摘要：
目的:探讨miR-143对妊娠期糖尿病(GDM)患者胎盘葡萄糖代谢和线粒体功能的作用。方法:选取行剖宫产的GDM患者30例,收集胎盘的原发性绒毛滋养细胞,分为两组:Diet组为单纯饮食组,Drug组给予胰岛素治疗,每组15例。对照组15例为无妊娠并发症的孕妇。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测三组人胎盘催乳素(hPL)的水平。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测三组miR-143的表达;糖代谢相关指标:Ⅰ型葡萄糖转运蛋白(GLUT1)、己糖激酶2(HK-2)、磷酸果糖激酶(PFK)、乳酸脱氢酶(LDH)的水平;线粒体呼吸功能相关指标:过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)、过氧化物酶体增殖物受体γ(PPARγ)的水平。以荧光素酶报告基因法寻找miR-143靶向作用的因子GLUT1,构建包含miR-143结合片段的GLUT13’UTR突变和野生型的荧光素酶报道质粒。以Drug组滋养细胞为研究对象,将突变型、野生型分别与miR-143模拟物(miR-143 mimics)、对照物(mimics NC)共同转入细胞,采用双荧光素酶实验检测miR-143对GLUT1靶向作用。以miR-143 mimics转染Drug组滋养细胞,RT-qPCR检测GLUT1、HK-2、PFK、LDH的水平以及PGC-1α、PPARγ的水平。结果:①对照组、Drug组、Diet组孕妇年龄、孕周、体重指数(BMI)、胎儿重量、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)血糖差异无统计学意义(P>0.05);Diet组较对照组、Drug组胎盘重量增加,胎儿/胎盘重量减少,差异有统计学意义(P<0.05)。②Diet组hPL含量明显高于对照组,Drug组hPL含量明显高于Diet组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。③miR-143在Drug组胎盘组织及绒毛滋养细胞中相对表达量均明显低于对照组和Diet组,差异均有统计学意义(P<0.05)。④与对照组和Diet组比较,Drug组胎盘中GLUT1、HK-2、PFK和LDH显著上调;与对照组比较,Diet组、Drug组中PGC-1α、PPARγ显著下调,且Drug组PGC-1α、PPARγ显著低于Diet组,差异均有统计学意义(P<0.05)。⑤miR-143可靶向调控GLUT1表达,可显著抑制野生型的萤光素酶活性,而不影响突变型的活性。⑥以miR-143 mimics转染Drug组绒毛滋养细胞后,GLUT1、HK-2、PFK和LDH表达明显降低,而PGC-1α、PPARγ表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:GDM患者hPL明显升高,miR-143表达降低,糖酵解增加,线粒体功能降低。miR-143可靶向调控GLUT1。miR-143表达可调控滋养细胞有氧糖酵解和线粒体功能。
