摘要:
目的:探讨TH17细胞及其存活状态在中性粒细胞性哮喘小鼠发病中的作用及相关分子机制.方法:C57BL雌性小鼠随机分为对照组、中性粒细胞哮喘(NA)组、嗜酸性细胞哮喘(EA)组,每组每个检测指标6只小鼠.建立NA和EA两种哮喘小鼠模型,检测BALF中有核细胞总数及分类计数、Buxco小鼠肺功能仪检测小鼠气道高反应性(AHR);流式细胞技术检测脾脏TH17细胞比例及TH17细胞Ki-67、信号转导与转录激活因子(STAT)5、B细胞淋巴瘤因子-2(BCL-2)、天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-17A(IL-17)、IL-7、趋化因子配体(CXCL)1、CXCL5、CXCL8/IL-8水平;荧光定量PCR法检测小鼠脾脏IL-7mRNA、细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)1-mRNA的表达.结果:1.NA组BALF中细胞总数、中性粒细胞百分比(NEU%)、AHR明显高于EA组和对照组(P<0.05);2.NA组、EA组小鼠脾脏TH17细胞及TH17细胞Ki-67的表达均明显高于对照组(均P<0.01),且NA组高于EA组;3.NA组、EA组脾脏IL-7mRNA及BALF中IL-7水平高于对照组(分别P<0.01,P<0.05),NA组BALF中IL-7水平明显高于EA组,但脾脏IL-7mRNA的表达低于EA组(分别P<0.05,P<0.01);4.与对照组相比,哮喘小鼠脾脏TH17细胞上STAT5的表达均明显增高,且NA组高于EA组(均P<0.01);5.NA组TH17细胞上BCL-2的表达明显高于对照组(P<0.01),EA组TH17细胞上BCL-2的表达轻度增高,但与对照组差异无统计学意义;6.NA组、EA组脾脏TH17细胞上Caspase-3的表达高于对照组,但NA组低于EA组(分别P<0.01,P<0.05),且NA组Caspase-3增加的幅度明显低于BCL-2;7.两种哮喘小鼠SOCS1表达均下调,且NA组低于EA组(均P<0.05);7.两种哮喘小鼠BALF中IL-17水平均增高,且NA组高于EA组(分别P<0.05,P<0.01);8.NA组BALF中趋化因子CXCL1、CXCL5、CXCL8/IL-8水平明显高于对照组(分别P<0.05,P<0.01)且与IL-17水平呈正相关(rs=0.509,P=0.003;rs=0.606,P=0.000;rs=0.361,P=0.043),NA组小鼠BALF中NEU与IL-8呈正相关(rs=0.599,P=0.014):9.两组哮喘小鼠BALF中IL-8水平与AHR呈正相关(rs=0.607,P=0.013;rs=0.655,P=0.006).结论:中性粒细胞性哮喘小鼠体内已分化的TH17细胞在机体高IL-7微环境下,依赖JAK/STAT5信号途径激活维持其存活状态,高表达的IL-17通过促进多种细胞因子分泌参与哮喘气道中性粒细胞炎症及AHR形成.