌组织HE染色病理学评分显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,EAM组小鼠骨骼肌组织中NADPH含量降低、ROS含量升高(P<0.05)。免疫组化染色结果显示,NOX2和NOX4在EAM组小鼠骨骼肌组织中的表达均高于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,EAM组小鼠骨骼肌组织中ROS的含量与NOX2、NOX4的免疫组化评分均呈正相关(P<0.05),而与NADPH的含量呈负相关(P<0.05);EAM组小鼠骨骼肌组织HE染色病理学评分与NOX2、NOX4的免疫组化评分及ROS的含量均呈正相关(P<0.05),而与NADPH的含量呈负相关(P<0.05)。结论NADPH氧化酶中的NOX2和NOX4可能通过消耗NADPH产生大量的ROS,导致组织细胞氧化性损伤并诱导铁死亡反应来参与IIM的发病;NADPH、NOX2、NOX4和ROS有望成为新的评价IIM肌肉组织损伤程度的指标。

摘要： NADPH作为光合作用在光反应阶段的重要产物,不仅是活泼的还原剂,同时也是重要的贮能物质.在为暗反应C3的还原提供还原剂的同时,NADPH还和ATP一起,为C3还原提供能量,并且提供比ATP更多的能量.

摘要： 目的:阐明硝酸盐促进环磷酸腺苷发酵合成的生理机制.方法:首先通过摇瓶实验确定硝酸钠最适添加条件,并在发酵罐上进行添加硝酸钠的cAMP发酵实验,然后对发酵过程动力学数据、硝酸盐代谢、还原力水平、关键酶活性、氨基酸水平和能量代谢进行分析.结果:确定在发酵24 h添加3 g/L-broth硝酸钠为最适条件,cAMP发酵产量和得率分别达到5.02 g/L和0.097 g/g,比对照批次分别提高了22.7％和29.8％,发酵性能得到明显提升.硝酸盐利用过程消耗了大量NADPH,缓解了对6-磷酸葡萄糖脱氢酶的抑制作用,同时糖酵解途径受到抑制而磷酸戊糖途径和三羧酸循环中关键酶活性明显提高,更多碳流分配到产物合成途径.此外,胞内前体氨基酸水平、NADH/NAD+和ATP/AMP均得到明显提高,为cAMP发酵合成提供了物质和能量基础.结论:硝酸盐利用过程消耗了大量的还原力,改变了代谢流分配情况,提高了胞内氨基酸水平和ATP合成,进而促进cAMP的发酵合成.硝酸盐作用机制的阐明,为提高核苷酸类发酵产品的生产水平提供了参考.

摘要： Microbial synthesis utilizes sustainable resources to produce valuable chemicals,as a potential alternative to petroleum-based chemical industry.Although metabolic engineering is an efficient method to enhance the biosynthesis efficacy of microorganisms,it requires complicated biological procedures.Herein,we report a facile intracellular catalysis system for augmenting the production of bio-based material in microorganism.Covalent linking of oligo(p-phenylenevinylene)(OPV)and cyclopentadienyl rhodium(Ⅲ)bipyridine offers intracellular metal catalyst(OPV-Rh).The OPV-Rh complex displayed certain resistance to toxic biomolecules,which guaranteed its catalytic activity in complicated biological systems.With uptake by Gramnegative bacterium Ralstonia eutropha H16(R.eutropha H16),the OPV-Rh complex promotes the transformation of intracellular NADP+to NADPH,which further enhances the biosynthesis of polyhydroxybutyrate(PHB)by this microorganism.This work demonstrates that synthetic metal catalyst can be employed for regulating microbial biosynthesis intracellularly.

摘要： 目的:探讨糖肾方对UUO模型小鼠肾脏氧化损伤的影响.方法:选用7周龄的雄性C57BL/6N小鼠,随机分为假手术组、UUO模型组(UUO模型7 d组、UUO模型14 d组)、糖肾方组(UUO+糖肾方7 d组、UUO+糖肾方14 d组)、福辛普利组(UUO+福辛普利7 d组、UUO+福辛普利14 d组).预给药5 d后造模,术后继续给药至7 d或14 d.观察肾脏病理,检测肾组织和血清MDA含量及SOD活性,并检测肾组织NADPH氧化酶的表达.结果:与假手术组比较,UUO模型小鼠肾间质炎性细胞呈弥漫性浸润,胶原纤维大量增生,糖肾方干预可以减轻UUO小鼠肾间质炎性细胞浸润,减少肾间质胶原纤维增生,降低肾组织和血清MDA含量、升高SOD活性,下调肾组织中Nox4和磷酸化p47phox的表达.结论:糖肾方可以改善UUO小鼠的肾组织病理损伤,减轻肾间质纤维化,机制可能与下调NADPH氧化酶的表达,从而降低UUO小鼠肾脏和血清的氧化应激水平有关.

摘要： 肿瘤的发生是一个复杂的动态过程,能量及代谢的改变是肿瘤的基本特征之一.代谢的重新编程满足了肿瘤细胞快速增殖的能量及生物合成需求.以葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)为限速酶的磷酸戊糖途径(PPP)是葡萄糖代谢的重要分支之一,并在肿瘤的核苷酸、脂质等生物的合成及维持氧化还原的动态平衡中起着至关重要的作用,但对G6PD在肿瘤中作用的总结和认识还有待进一步加强.本文通过总结肿瘤中G6PD主要参与的代谢改变及与G6PD表达、活性相关的信号通路的研究成果,发现靶向G6PD不仅可以抑制肿瘤细胞的快速发展,还能增强肿瘤对其他化疗药物及放疗的敏感性.

摘要： 由谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)分泌的初级代谢产物赖氨酸,其合成与胞内NADPH水平密切相关,但目前对谷氨酸棒杆菌中赖氨酸的生物合成与辅因子NADPH之间调节机制的理解仍然有限.作者以赖氨酸高产菌C.glutamicum XQ-5为出发菌株,通过阻断磷酸戊糖途径构建了低NADPH水平的重组菌C.glutamicum XQ-5△zwf∷pgi,使胞内每1万个细胞的NADPH量从3.57×10-8 μmol降低至1.12×10-8 μmol.接着通过强化磷酸戊糖途径构建了高NADPH水平的工程菌C.glutamicum XQ-5Apgi∷(zwf-gnd),使胞内每1万个细胞的NADPH量从3.57×10-8 μmol提高至1.80×10-7 μmol.通过摇瓶发酵,不同NADPH水平下菌株的菌体生长情况、菌体量和胞内副产物积累明显不同.利用转录组学和其他实验,发现重组菌C.glutamicum XQ-5△pgi∷(zwf-gnd)中的panD基因表达水平明显提高.当panD基因被敲除后,重组菌C.glutamicum XQ-5ApanD△pgi∷(zwf-gnd)的赖氨酸质量浓度从41 g/L提高至55g/L,比出发菌C.glutamicum XQ-5提高了14.3％.数据表明,通过过表达磷酸戊糖途径来提高NADPH水平导致赖氨酸水平下降的原因之一,是p anD基因表达水平的提高.这为进一步探究辅因子NADPH对赖氨酸生物合成的调控机制提供了坚实基础.

摘要： 依赖于NADPH的酮基还原酶在手性药物合成中的具有广泛的应用，本研究利用基因工程重组的酮基还原酶转化COBE为R-CHBE。

摘要： 依赖于NADPH的酮基还原酶在手性药物合成中的具有广泛的应用，本研究利用基因工程重组的酮基还原酶转化COBE为R-CHBE。

摘要： 依赖于NADPH的酮基还原酶在手性药物合成中的具有广泛的应用，本研究利用基因工程重组的酮基还原酶转化COBE为R-CHBE。

摘要： 依赖于NADPH的酮基还原酶在手性药物合成中的具有广泛的应用，本研究利用基因工程重组的酮基还原酶转化COBE为R-CHBE。

摘要： 本发明涉及用于生产1,2‑丙二醇的重组微生物和制备1,2‑丙二醇的方法。本发明的微生物以通过增强NADPH依赖的HAR活性改进1,2‑丙二醇生产的方式修饰。

摘要： 本发明属于医药化工领域，尤其涉及一种硅胶固定GDH催化制备NADPH的方法，以葡萄糖为底物，采用酶法合成NADPH，选取硅胶为载体，固定GDH后加入反应柱，以一定的流速将葡萄糖和氧化型NADP+混合液通过反应柱，实现固定化GDH制备NADPH。经实验，GDH的固载率为57％－62％，固定化GDH催化生成NADPH效率为0.53g/g－0.55g/g，与传统游离酶催化相比，固定化酶催化效率提高了60％－62％，说明固定化GDH催化制备NADPH时，具有酶催化效率高、生产成本低、产品纯度高的优点，适合工业化生产。

摘要： 本发明属于生物医药研究领域，具体涉及NADPH和维生素E联合用于制备预防或者治疗肝损伤的药物的应用。NADPH和维生素E在一定剂量范围内可发挥协同作用，对四氯化碳引起的肝损伤具有很好的保护作用，不仅能够显著降低谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)以及总胆红素(TB)的含量，而且能够增加肝细胞ATP的含量，降低肝细胞和血清中的MDA水平，提高肝细胞和血清中的SOD、GSH水平以及肝细胞中的CAT水平。通过细胞实验也证明，NADPH和维生素E联合用药可以显著减轻由CCl4诱导的肝损伤模型的肝细胞存活率的降低程度，从而发挥预防或者治疗肝损伤的作用。

摘要： 本发明涉及用于生产1,2‑丙二醇的重组微生物和制备1,2‑丙二醇的方法。本发明的微生物以通过增强NADPH依赖的HAR活性改进1,2‑丙二醇生产的方式修饰。

摘要： 本发明涉及一种NADPH氧化酶2抑制剂在制备药物中的用途，更具体地涉及一种NADPH氧化酶2的抑制剂在制备预防和/或治疗NAFLD药物中的应用。所述药物用于预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝病；所述药物用于预防和/或治疗高碳水化合物所诱发和/或恶化的非酒精性脂肪性肝病。本发明采用NADPH氧化酶2抑制剂，可有效地预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝病。

摘要： 本发明属于酶工程技术领域，具体涉及工程化NADPH依赖型苯甘氨酸脱氢酶及其应用，为开发对苯乙醛酸具有催化活力的NADPH依赖型苯甘氨酸脱氢酶，本发明通过对来源于Pseudomonas putida的谷氨酸脱氢酶进行底物特异性改造，使其对目标底物苯乙醛酸的催化活力提高了近40‑72倍，开发得到新的工程化NADPH依赖型苯甘氨酸脱氢酶。所得到的NADPH依赖型苯甘氨酸脱氢酶在生物催化法或发酵法制备L‑苯甘氨酸中均表现出良好的催化效率，说明本发明开发的NADPH依赖型苯甘氨酸脱氢酶能够高效合成手性L‑苯甘氨酸，为进一步开发L‑苯甘氨酸的高效生物合成工艺奠定了基础，应用价值巨大。

摘要： 为解决雷帕霉素类药物导致内皮依赖性的动脉血管舒张功能受损，本发明提供NADPH氧化酶2作为治疗靶点在制备治疗血管功能紊乱的药物中的应用。并提供抑制NADPH氧化酶2基因表达的物质或抑制NADPH氧化酶2活性的物质在制备治疗血管功能紊乱的药物中的应用。通过抑制NADPH氧化酶2活性或Nox2基因表达，或抑制EC细胞p38激酶和JNK1/2激酶的活性以抑制Nox2基因表达与活性，能够实现降低血液中活性氧的水平，提高NO水平，改善mTORC2抑制损伤的动脉内皮依赖性的血管舒张功能，从而降低雷帕霉素类药物的副作用、增强治疗效果，或应用于设计新的疗效更好、副作用更低的抑制mTOR类药物。本发明还提供降低血液中ROS含量并提高血液中NO含量的物质在制备治疗血管功能紊乱的药物中的应用。

摘要： 本发明提供了一种NADPH在制备预防和/或治疗神经退行性疾病药物中的应用，尤其是用于预防和/或治疗亨廷顿舞蹈病，通过立体定位技术向小鼠纹状体注射KA构建HD小鼠模型，证明NADPH显著降低了HD病程中的脂质过氧化和铁死亡，从而有效改善HD相关的神经行为学失常。本发明为NADPH防治神经退行性疾病提供了开发和治疗的靶点，同时为新药的开发提供了理论依据。

摘要： 本发明公开了野生大豆NADPH氧化酶基因GsRbohA1的应用。SEQ ID NO.1所示野生大豆NADPH氧化酶基因GsRbohA1在基因工程改造大豆对斜纹夜蛾抗性中的应用。过表达GsRbohA1的大豆毛状根，活性氧含量增加，对斜纹夜蛾抗性增加。抑制该基因表达的大豆毛状根，对斜纹夜蛾的抗性没有显著变化。野生大豆抗性单倍型GsRbohA1A转录更多的GsRbohA1，积累更多的ROS，对斜纹夜蛾抗性更强。本发明所述的野生大豆NADPH氧化酶基因GsRbohA1有潜力通过将野生大豆抗性单倍型GsRbohA1A导入到栽培大豆中，提高大豆对斜纹夜蛾的抗性。

摘要： 本发明一种可特异性清除NADPH的聚合物、多功能纳米药物及制备方法和应用，所述聚合物结构式为：可选择性清除肿瘤细胞内NADPH，利用聚合物和乳化剂构建一种负载有抑制PD‑1/PD‑L1相互作用的小分子拮抗剂的多功能纳米药物，该多功能纳米药物可通过双重靶向作用选择性地富集于缺氧肿瘤细胞，在利用低剂量放疗上调戊糖磷酸途径(PPP)以重塑肿瘤免疫代谢微环境时，肿瘤细胞内的NADPH也可被特异性清除而维持在较低水平，从而有利于固定放疗过程中肿瘤细胞的DNA损伤以促进肿瘤表面PD‑L1的表达及其免疫源性死亡。