MC3T3-E1

摘要： 背景:先前的研究证实了miR-27b在脂质水平的作用,可以控制多个对血脂异常有重要影响的基因,推测miR-27b可能通过靶向PPARγ2在骨质疏松症中发挥作用。目的:探讨miR-27b/PPARγ轴在地塞米松诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1细胞建立骨质疏松症细胞模型中的影响及相关作用机制。方法:体外地塞米松诱导MC3T3-E1细胞后,通过Lipofectamine^(■)2000转染miR-27b模拟物、miR-27b抑制剂、NC-模拟物、NC-抑制剂、siPPARγ2、siNC,使用二甲基亚砜处理作为对照。细胞诱导培养后,检测细胞活性、碱性磷酸酶活性以确定细胞成骨、分化水平;实时荧光定量PCR法和Western blot法检测成骨分化基因miR-27B、PPARγ2、Runx2、骨形态发生蛋白2和骨钙素的mRNA及蛋白表达水平;生信分析预测miR-27b下游靶基因,并用双荧光素酶基因报告实验验证。结果与结论:①地塞米松处理显著降低了MC3T3-E1细胞的活力和miR-27b表达水平;与二甲基亚砜相比,地塞米松处理在24和48 h显著抑制MC3T3-E1细胞的活力并显著下调了miR-27b的表达水平;②miR-27b可直接调控PPARγ2;与相应的NC相比,miR-27b模拟物显著上调了miR-27b的表达水平,而miR-27b抑制剂显著下调了miR-27b的表达水平;与相应的NC相比,PPARγ2 mRNA和相应蛋白质表达被miR-27b模拟物抑制,并被miR-27b抑制剂显著增强;③miR-27b过表达减弱了地塞米松抑制MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化;与二甲基亚砜+NC-mimic组相比,地塞米松显著抑制成骨细胞分化;而地塞米松介导的抑制作用则被miR-27b模拟物所逆转,细胞碱性磷酸酶活性和骨形态发生蛋白2、Runx2和骨钙素蛋白表达水平部分恢复;④抑制miR-27b通过上调PPARγ2抑制MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化;miR-27b的敲除明显增加了PPARγ2的表达,并降低了细胞活力、成骨细胞分化、碱性磷酸酶活性以及骨形态发生蛋白2、Runx2和骨钙素的表达水平;PPARγ2可能是miR-27b的直接作用靶点。

摘要： 目的研究SMYD2抑制剂LLY-507对小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1)及人骨髓间充质干细胞(hMSCs)成骨分化的影响。方法通过CCK-8法检测LLY-507对MC3T3-E1和hMSCs增殖的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)染色和活性测定检测不同浓度LLY-507干预下MC3T3-E1和hMSCs早期成骨分化标志物ALP的活性情况;通过茜素红染色及半定量分析检测LLY-507对MC3T3-E1和hMSCs矿化能力的影响;运用荧光定量PCR检测hMSCs的成骨相关基因Osterix、Runx2、OPG、OPN mRNA的表达;Western blot检测hMSCs的Runx2和SMYD2蛋白表达量。结果CCK-8结果表明LLY-507在0.8μmol/L的剂量下细胞活性无明显影响,不会明显抑制细胞增殖。ALP染色及活性测定表明,加入50 nmol/L及以上剂量的LLY-507干预7 d后能够明显抑制MC3T3-E1及hMSCs成骨分化以及碱性磷酸酶的表达(P<0.05);茜素红染色及半定量分析表明100 nmol/L剂量的LLY-507能够明显抑制MC3T3-E1及hMSCs的矿化能力(P<0.05)。通过qPCR,加入25 nmol/L及以上剂量的LLY-507分别干预7 d和14 d后能够明显抑制hMSCs成骨分化相关基因Runx2、Osterix、OPG、OPN的mRNA表达(P<0.05)。通过Western blot,加入50 nmol/L及以上剂量的LLY-507干预7 d和14 d后均能够明显抑制hMSCs的Runx2蛋白和SMYD2蛋白的表达。结论抑制SMYD2的表达能够抑制成骨相关基因的表达,说明SMYD2在成骨分化过程中起到促进成骨的作用。

摘要： 目的通过体外细胞实验探讨酸枣仁皂苷A对小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖分化的影响,为临床治疗骨折与促进骨折愈合提供实验基础。方法将酸枣仁皂苷A分4个浓度(5、10、20、40 mg/L)分别干预细胞,使用CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Von kossa染色法检测细胞矿化结节生成情况,Elisa法检测细胞中ALP与BGP的含量,RT-qPCR法检测细胞中Runx-2与BGP的基因表达水平,Western Blot法检测细胞中TGF-β1、Col I与BMP-2的蛋白表达水平。结果酸枣仁皂苷A能促进MC3T3-E1细胞增殖,减少细胞凋亡,提高细胞中ALP与BGP的含量,提高细胞中Runx-2与BGP基因的表达水平与TGF-β1、Col I与BMP-2的蛋白表达水平,增加细胞中矿化结节的形成数量(均P<0.05)。结论酸枣仁皂苷A能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖,减少细胞凋亡,提高细胞分化程度与成骨效率,其机制可能是通过调控TGF/BMP通路而发挥的。

摘要： Objective:To investigate the effect of an aqueous extract of Protaetia brevitarsis(AEPB)on osteogenesis using preosteoblast MC3T3-E1 cells and zebrafish larvae.Methods:Flow cytometric analysis was used to measure the cytotoxicy.Alkaline phosphatase activity was detetmined using p-nitrophenyl phosphate as a substrate.Calcium deposition was detected using alizarin red staining along with osteogenic marker expression in preosteoblast MC3T3E1 cells.In addition,vertebral formation in zebrafish larvae was detected using calcein staining and osteogenic gene expression.Results:AEPB highly promoted the expression of osteogenic markers including runt-related transcription factor 2,osterix,and alkaline phosphatase,along with elevated levels of mineralization in MC3T3-E1 cells.Moreover,AEPB accelerated vertebral formation in zebrafish larvae accompanied by upregulated expression of osteogenic genes.FH535,an inhibitor of Wnt/β-catenin,suppressed AEPB-induced osteogenic gene expression and vertebral formation,indicating that AEPB stimulates osteogenesis by activating the Wnt/β-catenin signaling pathway.Conclusions:AEPB stimulates osteoblast differentiation and bone formation by activatingβ-catenin.Therefore,AEPB is a promising material that induces osteogenesis,and is useful for the treatment of bone resorption diseases.

摘要： 目的探讨仙灵骨葆胶囊含药血清对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)增殖分化的影响及与p38 MAPK信号通路的关系。方法用仙灵骨葆胶囊含药血清干预MC3T3-E1,CCK8法筛选最佳干预时间及浓度,试剂盒检测各组细胞ALP活性。将细胞分为A、B、C、D 4组,分别加入10%含药血清、10%空白血清、10%含药血清+SB203580、10%空白血清+SB203580,利用免疫印迹法(Western blot)检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)、磷酸化p38(p-p38)、成骨相关转录因子2(Runx2)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)的蛋白表达量,荧光定量PCR检测p38、Runx2和BMP-2 mRNA的表达水平。结果与空白血清组相比,不同浓度的仙灵骨葆胶囊含药血清均能促进MC3T3-E1的增殖分化,提高ALP的活性,其中10%含药血清干预36 h的作用最为明显(P<0.05);与B组比较,A组p38、p-p38、Runx2、BMP-2蛋白及p38、Runx2、BMP-2 mRNA的表达明显增高(P<0.05);加入信号通路阻断剂SB203580后,C组与D组上述指标的表达明显降低(P<0.05);与C组相比,D组p38、p-p38、Runx2、BMP-2蛋白及p38、Runx2、BMP-2 mRNA表达更低(P<0.05)。结论仙灵骨葆胶囊含药血清能促进MC3T3-E1的分化生长,其作用机制可能与激活p38 MAPK信号通路、上调成骨相关因子Runx2、BMP-2的表达有关。

摘要： 目的探讨黄芩素(BAI)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化的作用及其分子机制。方法将MC3T3-E1分为对照组(正常培养)和BAI组(以Baicalein处理),在成骨分化条件培养下采用CCK-8检测BAI对MC3T3-E1细胞增殖的影响;分别以碱性磷酸酶染色(ALP)、茜素红染色(ARS)检测MC3T3-E1细胞成骨分化水平与矿化能力,实时荧光定量PCR检测成骨标志基因ALP、COL1A1、RUNX2、OSX的mRNA表达水平,通过免疫印迹法(Western-blot)检测MC3T3-E1细胞中BMP-2、Smad1、p-Smad1蛋白表达水平,通过免疫荧光技术(IF)检测RUNX2、COL1A1表达水平。结果与对照组比较,BAI干预1 d后发现,BAI组COL1A1(P<0.001)、RUNX2(P<0.05)、OSX(P<0.05)mRNA表达水平在成骨分化中表达上升;干预3 d后发现,与对照组比较,BAI组ALP(P<0.05)、RUNX2(P<0.001)mRNA表达上升;干预7 d后发现,与对照组比较,BAI组COL1A1(P<0.05)mRNA表达水平较对照组上升,BMP-2、p-Smad1/Smad1蛋白表达水平上升(P<0.05)。免疫荧光中成骨标志蛋白RUNX2、COL1A1表达增多(P<0.05)。结论BAI可通过激活BMP-2/Smad通路促进MC3T3-E1成骨分化。

摘要： 目的 分析中药补骨脂单体药异补骨脂素刺激骨髓间充质干细胞(BMCSs)后分析的外泌体对MC3 T3-E1(骨髓间充质干细胞)的影响.方法 采用传代培养、贴壁等方法,大量培养BMSCs细胞后,用异补骨脂素刺激培养BMSCs,通过收集BMSCs细胞,在实现外泌体与MC3 T3-E1共育后,经统计学处理数据,记录标记基因ALP、OPG、BM P2的表达情况.结果 经检测显示,成骨分化相关基因ALP、OPG、BM P2有上升变化,干预前后数据相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 BMSCs源性外泌体对于加快MC3 T3-E1成骨分化具有促进作用,值得关注.

摘要： 目的 观察黄瓜籽总皂苷提取物(cucumber seed saponins,CSS)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响,以及与骨质疏松相关的SPARC、OPG/RANKL/RANK信号通路的作用.方法 通过MTT实验、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测、茜素红染色,考察不同浓度CSS对MC3T3-E1细胞增殖、分化及矿化的影响;采用RT-PCR方法检测SPARC、OPG/RANKL mRNA表达水平;Western blot检测SPARC、OPG/RANKL的蛋白表达量.结果 与阳性对照组相比,CSS能明显促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05),CSS高、中剂量组能明显提高MC3T3-E1细胞ALP活性及钙化结节数量(P<0.05);与空白组相比,CSS不同剂量组均明显上调SPARC、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达水平(P<0.05).结论 黄瓜籽总皂苷能够促进成骨细胞MC3T3-E1的增殖、分化及矿化能力,并通过上调SPARC、OPG/RANKL的表达水平提高MC3T3-E1细胞的成骨能力.

摘要： 本发明涉及一种三维碳毡润滑增强体改性MC尼龙复合材料及其制备方法，按照重量百分比计包括：80％～90％聚酰胺树脂和10％～20％三维碳毡润滑增强体；其中，所述的聚酰胺树脂为MCPA6，所述的三维碳毡润滑增强体是指在三维碳毡表面负载氮掺杂氧化石墨烯/石蜡。本发明利用刻蚀改性剂将氮掺杂氧化石墨烯和石蜡润滑剂构筑在碳毡纤维表面形成具有“池‑渠”结构的三维润滑网络，使石墨烯和石蜡润滑剂均匀分散在MC尼龙基体材料中，有效改善了石墨烯填料的分散性，同时提高了树脂与填料界面的相容性；所制备的三维碳毡润滑增强体改性MC尼龙复合材料的力学性能、摩擦学性能均得到了显著的提升。

摘要： 本发明提供了一种基于GA‑BP‑MC神经网络的人体三维尺寸信息预测方法及装置，其中，方法中包括：S10形成训练样本集，训练样本集中每一组训练数据包含多个输入参数和一个目标三维尺寸；S20构建一多输入、含多个隐含层的BP网络模型；S30利用GA算法(遗传算法)优化BP网络模型初始的权值和阈值，得到最优的个体的权值和阈值；S40基于最优的个体的权值和阈值及形成的训练样本集对BP网络模型进行训练，确定模型参数；S50将包含用户的特征信息、预设部位的二维尺寸及预设部位相对于身高的比例系数的测试数据输入训练好的GA‑BP网络模型中得到预设部位的三维预测尺寸；S60将三维预测尺寸输入MC模型中进行修正得到修正后的三维尺寸信息，完成对预设部位三维尺寸信息的精确预测。

摘要： 本发明公开了一种PCL/Col/MC梯度三层人工骨膜及其制备方法与应用。属于骨科植入材料领域，包括静电纺丝溶液的制备和骨膜材料的制备。本发明所有采用原料均是已批准在用的医用植入性材料，通过静电纺丝的方法制备了PCL、Col和MC成分逐层梯度变化的三层复合纤维膜，分别使用PCL、PCL/Col、PCL/Col/MC溶液进行3层连续纺丝，且两种溶液交替时同时纺丝二者10％的溶液量。具有与天然骨膜相似的拉伸强度，各层具有各自功能，所制备人工骨膜的外层成分为纯PCL纤维层，具有良好的软组织屏蔽功能，中间层为PCL/胶原纤维，为人工骨膜整体提供力学支持，内层为PCL/Col/MC复合纤维，具有良好的骨诱导活性和骨引导能力。

摘要： 本发明公开一种MC‑ARMS‑mMB三联技术在耐药结核菌诊断试剂盒的制备方法和应用，描述了MC‑ARMS‑mMB（微菌落‑扩增阻碍突变系统‑多重分子信标）三联技术，一种用于结核杆菌及其耐药菌快速培养的诊断试剂盒。同时阐明了该诊断试剂盒的制备方法；并就其临床应用做了科学的表述。尤为重要的是指明了该诊断试剂盒的临床应用价值和较好的开发前景。

摘要： 本发明属于山羊分子标记制备技术领域，具体涉及三个山羊MC1R缺陷突变体及其应用。本发明发现山羊MC1R受体存在三个缺陷突变体，其中导致受体缺陷的两个突变位点F250V和G255D都位于第六跨膜区上，另外一个导致受体缺陷的突变位点C267W位于第三膜外环上。这三个MC1R的缺陷突变体都丧失了对α‑MSH配体的亲和力，显著降低了诱导型和组成型cAMP水平，以及显著降低了诱导型和组成型p‑ERK水平。山羊MC1R缺陷突变体会导致真黑色素生成信号受阻，影响黑色被毛的形成。本发明的分子标记可应用于山羊毛色的标记辅助选择上。

摘要： 本发明属于图像处理领域，具体涉及一种基于MC‑T算法的CT图像三维重建方法，该方法包括：获取待重建的脑出血CT图像和脑出血CT病灶掩膜图；对获取脑出血CT图像和脑出血CT病灶掩膜图进行预处理；采用MC‑T算法对预处理后的图像数据进行重建，得到重建后的三维图像；本发明针对传统的MC算法中存在的计算速度慢以及二义性问题，提出了一种基于MC算法改进的三维重建算法，该算法以二维脑出血CT图像和病灶分割掩膜切片作为输入，在三维数据场中通过体素棱边标记的方法，有效的排除了空体元的检测。

摘要： 本发明涉及一种三维碳毡润滑增强体改性MC尼龙复合材料及其制备方法，按照重量百分比计包括：80％～90％聚酰胺树脂和10％～20％三维碳毡润滑增强体；其中，所述的聚酰胺树脂为MCPA6，所述的三维碳毡润滑增强体是指在三维碳毡表面负载氮掺杂氧化石墨烯/石蜡。本发明利用刻蚀改性剂将氮掺杂氧化石墨烯和石蜡润滑剂构筑在碳毡纤维表面形成具有“池‑渠”结构的三维润滑网络，使石墨烯和石蜡润滑剂均匀分散在MC尼龙基体材料中，有效改善了石墨烯填料的分散性，同时提高了树脂与填料界面的相容性；所制备的三维碳毡润滑增强体改性MC尼龙复合材料的力学性能、摩擦学性能均得到了显著的提升。

摘要： 本发明公开了一种PCL/Col/MC梯度三层人工骨膜及其制备方法与应用。属于骨科植入材料领域，包括静电纺丝溶液的制备和骨膜材料的制备。本发明所有采用原料均是已批准在用的医用植入性材料，通过静电纺丝的方法制备了PCL、Col和MC成分逐层梯度变化的三层复合纤维膜，分别使用PCL、PCL/Col、PCL/Col/MC溶液进行3层连续纺丝，且两种溶液交替时同时纺丝二者10％的溶液量。具有与天然骨膜相似的拉伸强度，各层具有各自功能，所制备人工骨膜的外层成分为纯PCL纤维层，具有良好的软组织屏蔽功能，中间层为PCL/胶原纤维，为人工骨膜整体提供力学支持，内层为PCL/Col/MC复合纤维，具有良好的骨诱导活性和骨引导能力。

摘要： 本发明提供了一种基于GA‑BP‑MC神经网络的人体三维尺寸信息预测方法及装置，其中，方法中包括：S10形成训练样本集，训练样本集中每一组训练数据包含多个输入参数和一个目标三维尺寸；S20构建一多输入、含多个隐含层的BP网络模型；S30利用GA算法(遗传算法)优化BP网络模型初始的权值和阈值，得到最优的个体的权值和阈值；S40基于最优的个体的权值和阈值及形成的训练样本集对BP网络模型进行训练，确定模型参数；S50将包含用户的特征信息、预设部位的二维尺寸及预设部位相对于身高的比例系数的测试数据输入训练好的GA‑BP网络模型中得到预设部位的三维预测尺寸；S60将三维预测尺寸输入MC模型中进行修正得到修正后的三维尺寸信息，完成对预设部位三维尺寸信息的精确预测。

摘要： 本发明属于计算机图像技术领域，应用于三维重建方法之中。通过(1)扫描数据，构造立方体(2)计算阈值，分三类构建查找表，封装在协议映射表中(3)计算梯度(4)通过多线程并行查改进表获得相交边(5)计算坐标和法向量(6)查改进扩充的三角片索引表，确定组合方式(7)由三角片构成等值面；通过协议映射表思想将三类查找表对应三大类处理函数，通过函数指针调用以及多线程并行算法，极大的提升了重建速度，保证了重建的完整性与时效性；该方法可广泛应用在图像三维重建各个领域中。