化学发光微粒子免疫分析法

摘要： 目的调查近一年肿瘤专科医院行感染筛查患者梅毒螺旋体血清学阳性率,评价化学发光微粒子免疫分析法(chemiluminescent microparticle immunoassay,CMIA)、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(treponema pallidum particle agglutination,TPPA)和梅毒快速血浆反应素环状卡片试验(rapid plasma regain card test,RPR)3种方法检测结果的一致性,为制定合理的梅毒螺旋体血清学筛查和报告模式提供依据。方法梅毒血清学初筛采用CMIA,当S/CO>1时,报告初筛阳性,阴性结果发阴性报告;阳性时,行TPPA和RPR检测。分析不同滴度范围TPPA和RPR的阳性率。结果连续入选40350例行感染筛查患者,初筛阳性者共519例(占1.29%)。初筛阳性者TPPA复检阳性373例(占71.86%),RPR阳性49例(占9.44%)。CMIA检测滴度S/CO在1.1~2.0、2.1~3.0、3.1~4.0、4.1~5.0、5.1~6.0、6.1~10.0、>10时,TPPA与RPR检测的阳性率分别为21%、0%,67%、0%,71%、5%,68%、10%,91%、9%,89%、0%,99%、21%。结论肿瘤专科医院患者梅毒螺旋体血清学特异性抗体CMIA初筛阳性率和TPPA确认试验阳性率与三级综合医院相近,但RPR阳性率较低。初筛滴度边缘升高者,TPPA阴性者占比高。

摘要： 目的 分析化学发光微粒子免疫法(CMIA)检测梅毒螺旋体特异性抗体的性能价值,探讨其在临床应用的意义.方法 回顾性分析北京市海淀医院2019年3月至2020年7月所有采用CMIA法进行梅毒螺旋体特异性抗体检测的标本61 051例,阳性标本采用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)进行确证,分析其相关性.结果 61 051例患者中CMIA法阳性标本852例,阳性率为1.40％,TPPA法阳性确认663例,阳性符合率为77.82％,假阳性率为0.31％.梅毒特异性抗体阳性符合率男性高于女性,差异有统计学意义(x2= 9.42,P =0.002).＞60岁老年组CMIA法阳性预测值最低,与其他年龄组比较,差异有统计学意义(x2 =7.27,P = 0.007),容易引起梅毒误诊.科室以皮肤科患者CMIA法阳性预测值最高.TPPA结果阳性符合率随着S/CO升高而升高,当S/CO≥10时,符合率达到100％.以TPPA法作为确证试验,对CMIA法检测梅毒特异性抗体的S/CO值进行ROC曲线分析得到最佳诊断截断值为3.61.结论 CMIA法简便易行,适用于大批量标本的梅毒筛查,TPPA法则更客观反映真实的梅毒阳性情况.对于CMIA法检测梅毒特异性抗体阳性的标本,尤其是S/CO＜3.61的标本,有必要进行TPPA复检,联合检测以提高检测结果的准确性,排除假阳性,避免误诊漏诊.

摘要： 目的 探讨门诊及住院患者梅毒螺旋体(TP)抗体检出情况,并对化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)筛查的假阳性样本进行分析,评估CMIA在抗-TP检测中的应用价值.方法 采用CMIA对2017年1月至2019年12月北京市健宫医院门诊及住院的44558例患者的临床标本进行TP特异性抗体筛查,TP抗体阳性样本进一步进行TP颗粒凝集试验(TPPA)确证和快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)检测,应用SPSS 25.0软件对不同年龄和性别组间抗-TP筛查、RPR效价进行统计学分析.结果 44558例血清样本经CMIA进行抗-TP筛查,检出抗-TP阳性样本996例.经TPPA确认阳性反应样本898例,CMIA初筛阳性与TPPA确认阳性结果比较,假阳性率为0.22％(98/44558),阳性预测值为90.16％(898/996),特异性为99.78％(43660/43758).S/CO值大于9的样本,TPPA确证阳性预测值为100.00％(898/898),根据S/CO值分为1～2、2～3、3～5、5～9和>9共5组,TPPA阳性预测值差异有统计学意义(χ2=309.81、P<0.001).996例RPR试验样本中,检出RPR阳性336例,效价≤1︰8的样本占RPR阳性样本的84.23％(283/336).≥80岁年龄组阳性率最高,经TPPA确认阳性反应样本阳性率为2.76％(84/3042),高于总体阳性率[2.02％(898/44558)],差异有统计学意义(χ2=7.84、P=0.005).TPPA确认阳性反应样本中男性患者阳性检出率为2.68％(467/17413),女性患者阳性率为1.59％(431/27145),差异有统计学意义(χ2=64.31、P<0.001).经RPR检测,40～59岁年龄组患者阳性率最高,为0.84％(124/14810),高于总体阳性率[0.75％(336/44558)].经RPR检测男性患者阳性检出率为1.05％(182/17413),女性患者阳性检出率为0.57％(154/27145),差异有统计学意义(χ2=32.37、P<0.001).结论 TP血清学试验采取CMIA联合TPPA和RPR检测的策略行之有效.重视对特殊人群、高危人群和重点科室抗-TP阳性结果的分析,正确检测、准确及时报告并合理解读TP血清试验结果极其重要.

摘要： 目的 建立定量检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的化学发光微粒子免疫分析法(CMIA),并进行性能评价.方法 将小鼠特异性抗HBsAg抗体包被在磁微粒表面,结合相应HBsAg,加入吖啶酯标记的特异性抗HBsAg抗体,在磁微粒表面形成双抗体夹心免疫复合物,加入预激发液和激发液,激发复合物上的吖啶酯发出光子,光信号值与HBsAg浓度呈正比.筛选最佳反应条件,对自建CMIA检测HBsAg的性能(线性范围、检测限、精密度、干扰试验、交叉反应、稳定性及与电化学发光法的相关性和一致性)进行评价.结果 磁微粒最适浓度为0.4 mg/mL,吖啶酯标记抗体的最适稀释比例为1:200(浓度为250 ng/mL).反应稀释液用量、最适加样量、试剂用量分别为100、20、50μL.自建CMIA检测HBsAg的线性范围为20～100000 IU/mL,最低检测限为9.9 IU/mL,批内和批间变异系数(CV)均<10.0％.血红蛋白<400 mg/L、胆红素<4 mg/L、类风湿因子<800 IU/mL、三酰甘油<2 mg/L、柠檬酸钠<22 mmol/L、乙二胺四乙酸(EDTA)<8 mmol/L对自建CMIA检测HBsAg无干扰.甲型肝炎病毒(HAV)、丙型肝炎病毒(HCV)、戊型肝炎病毒(HEV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)、巨细胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)阳性样本对自检CMIA未发生交叉反应.配制好的试剂在37°C可稳定6 d,开盖后上机(2～8°C)保存可稳定4周,2～8°C密封保存可稳定6个月.自建CMIA与电化学发光法的相关性(r=0.978,P<0.001)和一致性均良好.结论 自建CMIA检测HBsAg的线性范围较宽,高浓度样本可直接检测,无需稀释,且检测性能优良,有较好的临床应用前景.

摘要： 目的 探究如何正确解读化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)筛查检测儿童抗梅毒螺旋体特异性抗体阳性(S/CO>1)结果.方法 收集2018年7月至2019年6月用CMIA方法从23038例患儿中筛查到的抗梅毒螺旋体(TP)特异性抗体阳性的(S/CO>1)临床血清样本,再采用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)复检;甲苯胺红不加热血清学试验(TRUST)检测TP非特异性抗体;免疫印迹法(Western blot)检测TP特异性IgG和IgM抗体.结果 CMIA初筛阳性(S/CO>1)141例,初筛阳性率为0.61％(141/23038).141例CMIA阳性患儿血清复检结果:TRUST阳性2例(1.42％,2/141),TPPA阳性7例(4.96％,7/141),IgG阳性13例(9.22％,13/141),IgM阳性6例(4.25％,6/141);其中S/CO>10者11例,包括TRUST阳性2例(18.18％,2/11),TPPA阳性7例(63.64％,7/11),IgG阳性10例(90.91％,10/11),IgM阳性3例(27.27％,3/11).10例父母或母亲有梅毒病史(90.91％,10/11),年龄小于6个月者9例(81.82％,9/11).结论 用CMIA方法对儿童进行梅毒螺旋体的筛查,当其S/CO<10时,假阳性率仍然较高,需要用确证方法进行排除;梅毒检测结果需要结合患儿年龄及其父母的梅毒病史进行正确解读.

摘要： 目的:评价化学发光微粒子免疫测定法(CMIA)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)及ELISA在梅毒抗体检测中的表现及阳性符合率,探讨化学发光检测特异性梅毒抗体S/CO的最佳诊断截断值与其影响因素.方法:收集雅培I2000化学发光免疫分析仪抗T.pallidum阴性标本(S/CO<1)118例、阳性标本(S/CO＞=1)237例.分别用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)和酶联免疫吸附法(ELISA)对样本进行抗T.pallidum复查检测,并对TPPA阴性样本进行抗核抗体及类风湿抗体IgG检测,并分析CMIA与TPPA不相符样本的临床特征.以TPPA结果为参考标准,比较CMIA与ELISA的特异性、敏感性等,受试者工作曲线分析CMIA在本实验室的最佳截断值.结果:以TPPA为标准,CMIA的敏感性、特异性分别为100％和75.6％,ELISA的敏感性、特异性分别为99.5％和87.8％.用ROC曲线分析CMIA最佳临界值为S/CO=2.56,ROC曲线下面积达到最大为0.992.TPPA-CMIA+与TPPA-CMIA+两组的抗核抗体及类风湿因子检测差异均有统计学意义(P<0.05).CMIA+TPPA-的样本人群特点为老年人及不孕的育龄女性.结论:CMIA的临界值为2.56时,可提高本实验室的特异性.当患者有特定疾病且CMIA结果偏低时采用TPPA辅助诊断并及时沟通病史、定期复查.

摘要： 基于微粒子化学发光免疫分析的人血清脂联素检测试剂盒，涉及化学发光检测试剂盒。所述人血清脂联素检测试剂盒包括反应缓冲液、包被有脂联素单克隆抗体的磁性微粒子、标记有吖啶酯的脂联素单克隆抗体、发光液A、发光液B、脂联素抗原标准品溶液、浓缩洗涤液。制备方法：制备反应缓冲液；制备包被有脂联素抗体的磁微粒；制备吖啶酯标记的脂联素抗体；制备脂联素抗原标准品溶液；制备发光液；制备洗涤液。采用磁性微粒子偶联单克隆抗体，由于微粒子可以悬浮于样本溶液中，有利于微粒子表面抗体与待测物充分接触，缩短反应时间；以吖啶酯作为标记物，可得到稳定、高强度的信号。操作简单、灵敏度高、线性范围宽、结果稳定、安全性好、便于自动化。

摘要： 本发明公开了一种基于微粒子化学发光免疫分析技术的睾酮检测试剂，其按照组成包括以下组分：0.002%-0.01%的顺磁性微球、0.4μg/ml-1.0μg/ml吖啶酯标记的睾酮抗体、复合睾酮释放剂、发光液A和发光液B、0ng/dl-1500ng/dl的睾酮校准品与一定浓度的清洗液；所述睾酮释放剂为双氢睾酮、达那唑与肝素钠的混合物。使本发明具有操作简便、灵敏度高、检测效率快、费用低廉、便于自动化等优点，选用的复合释放剂与不同结合球蛋白结合，可以将血清中结合态的睾酮充分释放出来，使总睾酮的含量测定更为准确。

摘要： 本发明公开了一种导电微粒子介导电化学发光信号的免疫检测方法，包括：a)以一种具有电化学发光活性的导电材料制成微粒子，在微粒子表面固定针对待测物的抗体分子；b)在非电化学发光活性的电极上固定能与a)步中抗体分子形成二元免疫复合物的抗原分子，或固定能与a)步中抗体分子和待测物形成三元夹心免疫复合物的抗体分子；c)加入待测物后，微粒子通过特异性的抗原-抗体免疫反应，在电极表面形成免疫复合物；d)在有电化学发光物质和共反应物存在时，向电极施加电压，在微粒子表面产生电化学发光信号，进而对待测物进行定量测量。本发明具有背景低、信噪比高等优点，可以实现高灵敏度检测待测物的电化学发光免疫分析方法。

摘要： 本发明公开了一种基于智能型纳米发光微粒标记放大的化学发光免疫分析法及其应用。包括将一株待测抗原的抗体共价偶联到智能型纳米发光微粒表面的羧基上，形成具有放大标记效果的智能型纳米发光微粒；将待测抗原的另一株抗体直接或者间接包被在固相载体上，加入智能型纳米发光微粒以及含待测抗原的样本，通过抗体‑抗原‑抗体的相互作用，形成固相载体‑抗体‑待测抗原‑抗体‑智能型纳米发光微粒免疫复合物；分离出免疫复合物后，加入激发物，用化学发光检测仪检测发光强度从而计算得到待测抗原的浓度。本发明能够提高发光分子和抗体标记效率，增强发光强度。使得本发明具有灵敏度高，检测范围更宽等优势。

摘要： 本发明公开了一种抗病毒蛋白MxA微粒子化学发光免疫分析检测试剂盒，包括包被反应缓冲液、磁性微粒子溶液、第二抗病毒蛋白MxA单克隆抗体溶液、第一发光液、第二发光液、全血裂解液、不同浓度的抗病毒蛋白MxA抗原标准品溶液和浓缩洗涤液。本发明填补了国内抗病毒蛋白MxA检测的微粒子化学发光诊断试剂生产的空白，具有操作简单、灵敏度高、线性范围宽、结果稳定、安全性好，便于自动化等优点，在临床检验等方面具有广阔的应用前景。

摘要： 基于微粒子化学发光免疫分析的sST2检测试剂盒，涉及化学发光检测试剂盒。sST2检测试剂盒设有反应缓冲液、包被有sST2单克隆抗体的磁性微粒子、标记有吖啶酯的sST2单克隆抗体、发光液、sST2抗原标准品溶液、浓缩洗涤液。制备反应缓冲液；制备包被有sST2抗体的磁微粒；制备吖啶酯标记的sST2抗体；制备sST2抗原标准品溶液；制备发光液；制备洗涤液。采用微粒子化学发光免疫分析技术，比ELISA具有更高的灵敏度和更好的稳定性，填补国内人血清sST2检测的微粒子化学发光诊断试剂生产的空白。具有操作简单、灵敏度高、线性范围宽、结果稳定、安全性好、便于自动化等优点，在临床检验等方面具有广阔的应用前景。

摘要： 基于微粒子化学发光免疫分析的人血清脂联素检测试剂盒，涉及化学发光检测试剂盒。所述人血清脂联素检测试剂盒包括反应缓冲液、包被有脂联素单克隆抗体的磁性微粒子、标记有吖啶酯的脂联素单克隆抗体、发光液A、发光液B、脂联素抗原标准品溶液、浓缩洗涤液。制备方法：制备反应缓冲液；制备包被有脂联素抗体的磁微粒；制备吖啶酯标记的脂联素抗体；制备脂联素抗原标准品溶液；制备发光液；制备洗涤液。采用磁性微粒子偶联单克隆抗体，由于微粒子可以悬浮于样本溶液中，有利于微粒子表面抗体与待测物充分接触，缩短反应时间；以吖啶酯作为标记物，可得到稳定、高强度的信号。操作简单、灵敏度高、线性范围宽、结果稳定、安全性好、便于自动化。

摘要： 本发明公开了一种基于微粒子化学发光免疫分析技术的睾酮检测试剂，其按照组成包括以下组分：0.002%-0.01%的顺磁性微球、0.4μg/ml-1.0μg/ml吖啶酯标记的睾酮抗体、复合睾酮释放剂、发光液A和发光液B、0ng/dl-1500ng/dl的睾酮校准品与一定浓度的清洗液；所述睾酮释放剂为双氢睾酮、达那唑与肝素钠的混合物。使本发明具有操作简便、灵敏度高、检测效率快、费用低廉、便于自动化等优点，选用的复合释放剂与不同结合球蛋白结合，可以将血清中结合态的睾酮充分释放出来，使总睾酮的含量测定更为准确。

摘要： 本发明涉及一种用于检测糖类抗原的磁性微粒子化学发光酶免疫分析试剂盒及其使用方法，包括包被有抗FITC抗体的磁性微粒子；标记FITC的糖类抗原单克隆抗体及标记酶的糖类抗原单克隆抗体混合作为标记物液；糖类抗原标准品溶液；浓缩洗涤液；发光底物液。其中所述糖类抗原可以是CA72－4、CA50、CA19－9、CA242、CA15－3、CA27－29和CA125中的任一种；酶标抗体和FITC标记抗体是对应抗原的单克隆抗体；包被磁性微粒子的抗FITC抗体可为多克隆抗体或单克隆抗体；混合标记物液为体积比为1∶1－1∶3的FITC标记捕获抗体工作液和酶标记配对抗体工作液混合而成。本发明与已知的测定糖类抗原的试剂盒相比，具有高通量、高灵敏度、线性范围宽、快速等诸多优点，在临床检验等方面具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种导电微粒子介导电化学发光信号的免疫检测方法，包括：a)以一种具有电化学发光活性的导电材料制成微粒子，在微粒子表面固定针对待测物的抗体分子；b)在非电化学发光活性的电极上固定能与a)步中抗体分子形成二元免疫复合物的抗原分子，或固定能与a)步中抗体分子和待测物形成三元夹心免疫复合物的抗体分子；c)加入待测物后，微粒子通过特异性的抗原-抗体免疫反应，在电极表面形成免疫复合物；d)在有电化学发光物质和共反应物存在时，向电极施加电压，在微粒子表面产生电化学发光信号，进而对待测物进行定量测量。本发明具有背景低、信噪比高等优点，可以实现高灵敏度检测待测物的电化学发光免疫分析方法。