动脉平滑肌细胞

摘要： 取大鼠肠系膜动脉,用I型胶原酶消化,并进行体外培养,倒置相差显微镜观察ASMC生长状态及特点;免疫组织化学进行细胞鉴定.大鼠肠系膜平滑肌细胞呈典型“峰-谷”样生长,该原代培养细胞对平滑肌特异性肌动蛋白表达阳性.传代细胞生长稳定,可为研究小血管平滑肌细胞特性提供一个较理想的模型.

摘要： 取大鼠肠系膜动脉,用I型胶原酶消化,并进行体外培养,倒置相差显微镜观察ASMC生长状态及特点;免疫组织化学进行细胞鉴定。大鼠肠系膜平滑肌细胞呈典型＂峰-谷＂样生长,该原代培养细胞对平滑肌特异性肌动蛋白表达阳性。传代细胞生长稳定,可为研究小血管平滑肌细胞特性提供一个较理想的模型。

摘要： Objective To investigate the inhibitory effect of astragaloside Ⅲ (ASⅢ) on TNFR1-mediated signaling pathways in mouse arterial smooth muscle cells (ASMCs) and provide experimental evidence for the anti-inflammatory and anti-atherosclerotic actions of Chinese herbal medicine Radix Astragali (Huangqi). Methods The effect of ASⅢ on the cell viability of ASMCs was evaluated by conducting a WST-1 assay. The mRNA levels of ICAM-1 (intercellular adhesion molecule-1), Lox-1 (lectin-like oxidized LDL receptor-1) and ABCA1 (ATP-binding cassette transporter A1) in ASMCs were measured using quantitative RT-PCR technique. Western Blot was performed to detect the effect of ASⅢ on TNF-α-induced modulation of ICAM-1 , Lox-1 and ABCA1 protein levels. TNFR1-mediated phosphorylation and degradation of I Bα, and phosphorylation of AKT, ERKs and p38 were also measured by using Western Blot analysis. Results (1) ASⅢ, when used at a concentration between 30 nM and 10 μM, did not reduce the cell viability of ASMCs; (2) The TNFα-stimulated up-regulation of ICAM-1 and Lox-1 , and down-regulation of ABCA1 expression level were inhibited by ASⅢ in a concentration-dependent manner; (3) ASⅢ suppressed the TNFR1-mediated phosphorylation and degradation of IκBα protein; (4) ASⅢ suppressed TNFR1-mediated phosphorylation of AKT, ERKs and p38. Conclusion ASⅢ inhibits the TNFR1-mediated intracell ular signaling pathways in ASMCs , which may in part explain its anti-inflammatory and anti-antherosclerostic effects.%目的 研究黄芪皂苷 Ⅲ(astragalosideⅢ,ASⅢ)对小鼠动脉平滑肌细胞(arterial smooth muscle cells,ASMCs)中I型TNF-α 受体(TNF-αreceptor type 1,TNFR1)介导信号通路的抑制作用,为中药黄芪的抗炎作用和抗动脉粥样硬化作用提供证据.方法 以不同浓度ASⅢ预处理ASMCs,之后以TNF-α诱导细胞.采用WST-1实验检测细胞活力变化;采用实时定量RT-PCR技术检测细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(lectin-like oxidized LDL receptor-1,Lox-1)和ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)mRNA表达变化;采用Western Blot方法检测ICAM-1、Lox-1和ABCA1蛋白表达变化,并检测ASⅢ对转录因子NF-κB(nuclear factor-κB)上游抑制蛋白IκBα(NF-κB inhibitor-α)、以及对信号分子AKT、细胞外受体活化激酶(extracellular receptor-activated kinases,ERKs)和p38磷酸化的影响.结果 (1)ASⅢ在30 nM~10μM范围内不抑制细胞活力;(2)ASⅢ剂量依赖性抑制TNF-α 对ICAM-1、Lox-1和ABCA1 mRNA表达的调控;(3)ASⅢ剂量依赖性抑制TNF-α 对ICAM-1、Lox-1和ABCA1蛋白表达的调控;(4)ASⅢ显著抑制TNFR1介导的IκBα 磷酸化和降解;(5)ASⅢ显著抑制TNFR1介导的AKT、ERKs和p38磷酸化.结论 ASⅢ可全面抑制ASMCs中TNFR1介导信号通路激活,参与其抗炎和抗动脉粥样硬化作用.

摘要： 目的：探讨大鼠动脉平滑肌细胞A7 R5上钙池操纵性钙通道( store-operated calcium channel, SOCC)对细胞自噬的影响。方法在293T细胞中包装含有STIM1、Orai1基因的慢病毒,将获得的慢病毒 LV-STIM1、LV-Orai1感染大鼠A7R5细胞,Western blot检测感染前后STIM1、Orai1蛋白表达及细胞自噬调节蛋白Beclin-1的表达。慢病毒感染A7R5后饥饿处理6 h或雷帕霉素处理24 h,Western blot检测处理后各组自噬相关蛋白LC3的蛋白表达量。结果重组载体pLV-STIM1、pLV-Orai1经双酶切鉴定正确。在293T成功包装慢病毒LV-STIM1、LV-Orai1。病毒感染 A7R5后,与对照组相比,STIM1、Orai1蛋白表达量分别上调96%和163%,而自噬调节蛋白Beclin 1下调64%。饥饿或雷帕霉素处理可明显增加细胞自噬水平,体现为自噬标志蛋白LC3-Ⅱ含量增加,而慢病毒感染STIM1、Orai1可明显抑制饥饿或雷帕霉素诱导的细胞自噬。结论在大鼠动脉平滑肌A7 R5细胞过表达钙池操纵钙通道分子STIM1和Orai1可使细胞自噬水平降低。这一分子机制可能与肺动脉高压发病相关。%Aim To investigate the effect of store-oper-ated calcium channel( SOCC) on autophagy in rat arte-rial smooth muscle cells A7 R5 . Methods Lentiviruses containing STIM1 or Orai1 gene were packaged in 293 T cells and then were used to infect rat arterial smooth muscle cells A7 R5 . The expression levels of STIM1 , Orai1 and Beclin 1 , a critical autophagy-regu-lating protein, of lentivirus-infected A7R5 cells, were detected by Western-blot. Autophagy in lentivirus-in-fected A7 R5 cells was induced by starvation or rapamy-cin, an inhibitor of mammalian target of rapamycin ( mTOR ) . Autophagy marker LC3 of these cells was detected by Western-blot. Results The constructions of vector pLV-STIM1 and pLV-Orai1 were confirmed by restriction enzymes digestion analysis. Compared with the control group, expressions of STIM1 or Orai1 protein was significantly increased after lentivirusLV-STIM1 and LV-Orai1infection, whereas the expressions of autophagy related protein Beclin-1 were down-regu-lated. Starvation or rapamycin stimulated A7R5 auto-phagy but overexpression of STIM1 or Orai1 significant-ly inhibited starvation or rapamycin induced autoph-agy. Conclusion Overexpression of store-operated calcium channel components STIM1 and/or Orai1 in rat arterial smooth muscle cells A7 R5 inhibit autoph-agy. This mechanism might contribute to the develop-ment of pulmonary arterial hypertension.

摘要： Aim To investigate the expression of stro-mal interaction molecule 1 (STIM1) in rat pulmonary arterial hypertension ( PAH ) tissues and effects of STIM1 on arterial muscle cells proliferation. Methods PAH was induced by a single intraperitoneal injec-tion of MCT at a dose of 60 mg·kg - 1 . The mRNA or protein expressions of STIM1 in monocrotaline-induced pulmonary hypertensive rats were measured by real-time PCR or Western blot, respectively. The arterial smooth muscle cells A7R5 were transiently transfected with STIM1 plasmids to prepare STIM1 overexpressed cells. Cell proliferations were detected by using CCK-8 kits. The expressions of Akt/ mTOR pathway molecules of A7R5 were measured by Western blot. Results The right ventricular systolic blood pressure ( RVSP) and right ventricular mass index ( RVMI ) were markedly elevated in MCT-treated rats (P < 0. 01) in comparison to control rats. The mRNA and protein ex-pression levels of STIM1 in monocrotaline-induced pul-monary hypertensive rats were 2. 19 and 1. 66 folds of control rats, respectively. STIM1 were transiently over-expressed in cultured A7R5. Cells transfected with STIM1 grew more quickly than non-transfected control. Overexpression of STIM1 significantly increased the phosphorylation of Akt, mTOR, p70-S6K, and 4E-BP1, but did not change their protein expression lev-els. Conclusion STIM1 are over-expressed in rat PAH tissues. Overexpression of STIM1 can promote ar-terial smooth muscle cells proliferation by regulating Akt/ mTOR pathway.%目的：观察基质相互作用分子1( stromal interaction molecule 1, STIM1)在肺动脉高压组织中的表达,并探讨STIM1对动脉平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法一次性腹腔注射野百合碱(MCT)建立肺动脉高压大鼠模型；实时定量 PCR 和蛋白印迹分别测定肺动脉高压大鼠肺组织STIM1 mRNA 和蛋白的表达；采用基因转染技术建立 STIM1瞬时高表达的动脉平滑肌 A7R5细胞模型；用 CCK-8法测定细胞增殖能力；用蛋白印迹测定 Akt/ mTOR 通路分子的表达。结果与对照组相比,MCT 组的右心室收缩压(RVSP)和右心重量指数(RVMI)均明显增高(P <0．01),形态学观察可见肺小动脉平滑肌层明显增厚,管腔减小；MCT 组大鼠STIM1 mRNA 和蛋白表达量分别是对照大鼠的2．19和1．66倍；STIM1瞬时过表达的动脉平滑肌细胞与对照组相比,生长速度加快；STIM1过表达可明显增加 Akt、mTOR、p70-S6K和4E-BP1的磷酸化水平,而对它们的蛋白水平没有影响。结论肺动脉高压发病中存在 STIM1的过表达,STIM1可促进动脉平滑肌细胞增殖,其机制与上调 Akt/ mTOR 信号转导通路相关。

摘要： 目的 探讨miR-125b在下肢动脉硬化闭塞(ASO)中的表达特征及其潜在临床价值.方法 采用实时荧光定量PCR、原位杂交等技术检测正常动脉(6例)及ASO标本(12例)中的miR-125b表达特征;以组织块贴壁法原代培养获得动脉平滑肌细胞(ASMCs),分析miR-125b调控细胞增殖、迁移的能力.结果 MiR-125b在ASO病变动脉中下调,其表达主要位于动脉平滑肌层,增殖与迁移能力强的ASMCs中miR-125b表达水平下降(P＜0.001),升高miR-125b水平可显著抑制ASMCs增殖与迁移(P＜0.01).结论 MiR-125b在ASO病变中表达水平显著降低,干预其表达可抑制ASMCs增殖、迁移,具有潜在的治疗价值.

摘要： 什么是＂H型高血压＂中国疾病预防控制中心（CDC）疾控分类目录认为,健康成人空腹血浆半胱氨酸平均水平在5-15umol/L,当HCY（血浆同型半胱氨酸）水平为≥10umol/L,属于高HCY血症,伴有高HCY的高血压,被称为＂H型高血压＂。HCY的危害性HCY水平升高的危险主要有：HCY是甲硫氨酸的中间代谢产物,它对血管内皮细胞产生毒性作用,引起血管内皮功能紊乱或危害、脂质过氧化,并增高血中血小板的粘附性,从而导致动脉硬化斑块的形成；

摘要： 目的 探讨人下肢动脉硬化闭塞症(ASO)组织中microRNA的表达特征.方法 采用microRNA芯片和real-time PCR芯片技术对正常人下肢动脉(3例)和ASO动脉(10例)中的microRNA的表达谱进行分析.结果 正常动脉和ASO动脉的microRNA表达谱之间存在显著差异.MiR-21等microRNA表达上调明显(P＜0.05),miR-1298(P＜0.01)、miR-125b (P＜0.001)、miR-140-3p (P＜0.001)表达水平下降明显.进一步通过原位杂交染色发现,表达失调的microRNA主要定位于动脉壁中层平滑肌.结论 与正常动脉相比,ASO组织中的microRNA表达谱显著不同,其在ASO发病中的作用有待于进一步研究.

摘要： 目的 研究马尾松花粉多糖PPM60-A及其硫酸酯化物SPPM60-A对大鼠动脉平滑肌细胞[Ca2+]i调控及增殖的影响.方法 常规水提醇沉法制备马尾松花粉多糖,Sephacryl S-400HR色谱分离得PPM60-A,氯磺酸-吡啶法得硫酸酯化物SPPM60-A,酯化度为1.28.酶解法分离制备大鼠动脉平滑肌细胞,测定酯化前后多糖对其胞内[Ca2+]i和细胞增殖的影响.结果 PPM60-A和SPPM60-A均可以降低[Ca2+]i,抑制高K+和去甲肾上腺素(NE)诱导的钙离子升高,降低高K+引起的钙离子水平上升,对NE诱导的血管主动脉平滑肌细胞增殖具有显著的抑制作用.PPM60-A作用效果好于SPPM60-A.结论 PPM60-A及SPPM60-A均能抑制细胞外Ca2+内流,抑制血管平滑肌细胞增殖.

摘要： 目的：研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)Ⅰ型(collagen Ⅰ,CollaⅠ)和Ⅲ型胶原(Colla Ⅲ)合成的影响,探讨早期生长反应因子-1(EGR-1)在UⅡ诱导大鼠PASMCs胶原合成中的作用.方法：以组织贴块法培养大鼠PASMCs为研究对象,实验分为两部分:①采用Real-time PCR测定不同浓度(10-10mol/L～10-7mol/L)U Ⅱ对大鼠PASMCs colla Ⅰ、colla Ⅲ及EGR-1 mRNA表达的影响,并采用Western blotting检测collaⅠ及colla Ⅲ蛋白表达水平;②以Real-time PCR法及Western blotting测定Urantide及PD98059对培养大鼠PASMCs colla Ⅰ和colla Ⅲ mRNA及蛋白表达的抑制作用,并以Real-time PCR法检测EGR-1 mRNA的表达情况.结果：①UⅡ在一定浓度范围(10-9moi/L～10-7mol/L)浓度依赖性地促进colla Ⅰ,colla Ⅲ的合成(P＜0.01,P＜0.001),并且能增加EGR-1 mRNA的表达(P＜0.01);②Urantide及PD98059可拮抗UⅡ的上述作用(P＜0.01).结论：EGR-1可能通过激活ERK1/2途径参与了U Ⅱ诱导培养大鼠PASMCs colla Ⅰ和colla Ⅲ的合成过程.

摘要： 在自发性高血压血管结构改建过程中,小动脉平滑肌增生中膜增厚,管腔狭窄及肌化,使血管阻力持续升高,是高血压血管结构改建的重要病理特征.动脉平滑肌细胞是一种非终末分化细胞,在病理发展过程中可以发生可逆的表型转换,由增殖休止期的收缩表型转变为去分化状态的合成表型.有氧运动作为一种非药物的有效的治疗方法,可预防和逆转高血压过程中的血管结构和功能改变,其维持平滑肌的收缩表型可能在运动干预高血压中病程发展中发挥了核心作用.因此,本研究观察长期规律性有氧运动对自发性高血压大鼠肠系膜动脉平滑肌表型转换的影响,以深入探讨运动作用于高血压动脉血管的分子机制,为运动对高血压的防治提供理论支持.选用3月龄雄性自发性高血压大鼠（Spontaneous hypertension rat，SHR）和正常血压大鼠（Wistar-Kyoto，WKY）各随机分为安静对照组（C）和有氧运动干预组（E），即SHR-C，SHR-E，WKY-C和WKY-E（n=12），各组进行1周适应性跑台训练后有氧运动干预组进行8周中等强度（坡度0°，20m/min，50%-55%VO2max，60min/d，5d/wk）有氧跑台训练。每周进行无创尾动脉血压测试，8周干预后（末次运动后48h）对大鼠进行腹腔麻醉后取肠系膜动脉并剥离周围组织。HE染色观察动脉血管形态变化；Westernblot测定肠系膜动脉平滑肌中表型标志蛋白α-肌动蛋白（α-actin）、调宁蛋白（Calponin）和骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）的表达情况。实验结果显示：长期规律的有氧运动可以有效降低自发性高血压症状，调节血管的良性重构，运动干预可以一定程度上缓解或逆转高血压血管平滑肌细胞的表型转换，促进平滑肌由合成表型向收缩表型转换。运动通过改变高血压小动脉中膜平滑肌的表型可能是运动诱导血管重构、调节血管张力的重要机制。

摘要： 本发明公开了一种改良的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的分离制备方法。包括如下主要步骤：1)以复合酶短暂消化去除大鼠胸主动脉血管的内、外膜层，保证中膜层的完整性；2)以一小时的复合酶消化释放、分散和制备胸主动脉VSMC；3)获得高产量、活力佳、可传代的收缩型大鼠胸主动脉VSMC。本发明方法所分离的胸主动脉VSMC活性高、纯度好；分离步骤简单、耗时短、成功率高，适用于初学者的操作。

摘要： 本发明公开了一种改良的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的分离制备方法。包括如下主要步骤：1)以复合酶短暂消化去除大鼠胸主动脉血管的内、外膜层，保证中膜层的完整性；2)以一小时的复合酶消化释放、分散和制备胸主动脉VSMC；3)获得高产量、活力佳、可传代的收缩型大鼠胸主动脉VSMC。本发明方法所分离的胸主动脉VSMC活性高、纯度好；分离步骤简单、耗时短、成功率高，适用于初学者的操作。

摘要： 丹参与三七不同提取部位及其组合抑制平滑肌细胞增生和防治冠状动脉术后再狭窄的用途。本发明涉及三七与丹参的提取工艺、提取物不同洗脱部位及其组合在抑制血管平滑肌细胞增生和防治冠状动脉扩张形成术后再狭窄的用途。实验证明：丹参三七提取物中50％、95％、50％+95％组合、50％+80％+95％组合可以有效抑制血管平滑肌的增生，防治球囊损伤术后血管内膜的增厚；其中50％+95％组合、50％+80％+95％组合抑制血管平滑肌的增生，防治球囊损伤术后血管内膜的增厚优于各部位单独给药。

摘要： 本发明涉及一种鸡胚肺动脉平滑肌细胞的分离培养方法，所述方法包括以下步骤：分离鸡胚人字形肺动脉血管并用PBS保证其湿润，修剪去除血管周围细小的结缔组织，将人字形血管分离为两根血管后分别对两根血管进行一次纵切，用胰蛋白酶溶液将纵切后的血管在15‑37°C消化1‑2min后用完全培养基终止消化获得消化后的组织块，将消化后的组织块切割成尺寸为0.4‑0.6mm的组织小块，将组织小块在完全培养基中进行原代培养。操作简单，重复性好，培养的细胞纯度高，生长周期短，培养第3天即可见细胞爬出，原代培养4天后即可进行传代培养，细胞生长旺盛。

摘要： 本发明涉及一种从肺动脉血栓内膜剥脱术(PTE)的剥离物中分离、培养人肺动脉平滑肌细胞的方法以及该细胞在肺循环相关疾病研究中的应用。所述方法包括用单一酶消化法对细胞膜进行处理，使细胞损害程度轻，利于细胞存活。该培养方法技术稳定，重复性好，培养的细胞形态均一，生长良好。同时，获得的细胞为进一步深入研究肺循环疾病，尤其是血栓栓塞性肺动脉高压患者的发病机制，疾病发生发展过程以及其PTE预后等实验提供了丰富的特异性强的材料来源。

摘要： 本发明公开了异鼠李素(Isorhamnetin)作为异鼠李素在制备抑制肺动脉平滑肌细胞增殖药物中的用途。本发明的实验结果表明在安全剂量范围内使用时，剂量为100μM的苦豆碱可以显著抑制人肺动脉平滑肌细胞的增殖，显著调节BMP信号通路相关蛋白的表达，证明异鼠李素抑制肺血管重构，并进一步抑制肺动脉高压、心血畸形管或慢性阻塞性肺疾病。

摘要： 本发明涉及一种原代胸主动脉平滑肌细胞的分离培养方法，至少包括以下步骤：获取胸主动脉血管；刮除所述血管内膜，得到剥离的血管；将所述剥离的血管剪切成组织块；将所述组织块均匀种植于培养容器贴壁培养，培养至贴壁细胞汇合达70％～80％时或局部细胞生长拥挤，得到原代胸主动脉平滑肌细胞。其技术操作步骤简单、耗时短，不需要任何酶等附加材料，降低了实验成本，获得的成功率低、纯度好，且VSMC消化传代后，后续依然源源不断的有VSMC从组织块爬出，产量高等特点。

摘要： 本发明提供了一种原代大鼠主动脉平滑肌细胞的分离培养方法，本发明的原代大鼠主动脉平滑肌细胞的分离培养方法获得细胞总量大，分离度高，活率高，而且细菌、真菌和其他细胞的污染概率低，同时还能够进行传代培养，为血管疾病相关研究提供了良好的细胞培养基础。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体公开一种SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞的分离和培养方法，包括以下步骤：1）在无菌条件下切取SD大鼠的胸主动脉；2）把胸主动脉切割成长为3-5cm的长段后放入PBS溶液中，再将胸主动脉沿纵向剪开，并除去血管外的脂肪及结缔组织，然后把胸主动脉放入胶原酶 中浸泡；3）取出处理过的胸主动脉，除去外膜；4）将胸主动脉放入消化液中孵育，再放入DMEM培养基中；5）将胸主动脉放入离心机中离心，收集沉淀物得到胸主动脉平滑肌细胞，将胸主动脉平滑肌细胞放入胎牛血清DMEM培养瓶中，之后转入培养箱中培养，之后进行传代培养。本发明不仅大大提高分离获得的细胞数，还提高了材料的利用度，操作简便。

摘要： 本发明涉及一种鸡胚肺动脉平滑肌细胞的分离培养方法，所述方法包括以下步骤：分离鸡胚人字形肺动脉血管并用PBS保证其湿润，修剪去除血管周围细小的结缔组织，将人字形血管分离为两根血管后分别对两根血管进行一次纵切，用胰蛋白酶溶液将纵切后的血管在15-37°C消化1-2min后用完全培养基终止消化获得消化后的组织块，将消化后的组织块切割成尺寸为0.4-0.6mm的组织小块，将组织小块在完全培养基中进行原代培养。操作简单，重复性好，培养的细胞纯度高，生长周期短，培养第3天即可见细胞爬出，原代培养4天后即可进行传代培养，细胞生长旺盛。