MG63

摘要： 目的:研究miR-203a-3p对骨肉瘤MG-63细胞凋亡和放射敏感性的影响及潜在作用机制.方法:qRT-PCR检测AKT2 mRNA的表达水平及不同放射剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射后MG-63细胞中miR-203a-3p的表达水平,克隆形成实验检测不同放射剂量处理后细胞存活分数,流式细胞术测定MG-63细胞凋亡率,Western blot检测AKT2蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-203a-3p和AKT2的调控关系.结果:随着放射剂量的增加,骨肉瘤细胞MG-63中miR-203a-3p的表达量被显著抑制(P<0.05);过表达miR-203a-3p可增加MG-63细胞的放射敏感性,促进MG-63细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-203a-3p靶向负调控AKT2的表达;抑制AKT2表达可增强骨肉瘤MG-63细胞的放射敏感性;过表达AKT2逆转了上调miR-203a-3p对MG-63细胞的放射增敏作用,抑制MG-63细胞凋亡.结论:miR-203a-3p通过靶向抑制AKT2表达增强骨肉瘤MG-63细胞的放射敏感性,促进肿瘤细胞凋亡.miR-203a-3p有望成为骨肉瘤临床放射增敏靶点.

摘要： 目的 通过慢病毒介导的干扰及过表达探讨HSP90β对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭的影响.方法 使用慢病毒构建干扰、过表达HSP90β的质粒,通过琼脂糖电泳、测序法鉴定.构建慢病毒质粒转染H1299细胞.使用嘌呤霉素对MG-63转染细胞进行筛选,计算转染效率.实验分干扰对照组(negative control-shRNA)、HSP90β干扰组(HSP90β-shRNA)、过表达对照组(negative control-pEZ)及HSP90β过表达组(HSP90β-pEZ).以实时荧光定量PCR、Western-blot法检测mRNA和蛋白表达水平.用Transwell小室法检测MG-63侵袭能力.结果 插入片段与目的 基因序列一致.嘌呤霉素MG-63细胞株最小致死浓度为3μg/mL,感染复数(multiplicity of in-fection,MOI)为200,感染效率为80％.HSP90β干扰效率为81.15％,过表达组HSP90β mRNA及蛋白相对表达增加(P＜0.01).干扰组HSP90β mRNA及蛋白的相对表达量下降(P＜0.01).与亲本细胞相比,shRNA-HSP90β组MG-63细胞的侵袭能力下降(P＜0.01),而pEZ-HSP90β组MG-63细胞侵袭能力增强(P＜0.05).shRNA-HSP90β组的MMP2、Snail表达减少,E-cadherin表达增加,而pEZ-HSP90β组的MMP2、Snail表达增加,E-cadherin表达减少.结论 干扰及过表达HSP90β的人骨肉瘤细胞系MG-63构建成功,并稳定表达;HSP90β可通过抑制E-cadherin表达增加MMP2、Snail表达,增强骨肉瘤细胞MG-63的侵袭性.

摘要： 目的 探讨HIF-3α在骨肉瘤侵袭转移中的作用,观察低氧对骨肉瘤MG-63细胞侵袭能力的影响.方法 收集15例骨肉瘤组织和15例骨软骨瘤组织,用免疫组织化学染色方法检测骨肉瘤组织和骨软骨瘤组织中HIF-3α的表达情况;MG-63细胞低氧刺激,用定量RT-PCR和Western Blot方法检测MG-63细胞中HIF-3α的表达情况;用细胞黏附实验、细胞迁移实验及细胞侵袭实验检测MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力.在MG-63细胞中,敲降HIF-3α或过表达HIF-3α后,检测低氧对细胞的黏附、迁移及侵袭能力的影响.结果 免疫组化结果显示骨肉瘤组织中HIF-3α高表达而骨软骨瘤组织中HIF-3α低表达.与常氧条件相比,低氧促进MG-63细胞中HIF-3αmRNA和HIF-3α蛋白的表达,低氧增强MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力.MG-63细胞中HIF-3α的敲降减弱了 MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力而HIF-3α的过表达增强了 MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力.结论 低氧促进了 MG-63细胞中的HIF-3α的表达,增强了 MG-63细胞的侵袭转移能力,HIF-3α在低氧诱导的MG-63细胞侵袭转移中具有重要作用.

摘要： 目的通过慢病毒介导的干扰及过表达探讨HSP90β对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭的影响。方法使用慢病毒构建干扰、过表达HSP90β的质粒,通过琼脂糖电泳、测序法鉴定构建慢病毒质粒转染H1299细胞使用嘌呤霉素对MG-63转染细胞进行筛选,计算转染效率实验分干扰对照组(negative control-shRNA)、HSP90p干扰组(HSP90β-shRNA)、过表达对照组(negative control-pEZ)及HSP90β过表达组(HSP90β-pEZ)。以实时荧光定量PCR、Western-blot法检测mRNA和蛋白表达水平。用Transwell小室法检测MG-63侵袭能力。结果插入片段与目的基因序列一致。嘌呤霉素MG-63细胞株最小致死浓度为3 pg/mL,感染复数(multiplicity of m-fection,MOI)为200,感染效率为80%。HSP90β干扰效率为81.15%,过表达组HSP90βmRNA及蛋白相对表达增加(P<0.01)。干扰组HSP90βmRNA及蛋白的相对表达量下降(P<0.01)。与亲本细胞相比,shRNA-HSP90β组MG-63细胞的侵袭能力下降(P<0.01),而pEZ-HSP90β组MG-63细胞侵袭能力增强(P<0.05)。shRNA-HSP90β组的MMP2、Snail表达减少,E-cadherin表达增加,而PEZ-HSP90β组的MMP2、Snail表达增加,E-cadherin表达减少。结论干扰及过表达HSP90β的人骨肉瘤细胞系MG-63构建成功,并稳定表达;HSP90β可通过抑制E-cadherin表达增加MMP2、Snail表达,增强骨肉瘤细胞MG-63的侵袭性。

摘要： 目的 探讨环形RNA(circRNA)检测hsa_circ_0004674通过微RNA-1254(miR-1254)调控表皮生长因子受体(EGFR)对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响.方法 通过微阵列分析筛选MG63细胞中差异表达的circRNA,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测hsa_circ_0004674在骨肉瘤细胞MG63和正常成骨细胞NHOst中的表达情况,分析hsa_circ_0004674对MG63细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响;miRanda预测hsa_circ_0004674和miR-1254之间的结合位点,双荧光素酶报告基因检测hsa_circ_0004674与miR-1254的相互作用,分析hsa_circ_0004674作为miR-1254的海绵对MG63细胞增殖、侵袭与迁移的影响;TargetScan预测miR-1254和EGFR之间的结合位点,双荧光素酶报告基因检测miR-1254与EGFR的相互作用,分析EGFR对MG 63细胞增殖、侵袭与迁移的影响.细胞增殖、侵袭和迁移能力分别用细胞克隆形成实验、细胞侵袭实验和细胞划痕实验检测.CCK-8法检测过表达EGFR对MG63细胞活力的影响,Western blot法检测hsa_circ_0004674和miR-1254对EGFR表达的影响及过表达EGFR对MG63细胞中Bax、Bcl-2表达的影响.结果 与NHOst细胞比较,MG63细胞中hsa_circ_0004674的表达水平上调(P<0.01),miR-1254的表达水平下调(P<0.01),EGFR mRNA表达水平上调(P<0.01),干扰hsa_circ_0004674或EGFR表达可使MG63细胞增殖、侵袭与迁移受抑制.miR-1254过表达也可抑制MG63细胞增殖、侵袭与迁移,而干扰miR-1254表达可促进MG63细胞增殖、侵袭与迁移;与仅干扰miR-1254表达比较,同时干扰hsa_circ_0004674和miR-1254的表达后,hsa_circ_0004674表达的下调能部分逆转miR-1254表达下调对细胞功能的影响.hsa_circ_00046743'UTR与miR-1254特异性结合,调控miR-1254的表达活性.miR-1254与EGFR 3'UTR特异性结合,调控EGFR的表达.miR-1254过表达降低MG63细胞的活力,EGFR过表达增加MG63细胞的活力.miR-1254过表达促进MG63细胞中Bax的表达,抑制Bcl-2的表达,而EGFR过表达抑制了MG63细胞中Bax的表达,促进Bcl-2的表达.结论 hsa_circ_0004674通过miR-1254调控EGFR表达,从而调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭.

摘要： 目的通过RNA干扰技术,敲低MG-63细胞和Saos2细胞中的GRM4基因,并对GRM4基因敲低后MG-63细胞和Saos2细胞的增殖及迁移能力进行研究。方法借助脂质体3000将GRM4的siRNA转染到MG-63细胞和Saos2细胞中,QPCR验证siRNA的干扰效果,通过CCK8法检测GRM4基因敲低后MG-63细胞和Saos2细胞的增殖情况,通过Transwell法检测GRM4基因敲低后MG-63细胞和Saos2细胞的迁移情况。结果siRNA成功转染到MG-63细胞中,干扰的效率为60%左右,转染到Saos2细胞中,干扰效率为61%左右;MG-63细胞和Saos2细胞的GRM4基因敲低后,细胞的增殖明显增加(MG-63 P=0.005;Saos2 P=0.003),并且细胞的迁移也明显增加(MG-63P=0.004;Saos2 P=0.006)。结论GRM4基因敲低后,MG-63细胞和Saos2细胞的增殖和迁移明显增强。

摘要： 目的 探讨缺氧条件下雷帕霉素促进人骨肉瘤MG63细胞凋亡是否与mTORC1/HIF-1α信号通路相关.方法 流式细胞技术检测人骨肉瘤MG63细胞凋亡率;Western blot检测人骨肉瘤MG63细胞TSC1、p-S6、HIF-1α、Bax、Bcl-2等蛋白表达;免疫荧光检测人骨肉瘤MG63细胞HIF-1α蛋白表达.结果 缺氧条件下,雷帕霉素促进人骨肉瘤MG63细胞凋亡,抑制人骨肉瘤MG63细胞mTORC1活性和HIF-1α蛋白表达;过表达HIF-1α能够抑制雷帕霉素对人骨肉瘤MG63细胞的促凋亡作用;mTORC1通过调控HIF-1α表达进而调节人骨肉瘤MG63细胞凋亡.结论 缺氧条件下雷帕霉素可通过抑制mTORC1/HIF-1α信号通路促进人骨肉瘤MG63细胞凋亡.

摘要： Objective To investigate the effect of dihydrocarbamide on the growth, apoptosis, invasion and migration of human osteosarcoma MG-63 cells by the PI3 K/Akt signaling pathway. Methods MG-63 cells were cultured in vitro, and MTT was performed to observe the cell proliferation after dihydrocarbamide treatment at different times. Annexin V-FITC/PI flow cytometry was used to determine the cell apoptosis rate. The cell invasion and migration were detected by Transwell method. The expression of cyclin D1, p-JAK2, p-STAT3, Bcl-xl, Bax and Bak proteins were detected by Western blot. Results Dihydrocarbamide inhibited the proliferation of MG-63 cells in vitro in a concentration-and time-dependent manner. Dihydrocarbamide promoted the cell apoptosis, and inhibited the migration and invasive ability of MG-63 cells. Additionally, dihydrocarbamide also decreased the expressions of Cyclin D1, p-JAK2, p-STAT3 and Bcl-xL, and increased the levels of Bax and Bak (P<0.05). Conclusion Dihydrocarbamide displays an anti-human osteosarcoma cell activity, which may be related to reduction of cell invasion, migration and growth, and induction of cell apoptosis by the JAK2/STAT3 pathway.%目的 研究二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)体外通过JAK2/STAT3信号通路对人骨肉瘤细胞株MG-63生长、凋亡及侵袭和迁移的影响.方法 体外培养MG-63细胞,以不同浓度的DMY作用于MG-63细胞,MTT法检测不同时间和不同浓度的DMY对细胞生长的抑制作用;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响;Transwell小室法检测细胞的侵袭和迁移能力;Western blot法检测Cyclin D1、p-JAK2、p-STAT3、Bcl-xL、Bax和Bak含量.结果 DMY可时间和浓度依赖性地抑制MG-63细胞的生长;促进MG-63细胞凋亡;抑制MG-63细胞侵袭和迁移;下调Cyclin D1、p-JAK2、p-STAT3、Bcl-xL水平,上调Bax和Bak水平(P<0.05).结论 DMY具有抗人骨肉瘤MG-63细胞活性的作用,可降低骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力,通过调控JAK2/STAT3信号通路抑制细胞生长,诱导细胞凋亡.

摘要： Objective:Using the expression profile microarray to obtain the differentially expressed genes (DEGs) inside population(SP) and non-SP (NSP) of osteosarcoma (OS) MG63 cells,to discover the potential therapeutic targets for OS.Methods:To isolate SP and NSP from the MG63 cells human OS cell line using fluorescence-activated cell sorter.Expression profile microarray was used to detect the DEGs in SP and NSP of MG63 cells,2.0-fold changes in gene expression was set as the preliminary screening criteria.The enrichment of functions and signaling pathways were conducted by the Gene Ontology (GO) and the Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG).Five selected DEGs were verified by real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction(qRT-PCR).Results:A total of 7,332 genes were screened as DEGs,of which 3,661 genes were upregulated and 3,671 genes were downregulated in SP vs.NSP of MG63 cells.GO enrichment analysis revealed that the DEGs were mainly involved in signal transduction,cell adhesion,response,membrane and binding.KEGG pathway analysis showed that the genes were primarily enriched in hematopoietic cell lineage,transcriptional misregulation in cancer,cancer,regulation of actin cytoskeleton,cytokine-cytokine receptor interaction and cGMP-PKG signaling pathway,etc.Conclusion:The studies provide an overview of the gene expression profile between SP and NSP of MG63 cells.Analysis of the GO enrichment and KGEE pathway function of DEGs implied that KLK5,CCNA1,TFPI2 and RAPH1 might be the therapeutic targets for cancer stem cells(CSCs) of OS.%目的:使用表达谱芯片获得骨肉瘤MG63侧群细胞(SP)和非SP(NSP)中的差异表达基因,从中挖掘骨肉瘤的潜在治疗靶基因.方法:使用流式分选仪从人骨肉瘤细胞系MG63细胞中分离出SP和非SP,并使用表达谱芯片技术检测MG63细胞SP和NSP中的差异表达基因,以2倍的差异表达倍数变化设定为初步筛选基因的标准.利用基因本体论(GO)、京都百科全书基因和基因组(KEGG)途径进行功能和信号通路富集.分别从SP中过表达和低表达的差异基因中选择5个,采用荧光定量PCR法(RT-qPCR)对其进行表达情况的验证.结果:在MG63细胞中,SP和NSP,共有7 332个基因被筛选为差异表达基因,其中3 661个基因被上调,3 671个基因被下调.GO富集分析显示,差异表达的基因主要参与信号转导、细胞粘附、反应、膜和结合.KEGG通路分析显示,这些基因主要富集于造血细胞谱系,癌症中的转录失调,癌症,肌动蛋白细胞骨架的调节,细胞因子—细胞因子受体相互作用和cGMP-PKG信号通路等.结论:这些研究提供了MG63细胞中SP和NSP之间差异基因表达谱的概述,并使用GO和KEGG通路对其差异表达基因进行功能富集,提示了KLK5,CCNA1,TFPI2和RAPH1可能是骨肉瘤CSCs治疗的靶点.

摘要： 目的:探讨miR-548d对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响.方法:通过Real time PCR及Western blot检测miR-548d和KRAS在30例骨肉瘤组织以及293、MG63和U2OS细胞中的表达情况.对30例骨肉瘤组织中miR-548d和KRAS含量的相关性进行分析,随后通过报告基因实验印证miR-548d对KRAS的靶向作用.MG63细胞中分别过表达或沉默miR-548d后,通过Western blot实验分析KRAS的变化情况,MTT实验观察miR-548d对细胞增殖的影响,Transwell实验观察miR-548d对其迁移能力的影响.结果:骨肉瘤组织及细胞中miR-548d表达较低,KRAS表达较高.在骨肉瘤组织中miR-548d与KRAS的表达呈负相关.报告基因实验证明miR-548d可以直接打靶KRAS.Western blot指出miR-548d可以抑制KRAS的表达.最后MTT和Transwell实验指出miR-548d可以抑制MG63细胞的增殖与迁移.结论:miR-548d可以通过打靶KRAS抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移.

摘要： 一种改进的七点六三米焦炉炉盖、炉圈制作方法，其特征在于包括以下步骤：a在炉圈底圈圆周上按十字型对称增设长宽为100×75mm的钢板，b炉盖的上部尺寸不变仍为625mm，在上部磁性碳钢盖板下焊接高度为80mm的锚固件，取消底部圆平面的隔热板，将底部尺寸直径减少，使底部成为直径为410mm的圆孔，增加了其与炉圈的间隙；炉盖四周挂齿改为4颗，以炉盖圆周上以十字型分对称分布。本发明的改进的七点六三米焦炉炉盖、炉圈制作方法具有炉盖、炉圈制作方便，使炉圈不易松动，炉盖方便揭开、盖闭动作，在生产中揭炉盖、清石墨余煤等操作时，消除了炉圈受振动，防止冒烟、窜火的优点。

摘要： 一种改进的七点六三米焦炉炉盖、炉圈制作方法，其特征在于包括以下步骤：a在炉圈底圈圆周上按十字型对称增设长宽为100×75mm的钢板，b炉盖的上部尺寸不变仍为625mm，在上部磁性碳钢盖板下焊接高度为80mm的锚固件，取消底部圆平面的隔热板，将底部尺寸直径减少，使底部成为直径为410mm的圆孔，增加了其与炉圈的间隙；炉盖四周挂齿改为4颗，以炉盖圆周上以十字型分对称分布。本发明的改进的七点六三米焦炉炉盖、炉圈制作方法具有炉盖、炉圈制作方便，使炉圈不易松动，炉盖方便揭开、盖闭动作，在生产中揭炉盖、清石墨余煤等操作时，消除了炉圈受振动，防止冒烟、窜火的优点。

摘要： 一种七点六三米焦炉上升管内壁浇注料热修补方法，其特征在于包括以下步骤：a、准备喷补机及喷补料，连接电源和供风、供水管线，b、通知协调中控室，从炉孔中推出焦使焦炉成空炉，c、搜寻上升管内衬浇注块损坏部位，d、先送风，后送料，再送水，开始喷补，e、均匀喷补，喷枪头自下而上逐渐移动分层喷补，f、先停料，后停水，再停风，结束喷补。本发明的七点六三米焦炉上升管内壁浇注料热修补方法具有在线修补方便、快捷、经济，不影响生产，上升管的维修时间短，效果好，修补料使用寿命长和修复步骤合理，安全可靠的优点。