力达霉素

摘要： 目的 通过观察双靶向配体化力达霉素(DTLL)的急性和亚急性毒性,获得DTLL的半数致死剂量(LD50)、最大耐受剂量和相关生理病理等指标,为其安全性评价提供毒理学依据,为其临床应用研究奠定基础.方法 ①急性毒性试验:60只雌性各半的昆明小鼠按体质量随机分为正常对照组及DTLL 1.44,2.05,2.93,4.19和5.99 mg·m-2,24 h内经尾静脉单次注射给予DTLL,分别于第3,7和14天测定小鼠体质量,观察并记录小鼠给药后的毒性反应和死亡情况.②亚急性毒性试验:120只雌性各半的SD大鼠随机分为正常对照组及DTLL 61,122和245μg·m-2组,尾静脉注射给予DTLL,每周给药1次,共给药4周,停药后恢复4周.每周检测大鼠体质量和摄食量.分别于第28和56天取血液、尿液和主要脏器组织,用Konelab PRIME 30全自动生化分析仪和尿液分析质控仪检测血液和尿液生化指标,同时用HE染色组织切片,观察其病理变化.结果 ①急性毒性试验:DTLL单次给药对昆明小鼠LD50为2.45 mg·m-2,DTLL>2.05 mg·m-2组小鼠体质量下降(P<0.05),出现行动迟缓和眼睑闭合等症状,并有小鼠陆续死亡.组织学检查显示,小鼠有不同程度的脾萎缩、髓外造血和肝、肾细胞坏死.②亚急性毒性试验:SD大鼠经尾静脉注射DTLL,28 d重复给药后计算所得最大耐受剂量为122μg·m-2,DTLL 61,122和245μg·m-2组大鼠体质量降低(P<0.05)、摄食量减少(P<0.05);245μg·m-2组停药后,谷丙转氨酶(P<0.01)和谷草转氨酶活性升高(P<0.05).组织病理观察显示,245μg·m-2组大鼠出现肝细胞病变、脾生发中心增大、肺炎症细胞浸润和肾小管嗜酸性病变等.结论 DTLL可产生延迟性肝、肾毒性,并可能引起免疫抑制和造血功能障碍,其毒性作用的靶器官主要为肝、肾、脾和肺.

摘要： 目的 研究表皮生长因子受体(EGFR)/CD13双靶点抗体药物偶联物Fv-LDM-NGR抑制肿瘤生长的作用机制.方法 选用人乳腺癌细胞MCF-7、人肺腺癌细胞A549和人微血管内皮细胞(HMEC)-1作为研究对象.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验测定Fv-LDM-NGR对肿瘤细胞和内皮细胞增殖的影响.小管形成(tube formation)实验观察HMEC-1细胞形成的管腔结构.Transwell实验测定Fv-LDM-NGR对肿瘤细胞迁移和侵袭的影响.Western blot分析其对细胞内EGFR细胞信号通路、细胞周期信号通路以及凋亡通路的影响.利用流式细胞术、Hoechst染色和Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞周期的变化以及细胞凋亡.结果 Fv-LDM-NGR能够显著抑制肿瘤细胞的体外增殖,其对肿瘤细胞MCF-7和A549以及人微血管内皮细胞HMEC-1的半数抑制浓度(IC50)分别为3.27×10-14、4.72×10-13和1.17×10-12mol· L-1.Fv-LDM-NGR能够干扰血管内皮细胞形成管腔结构,抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭.对细胞信号通路具有调节作用;引起细胞周期G2/M期和S期阻滞;诱导肿瘤细胞发生凋亡.结论 Fv-LDM-NGR通过干扰CD13活性,削弱肿瘤细胞的侵袭能力,阻碍血管内皮细胞形成管腔结构;通过下调EGFR的表达及磷酸化,干扰细胞信号通路,阻滞细胞周期循环和诱导细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖和迁移.

摘要： Objective To investigate the effect of lidamycin on the proliferation of human cervical cancer Caski cells and its underlying molecular mechanisms.Methods Human cervical cancer Caski cells were randomly divided the experimental groups (including the low-dose,medium-dose and high-dose groups) which were separately treated with 1,2.5 and 5 ng/mL lidamycin (100 μL) for 24 h,and the control group which was added with the same volume of RPMI-1640.MTT assay was used to detect the inhibition rate of proliferation.The cell cycle and mitochondrial membrane potential of CasKi cells were measured by flow cytometry.Transmission electronic microscope was used to observe the morphological changes of Caski cells.We calculated the apoptosis rate and mitotic catastrophe rate.Results The proliferation rate and survival rate of the experimental groups were significantly lower than those of the control group,and the decrease in the high-dose group was more significant (all P ＜ 0.05).The percentage of cells in the S phase of the control group and the medium-dose group was higher than those in the low-dose and high-dose groups (all P ＜ 0.05).The percentage of cells in the G0/G1 phase of the experimental groups was lower than that of the control group and the percentage of cells in the G2/M phase was higher than that of the control group,especially in the medium-dose and high-dose groups (all P ＜ 0.05).The ratios of mitochondrial membrane potential decrease in the low-dose,medium-dose and high-dose groups and control group were 34.77％ ± 5.33％,37.87％ ± 5.73％,18.37％ ± 3.91％,and 4.17％ ± 0.65％,respectively.The mitochondrial membrane potential decreased ratios of the experimental groups were higher than that in the control group,especially in the lowdose and medium-dose groups (all P ＜ 0.05).Transmission electronic microscopy showed that the control group had normal morphology while the experimental groups had many forms of death cells,including apoptosis,necrosis and mitotic catastrophe.The apoptosis rate and mitotic catastrophe rate of the experimental groups were both higher than those of control group (both P ＜ 0.05).Conclusion Lidamycin can significantly inhibit the proliferation of Caski cells with an dose-dependent manner by inducing the apoptosis and mitotic catastrophe of cells.%目的 探讨力达霉素对人宫颈癌Caski细胞增殖的影响及其可能的机制.方法 将对数生长期的人宫颈癌Caski细胞随机分为低、中、高浓度组及对照组,低、中、高浓度组均加入含力达霉素的RPMI 1640完全培养基100μL,分别调整其终浓度为1、2.5、5 ng/mL,对照组仅加入等体积RPMI 1640完全培养基.作用24h,采用MTT法检测细胞增殖能力(以吸光度值表示),计算细胞生存率;采用流式细胞术检测细胞周期及线粒体膜电位降低比例;透射电子显微镜下观察细胞形态学改变,计算细胞凋亡率及裂亡率.结果 低、中、高浓度组细胞增殖能力及细胞生存率均低于对照组,且高浓度组降低更明显(P均＜0.01).对照组及中浓度组S期细胞比例均高于低、高浓度组(P均＜0.05).低、中、高浓度组G0/G1期细胞比例均低于对照组,G2/M期细胞比例均高于对照组,且中、高浓度组变化更明显(P均＜0.05).低、中、高浓度组及对照组细胞线粒体膜电位降低比例分别为(34.77±5.33)％、(37.87±5.73)％、(18.37±3.91)％、(4.17±0.65)％;低、中、高浓度组细胞线粒体膜电位降低比例均高于对照组,且低、中浓度组均高于高浓度组(P均＜0.05).透射电镜下可见对照组细胞形态正常,低、中、高浓度组存在多种形态的死亡细胞,包括凋亡、坏死、裂亡的细胞.对照组及高、低、中浓度组细胞凋亡率及裂亡率均依次升高,两组间比较P均＜0.05.结论 力达霉素可抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,并呈浓度依赖性,其机制可能与诱导细胞凋亡或裂亡有关.

摘要： ①目的 通过研究力达霉素对人急性髓性白血病HL-60细胞和慢性粒系白血病K562细胞生长的影响,为力达霉素在白血病的临床治疗上提供实验依据.②方法 用0.01nM、0.1nM和1nM浓度的力达霉素分别作用于HL-60细胞和K562细胞48小时,通过HE染色观察细胞的形态变化;采用台盼蓝染色法、MTT法检测力达霉素对细胞增殖能力的影响.③结果 不同浓度力达霉素处理细胞后,HL-60细胞和K562细胞的生长明显受到抑制.HE染色结果显示用药组细胞形态发生改变,细胞生长缓慢.台盼蓝染色结果显示,浓度为0.01nM、0.1nM和1nM的力达霉素分别作用HL-60细胞和K562细胞48小时后,细胞的抑制率分别为:HL-60(42.3±2.04)%、(63.7±1.83)%和(78.4±1.38)%;K562(36.9±1.22)%、 (54.5±0.85)% 和 (68.7±1.83)%, 与对照组相比, 差异均有统计学意义 (P< 0.05).MTT检测结果亦表明力达霉素能够使细胞的存活率降低,抑制细胞生长.④结论 力达霉素能够影响人白血病细胞HL-60和K562的生长,抑制细胞增殖.

摘要： 目的：：探讨抗肿瘤药物力达霉素能否抑制人宫颈癌Caski细胞增殖并且诱导Caski细胞发生免疫原性细胞凋亡。方法：MTT比色法检测Caski细胞增殖；Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测Caski细胞凋亡。 Western blot 分析细胞中Bax和Bcl-2的表达；免疫荧光流式细胞术检测细胞凋亡后细胞膜上钙网蛋白的表达。结果：力达霉素抑制Caski细胞的增殖，具有时间和剂量依赖性；5μg/L的力达霉素作用Caski细胞48 h后，肿瘤细胞凋亡率为11.5%；Bax表达量显著增加，而Bcl-2含量明显减少(P<0.05)；细胞膜表面钙网蛋白表达高达67.2%，显著高于对照组的2.31%。结论：力达霉素能够有效抑制人宫颈癌Caski细胞增殖，其作用机制与线粒体途径诱导细胞凋亡相关，同时促使钙网蛋白转移到Caski细胞膜表面表达，可能具有诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞凋亡的能力。%Objective:To investigate effects of Lidamycin (LDM,C-1027) on the proliferation and immunogenic transform of human Caski cervical cancer cells and to provide the basic experiment data and theoretical supports for establishment of the new immu-notherapy method mediated by LDM. Methods:MTT was used for the analysis of cell proliferation;apoptosis rate was analyzed by flow cytometry;Western blot was used to analyze the effect of LDM on the expression of Bax and Bcl-2 in Caski cells;the Flow cytometry was used to detect the expression of Calreticulin ( CRT ) on the cell surface. Results: Lidamycin inhibited proliferation of Caski cells significantly in the time-and dose-dependent manners;The apoptotic cell ratio induced by 5 μg/L Lidamycin was 11. 5% ,Comparing with the control group, Lidamycin treatment increased Bax but decreased Bcl-2 contents significantly within Caski cells, it also significantly increased the expression of CRT on the cell surface of Caski cells from 2. 31% to 67. 2%. Conclusion: Lidamycin has pharmacological activity in inhibiting proliferation of the human cervical Caski cells and the underlying mechanism is related with inducing the intrinsic mitochondrial pathway of apoptosis. In the same time,Lidamycin can increase the expression of CRT on the cell surface,so it may have the ability to promote the immunogenic apoptosis of tumor cells.

摘要： 目的:研究力达霉素(LDM)对人慢性粒细胞白血病(CML) K562细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制.方法:选取处于对数生长期的人CML K562细胞,采用不同浓度(0.01、0.10和1.00 nmol·L-1)LDM处理48 h,作为0.01、0.10和1.00 nmol·L-1LDM组,不加药物的正常细胞为对照组.台盼蓝染色观察各组K562细胞生长抑制率,MTT法检测细胞存活率,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法观察凋亡细胞的形态表现,Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞中caspase-3和caspase-8蛋白相对表达量.结果:台盼蓝染色,LDM对K562细胞增殖有一定的抑制作用,各浓度LDM组细胞生长抑制率均高于对照组(P＜0.05);MTT法检测,随LDM作用浓度的升高,细胞存活率下降,LDM对K562细胞作用的半数抑制浓度(IC50)为(0.1±3.2) nmol·L-1.AO/EB染色,荧光显微镜下观察到LDM能够引起细胞发生凋亡(胞质呈芽状突起,胞核碎裂成点状).流式细胞术检测,各浓度LDM组K562细胞凋亡率均高于对照组(P＜0.05).Western blotting法检测,0.10和1.00 nmol·L-1 LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白相对表达量明显高于对照组(P＜0.01).0.01 nmol·L-1 LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:LDM能够有效抑制K562细胞增殖,低浓度LDM可能通过上调细胞中caspase-8和caspase-3表达诱导K562细胞发生凋亡.

摘要： 目的 制备一种由胰岛素样生长因子1 (insulin-like growth factor 1,IGF-l)和力达霉素(lidamycin,LDM)构成的融合蛋白,并对其抗非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)活性进行检测.方法 合成融合蛋白基因ldp-igf并将其插入到pET30a载体中,再将获得的重组表达载体pET30-ldp-igf转化至大肠杆菌中进行诱导表达,得到融合蛋白LDP-IGF.采用细胞免疫荧光实验和基于流式细胞术的亲和实验检测LDP-IGF蛋白与非小细胞肺癌细胞的结合能力;力达霉素的发色团(AE)与LDP-IGF蛋白在体外进行分子组装,获得强化融合蛋白LDP-IGF-AE.四甲基偶氮唑蓝法实验检测LDP-IGF-AE对不同非小细胞肺癌细胞的体外杀伤活性,PI染色结合流式细胞术检测LDP-IGF-AE对细胞周期的影响以及Annexin V-FITC/PI双染法检测LDP-IGF-AE对非小细胞肺癌细胞凋亡的诱导作用.结果 经过诱导LDP-IGF蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达.采用Ni2+亲和层析技术对包涵体蛋白进行分离纯化,经过变性和分步透析复性后获得了高纯度、有活性的融合蛋白LDP-IGF.亲和实验结果显示,LDP-IGF蛋白与非小细胞肺癌细胞具有高度的亲和力.与AE分子进行组装后获得的强化融合蛋白LDP-IGF-AE对不同的非小细胞肺癌细胞系均有非常强烈的杀伤活性,且其杀伤活性显著高于力达霉素.细胞周期阻滞和细胞凋亡实验结果显示,极低浓度的LDP-IGF-AE处理可使非小细胞肺癌细胞阻滞于G2/M期,并可显著地诱导细胞发生凋亡.结论 融合蛋白LDP-IGF-AE对非小细胞肺癌细胞有强大的体外抗肿瘤活性,具有发展成为非小细胞肺癌靶向治疗剂的潜能.

摘要： 目的 研究力达霉素(LDM)的抗骨髓瘤作用,并探讨抗骨髓瘤的作用机制.方法 处于对数增殖期人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226细胞随机分为空白对照组及0.1、0.5和1 nmol/L LDM组,用MTS法和流式细胞术检测细胞增殖率、细胞周期分布和凋亡情况,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白和周期相关蛋白的表达量.结果 细胞培养48 h后,不同浓度LDM组细胞增殖数显著低于空白对照组数(P＜0.05),LDM组S期和G2/M期的细胞数显著高于对照组数(P＜0.05),细胞凋亡率显著高于空白对照组数(P＜0.05),LDM的增殖抑制作用和凋亡诱导作用呈剂量依赖性.不同浓度LDM组细胞caspase-3、caspase-7、caspase-9和poly ADP-ribose polymerase (PARP)的蛋白被切割明显高于对照组(P＜0.05),P21和P27蛋白的表达量明显高于对照组数(P＜0.05).结论 LDM能诱导人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226细胞凋亡并诱导S期和G2/M期阻滞,其诱导凋亡和周期阻滞的机制有待于进一步深入研究.

摘要： 目的研究内皮抑素-力达霉素辅基蛋白融合蛋白（ES-LDP）对人乳腺癌、胰腺癌和食管癌组织的靶向性。方法分别采用人体乳腺癌、胰腺癌和食管癌组织芯片,利用免疫组化的方法,研究ES-LDP与癌细胞的亲和力;并采用Image-Pro Plus6.0软件计算吸光度值,进行统计分析。结果与辅基蛋白比较,ES-LDP对乳腺癌、胰腺癌和食管癌亲和力显著增高（P〈0.001）。在胰腺癌组织,这种亲和力也显著高于对正常组织的亲和力（P〈0.05）。结论 ES-LDP对不同组织器官,亲和力有所不同;在进行体内抗肿瘤活性评价时要注意选择合适的模型。

摘要： 目的:前期研究表明力达霉素具有抑制肝癌肿瘤干细胞的作用,但力达霉素对肝癌CD133作用机制尚未阐明. 方法:首先利用流式细胞分析技术和Western-blot法检测力达霉素对CD133+细胞的比例以及CD133蛋白的影响.然后运用肿瘤细胞成球培养法,观察力达霉素对分选后Huh7 CD133+细胞成球能力的影响.最后用qPCR和Western-blot法,观察Notch通路中相关基因蛋白表达的变化. 结果:力达霉素能显著减少CD133+细胞的比例和CD133蛋白的表达,并能抑制CD133+肿瘤细胞球形成能力.力达霉素能下调Notch通路中NOTCH1、Hes1、Hey1基因水平,以及显著减少NOTCH1、NICD、Hes1、Hey1蛋白表达. 结论:力达霉素能抑制CD133的表达可能是与其下调Notch信号通路有关,这将有利于力达霉素的进一步临床应用.

摘要： 目的：本研究拟探讨LDM诱导人结肠癌细胞衰老的作用,以及EZH2在其中发挥的机制.rn 方法：MTT及克隆形成实验法检测LDM对结肠癌细胞增殖活力及克隆形成能力的影响;SA-β-gal染色检测细胞衰老表型;PI染色检测细胞周期分布;AnnexinV/PI双染检测凋亡细胞比例;双荧光素酶报告基因检测p21启动子区的活性;蛋白免疫印迹和实时定量PCR检测各蛋白水平和mRNA水平的变化;流式细胞术检测DNA损伤标志γ-H2AX的含量变化;免疫组化实验检测人结肠癌组织样本中EZH2和细胞衰老相关蛋白p21的表达;siRNA敲低EZH2表达以及构建慢病毒表达载体过表达EZH2，检测其对LDM所致细胞增殖、周期及衰老作用的影响。rn 结果：LDM作用对HCT116和SW620细胞有明显抑制增殖活力及克隆形成能力的作用。rn 结论：力达霉素能够诱导人结肠癌细胞发生衰老。该作用可能与LDM抑制EZH2、诱导p21表达有关。

摘要： 力达霉素为烯二炔类抗肿瘤抗生素，现正在进行临床II期试验。作为国家一类新药，大量的研究表明力达霉素对肿瘤细胞具有诱导细胞周期阻滞及凋亡、引起细胞核固缩等多种作用，探讨其分子作用机制发现高剂量时DNA断裂可导致细胞凋亡和细胞核固缩等现象:而低剂量时的作用机制尚不完全清楚。研究发现，力达霉素在低剂量(0.01nM)时生长曲线和克隆生成分析显示小鼠胚胎干细胞肿瘤P19的生长受到抑制，通过定量PCR,Western Blot和免疫荧光分析在mRNA和蛋白质水平确定胚胎干细胞转录因子Oct4表达下降而p21的表达增强;荧光素酶分析确定Oct4以剂量依赖方式抑制p21的转录，低剂量力达霉素通过降低Oct4的表达而激活p21的转录，染色体免疫沉淀分析予以进一步验证。流式细胞检测分析显示经过低剂量力达霉素处理的小鼠胚胎肿瘤干细胞P19的细胞周期进入G1期阻滞，通过定量PCR和免疫荧光分析检测到胚胎干细胞向神经细胞分化的标志分子Nestin和MAP-2的mRNA和蛋白水平的表达增加，形态学观察低剂量力达霉素处理的小鼠胚胎肿瘤P19细胞6天后具有神经细胞样的形态，以上结果与敲低Oct4表达后的细胞形态、mRNA和蛋白水平的Oct4,p21 Nestin Map-2表达结果相一致。结果表明低剂量力达霉素通过抑制转录因子Oct4的表达，在转录水平激活p21的转录进而增加其蛋白质的表达，使P19的细胞周期进入G1期阻滞，诱导小鼠胚胎干细胞肿瘤P19细胞向神经样细胞分化。

摘要： 力达霉素属九元环烯二炔类抗肿瘤抗生素，本研究主要探讨Hsp90功能抑制后，LDM对肿瘤细胞生长、增殖、DNA损伤水平的影响，以及Hsp90抑制剂对力达霉素增敏的作用机制。结果表明:Hsp90抑制剂可以增强力达霉素对卵巢癌SKOV-3、乳腺癌MCF-7、肺癌A-549、肝癌Bel-7402细胞的杀伤作用，同时伴随着诱导凋亡的增加、DNA损伤后修复的减少，G2/M期阻滞降低等现象。细胞周期结果显示，0.05nM力达霉素处理细胞可以使G2/M期细胞从15.28%增加到76.79%，而经过200nM格尔德霉素预处理细胞G2/M期百分比大大下降，从76.79%下降到29.33%。说明格尔德霉素可以抑制力达霉素诱导的G2/M期细胞周期阻滞。本研究首次报道了Hsp90抑制剂对烯二炔类抗生素力达霉素的增敏效果。在多种肿瘤细胞中Hsp90抑制剂能够通过抑制DNA损伤后修复增加力达霉素对DNA的断裂作用，从而增强力达霉素的细胞毒作用。Hsp90抑制剂可以降低细胞基因组稳定性，抑制力达霉素所诱导的DNA损伤后修复作用，增加力达霉素对细胞造成的DNA损伤，从而增强其抗肿瘤活性。

摘要： 为阐明力达霉素（LDM）与抗Ⅳ型胶原酶单抗小型化免疫偶联物Fab'-LDM抗肿瘤侵袭转移作用，我们研究了Fab'-LDM免疫偶联物对人纤维肉瘤HT-1080细胞侵袭能力；MMP-2，MMP-9分泌及TIMP-1表达水平的影响，同时我们研究了Fab'-LDM对血管生成和HepG2肝转移的抑制作用。Boyden Chamber 体外侵袭结果表明无发色团的Fab'-LDM（Fab'-LDMa）对HT-1080侵袭转移存在剂量依赖性的抑制作用：20、40|、60μM偶联物抑制作用分别达到52±13%，59±18%，78±5.5%。免疫组化染色显示Fab'-LDM和HT-1080细胞或者组织呈特异性结合。明胶酶谱实验证实Fab'-LDMa在10、20μM水平分别降低MMP-2，MMP-9分泌达到54.3%、74.4%和87.1%、89.8%，同时RT-PCR表明Fab'-LDM提高TIMP-1的mRNA表达水平。Fab'-LDM抑制新生血管生成，5和10pM Fab'-LDM的抑制率分别为63±8.2%、90±7.5%。体内试验表明，0.1μmol/kg Fab'-LDM偶联物抑制人肝癌HepG2在裸鼠肝内原位转移率达83%。以上结果表明小型化偶联物Fab'-LDM对肿瘤侵袭转移有抑制作用，其抗侵袭转移机制涉及多个方面，Fab'-LDM 有望成为新型抗肿瘤侵袭转移的生物治疗剂。

摘要： 目的：观察力达霉素(LDM)与不同抗肿瘤药物在体内外联合应用的抗肿瘤作用。rn 方法：采用克隆形成法观察力达霉素和抗肿瘤药物联合应用对肿瘤细胞的抑制作用。以小鼠移植性肿瘤肝癌H22模型观察力达霉素与多种抗肿瘤药物分别在不同剂量下联合的治疗结果。rn 结果：体外试验：用人肺癌H460细胞进行克隆形成测定，LDM7.8×10-7μg·ml-1与诺维本(NVB)6.25×10-6μg·ml-1合并时CDI值为0.2，协同效应达到最高。用人结肠癌HCT-116细胞进行测定，LDM 7.8×10-7μg·ml-1与5氟尿嘧啶(5Fu)0.2μg·ml-1合并时CDI值为0.27。LDM 3.1x10-6μg·ml-1与顺铂(CDDP)0.025μg·ml-1合并时CDI值为0.66。用人乳腺癌MCF7细胞进行测定，LDM 7.8×10-7μg·ml-1与阿霉素(ADM)0.0025μg·ml-1合并时CDI值为0.37。LDM 7.8×10-7μg·ml-1与紫杉醇(TAX)0.001μg·ml-1合并时CDI值为0.64。实验结果表明LDM分别与NVB、5Fu、CDDP、ADM、TAX体外联合应用CDI值均小于0.7，有显著协同作用。体内实验表明：LDM 0.05 mg·kg-1和5Fu 100mg·kg-1联合应用对小鼠肝癌22的抑制率为88％(P值＜0.01)，较LDM 0.05mg·kg-1和5Fu100 mg·kg-1分别给药时抑制率为60％和67％，CDI为0.92。剂量为LDM 0.1 mg·kg-1和TAX 35 mg·kg-1联合应用，对小鼠肝癌H22的抑制率为80％(P值＜0.01)，与LDM 0.1mg·kg-1和TAX 35 mg·kg-1分别给药时抑制率为61％和42％，CDI为0.89。LDM 0.05 mg·kg-1和NVB 4 mg·kg-1／CDDP 4mg·kg-1联合应用的抑制作用最强，对小鼠肝癌H22的抑制率为85％(P值＜0.01)，LDM0.05 mg·kg-1和NVB 4 mg·kg-1／CDDP 4 mg·kg-1分别给药时抑制率为52％和67％，CDI为0.96。实验结果表明LDM分别与5Fu、TAX、NVB／CDDP联合应用能有效抑制肿瘤生长，其最佳CDI值分别为0.92、0.89、O.96。rn 结论：力达霉素与不同抗肿瘤药物联合应用表明，体外实验对肿瘤细胞杀伤有协同作用，体内试验对抑制肿瘤生长也显示一定的协同作用，显示出了临床应用前景。

摘要： 力达霉素具有我国自主知识产权，是由发色团和蛋白质以非共价键结合构成的新化合物。力达霉素在体外对多种肿瘤细胞有强烈的杀伤作用，在体内对多种小鼠移植性实体瘤和白血病以及移植于裸鼠的人体肿瘤均有明显疗效。力达霉素产生疗效的机制可能与其诱导肿瘤细胞凋亡有关。研究发现，力达霉素能诱导白血病细胞、结肠癌细胞、肺癌细胞、胰腺癌细胞、多发性骨髓瘤细胞、肝癌细胞、乳腺癌细胞等多种肿瘤细胞凋亡。

摘要： 力达霉素(lidamycin，LDM，又称C-1027)是从链霉菌代谢产物中筛选出的具有高效抗肿瘤活性的烯二炔类抗生素，由发色团AE和110个氨基酸残基组成的辅基蛋白LDP以非共价键组成，两者通过发色团核心和疏水氨基酸残基的疏水相互作用结合，可以拆分与重建。目前以力达霉素作为“弹头”药物构建的抗体导向药物都是将抗体基因和力达霉素辅基蛋白基因重组，导入大肠杆菌中进行表达，产生具有与抗原结合特性的融合蛋白，再与发色团体外组装形成强化融合蛋白，将LDM的低分子量、分子可拆分、强效抗肿瘤作用的优势与单链抗体靶向强、组织穿透能力强、清除快等优势相结合，达到高效抗肿瘤的目的。但是大肠杆菌表达产生的蛋白与链霉菌表达产生的蛋白结构是否完全相同，与发色团组装后能否实现力达霉素的高效抗肿瘤效果，蛋白表达时所带的His-Tag标签是否影响力达霉素的抗肿瘤活性，目前尚不清楚。本实验构建完整力达霉素辅基蛋白表达载体，表达重组辅基蛋白rLDP,分离纯化后与发色团组装形成重组力达霉素rLDM，对其活性进行了初步研究。

摘要： 力达霉素(LDM)是一种强烈的DNA损伤的抗肿瘤药物，目前正在进行临床实验。能够找到致敏剂以降低给药剂量使肿瘤细胞对LDM的敏感性提高将具有一定的应用价值。在实验中发现热休克蛋白抑制剂可以增强低剂量力达霉素对卵巢癌SKOV3细胞的杀伤作用，本实验就其机制进行一系列实验并加以分析。MTT方法检测两药合用生长曲线和联合用药指数；细胞周期分析了Hsp90抑制剂与LDM联合应用时对细胞周期的影响；免疫荧光和彗星电泳实验检测细胞在不同时间、不同药物配伍时发生DNA断裂的情况；Westernblot用于检测Hsp90抑制剂和LDM联合应用后DNA损伤后修复通路的影响。细胞毒实验显示geldanamycin和本实验室改造的一种geldanamycin衍生物GUM在一定的剂量下增强低剂量LDM(0.01nM、0.05nM)杀伤肿瘤效果，增加PARP的切割；细胞周期实验发现Hsp90抑制剂抑制由低剂量LDM诱导的SKOV3的G2／M期阻滞；彗星电泳实验发现单独应用低剂量LDM或geldanamycin处理细胞24h都不能看到明显的彗尾，两种药物联合应用时可看到明显的彗尾；免疫荧光实验观察到γH2AX在两药合用时在核内聚集。Western blot结果显示Hsp90抑制剂可以同时降低Chk1和Chk2的磷酸化水平，降低由LDM诱导的ATM磷酸化水平与ATR相互结合共同发挥作用的ATRIP水平。rn 从以上实验结果分析可以得出以下结论：Hsp90抑制剂可以通过增强LDM诱导的DNA断裂提高细胞对LDM的敏感性；根据文献报道，单独ATM或ATR一种激酶缺失的细胞与野生型细胞相比对LDM的敏感性没有变化，Chk1和Chk2都可以被激活；但ATM和ATR双缺失的细胞对LDM的敏感性大大增加，存活细胞减少，Chk1和Chk2的磷酸化水平明显降低，结合Western blot结果，Hsp90抑制剂的加入降低了与DNA损伤后修复相关激酶的活性，同时抑制Chk1和Chk2的磷酸化水平；推断Hsp90抑制剂同时抑制ATM／ATR两条通路的激活，这种效应可能是通过抑制ATM、与ATR相结合的ATRIP和BRCA1水平实现的。综上所述，Hsp90抑制剂可以通过抑制DNA损伤后修复机制增强LDM对SKOV3细胞的杀伤作用。

摘要： 目的：力达霉素(LDM)为大分子肽类抗肿瘤抗生素，对多种肿瘤细胞均具有强烈杀伤作用；scFv(CD20)-LDM是本研究室制备的抗CD20单链抗体与力达霉素的抗体靶向融合蛋白。本实验通过研究LDM及seFv(CD20)-LDM对人B细胞淋巴瘤细胞的杀伤活性及对裸鼠移植瘤生长的影响，初步评价二者对治疗人B细胞淋巴瘤的潜在应用价值。rn 方法:MTT法检测LDM及scFv(CD20)-LDM对人B细胞淋巴瘤Raji及Daudi细胞的增殖抑制作用；流式细胞仪检测LDM对Raji细胞的凋亡诱导作用:人淋巴瘤裸鼠移植模型检测LDM及scFv(CD20)-LDM的动物体内抗肿瘤疗效，绘制肿瘤生长曲线，计算抑瘤率。rn 结果:力达霉素及其单链抗体融合蛋白scFv(CD20)-LDM对肿瘤细胞有强烈的杀伤作用。LDM对高表达CD20抗原的人B淋巴瘤细胞Raji及Daudi细胞的IC50值为7.13×10-11M及2.91×10-10M，对无特异性CD20抗原的人乳腺癌MCF-7细胞的IC50值为5.91×10-10M。scFv(CD20)-LDM对Raji、Daudi细胞的IC50值分别为1.21×10-11M、6.24×10-11M，比LDM分别降低5.9倍和4.7倍；对MCF-7细胞的IC50值为3.39×10-9M。表明scFv(CD20)-LDM较好的保留了LDM的强细胞杀伤作用，并对CD20阳性的肿瘤细胞有选择性作用。分别用浓度为0.5 nmol/L和0.25 nmol/L的LDM作用于Raji细胞24小时后，发现随着LDM浓度增加，凋亡细胞所占比例逐渐增大，细胞经Annexin V FITC / PI染色后，用药组与对照组相比较，细胞凋亡比率有显著性差异(P＜0.01)。其中0.5 nmol/L和0.25 nmol/L LDM组的细胞总凋亡率(早期凋亡率和晚期凋亡率)分别为77.98%±0.59%、67.63%±0.38%，显著高于对照组的13.35%±0.28%细胞总凋亡率，明显诱导Raji细胞凋亡。在人淋巴瘤裸鼠移植模型中，LDM及scFv(CD20)-LDM均能显著抑制或延迟裸鼠移植性淋巴瘤的生长，并且抗体融合蛋白0.2 mg/kg、0.3 mg/kg组表现出比LDM耐受剂量0.05 mg/kg组更强的肿瘤生长抑制作用。在实验第41天，0.1 mg/kg, 0.2 mg/kg, 0.3 mg/kg三个剂量的scFv(CD20)-LDM的抑瘤率分别为51.4%, 70.5%和79.3%，而LDM组的抑瘤率为68.6%。rn 结论:LDM及其抗体靶向融合蛋白scFv(CD20)-LDM能够显著抑制裸鼠移植瘤的生长，对于治疗人B细胞淋巴瘤有良好的应用前景。LDM可作为以CD20为靶点的抗体靶向药物的“弹头”药物。

摘要： 本发明涉及双靶向配体化力达霉素DTLL的单独用药以及与吉西他滨联合给药在胰腺癌治疗中的应用。体内外研究结果表明，我们制备的DTLL能与其受体特异性亲和，同时对高表达EGFR/HER2的胰腺癌细胞MIA‑paca‑2有特异性靶向和极强的细胞毒作用，DTLL与吉西他滨联合用药能够发挥协同作用，明显优于非配体化游离的力达霉素(LDM)。并且，对单独使用吉西他滨不敏感的胰腺癌细胞AsPC‑1，也能够有效逆转胰腺癌对吉西他滨的耐药。

摘要： 本发明公开了抗CD30抗体与力达霉素的抗体药物偶联物、制备方法及其用途。本发明所提供的抗体药物偶联物，是将抗肿瘤抗生素偶联于抗体的药物，其中，所述抗肿瘤抗生素为力达霉素，所述抗体为抗CD30抗体。所述抗CD30抗体可为IgG；所述抗体药物偶联物含有名称为LDP‑轻链的融合蛋白；LDP‑轻链含有名称为LDP‑VL的蛋白区段，所述LDP‑VL是所述力达霉素的辅基蛋白与所述抗CD30抗体的轻链的可变区连接得到的区段。抗体融合蛋白CD30‑IgG‑LDP和力达霉素的发色团组装成的抗体药物偶联物CD30‑IgG‑LDM可用于治疗CD30阳性肿瘤(如人霍奇金淋巴瘤或间变性大细胞淋巴瘤)。

摘要： 本发明涉及一种融合蛋白(Arg)9-LDP及其强化融合蛋白(Arg)9-LDP-AE，所说融合蛋白系由细胞穿透肽(Arg)9、力达霉素辅基蛋白LDP和羧基端的组氨酸六聚体尾组成，基因全长387bp，编码129个氨基酸；强化融合蛋白系由融合蛋白(Arg)9-LDP(分子量约为14.5kDa)和活化型烯二炔发色团AE(分子量为843Da)构成；体内、外实验结果证明，融合蛋白及其强化融合蛋白对神经胶质瘤细胞有强烈的杀伤作用，动物体内试验有显著疗效，可望开发成为临床上高效的神经胶质瘤治疗药物。

摘要： 本发明涉及通过对生物合成调控基因的遗传操作构建力达霉素高产菌株的方法，具体地涉及提高力达霉素生产菌株生产力达霉素的性能的方法，其包括使选自sgcR1，sgcR2和sgcR3基因中的一个或者多个基因在力达霉素生产菌株中的表达提高，进而得到力达霉素产量提高的重组菌株。

摘要： 本发明涉及抗癌药物力达霉素的强化融合蛋白：Anti-CD20(scFv)-LDM及Anti-CD20(Fab)-LDM、其编码基因；还涉及所述强化融合蛋白的基因工程构建方法和所述强化融合蛋白的用途。申请人通过提供上述强化融合蛋白，提供了具有良好靶向性的抗肿瘤药物。

摘要： 本发明涉及一种双特异性寡肽-力达霉素强化融合蛋白Ec-LDP-Hr-AE，该融合蛋白由靶向表皮尘长因子受体EGFR和HER2的两个寡肽、力达霉素辅基蛋白以及力达霉素活性发色团四部分组成，研究证明，其在体外能与表达表皮生长因子受体EGFR和HER2的肿瘤细胞特异性结合，对肿瘤细胞有强烈的杀伤作用，体内试验对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠移植瘤疗效显著，显示了靶向药物的小型化与高效化的特点，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明涉及双靶向配体化力达霉素DTLL的单独用药以及与吉西他滨联合给药在胰腺癌治疗中的应用。体内外研究结果表明，我们制备的DTLL能与其受体特异性亲和，同时对高表达EGFR/HER2的胰腺癌细胞MIA‑paca‑2有特异性靶向和极强的细胞毒作用，DTLL与吉西他滨联合用药能够发挥协同作用，明显优于非配体化游离的力达霉素(LDM)。并且，对单独使用吉西他滨不敏感的胰腺癌细胞AsPC‑1，也能够有效逆转胰腺癌对吉西他滨的耐药。

摘要： 本发明涉及免疫融合蛋白DTLP的和双靶向配体化力达霉素DTLL的制备工艺改进和质量标准制定，主要包括：筛选高产的转化宿主菌株、改变发酵菌体起始密度，缩短诱导后发酵时间等表达条件；改用压力破碎法破碎菌体提取总的可溶性蛋白，大大提升了目的融合蛋白的提取产率；进行目的融合蛋白的中试发酵条件优化，为工业化规模生产提供前期数据和参考标准；优化了制备工艺，针对细菌内毒素进行去除，对冻干样品的稳定性进行了有效监测。

摘要： 本发明公开了抗CD30抗体与力达霉素的抗体药物偶联物、制备方法及其用途。本发明所提供的抗体药物偶联物，是将抗肿瘤抗生素偶联于抗体的药物，其中，所述抗肿瘤抗生素为力达霉素，所述抗体为抗CD30抗体。所述抗CD30抗体可为IgG；所述抗体药物偶联物含有名称为LDP‑轻链的融合蛋白；LDP‑轻链含有名称为LDP‑VL的蛋白区段，所述LDP‑VL是所述力达霉素的辅基蛋白与所述抗CD30抗体的轻链的可变区连接得到的区段。抗体融合蛋白CD30‑IgG‑LDP和力达霉素的发色团组装成的抗体药物偶联物CD30‑IgG‑LDM可用于治疗CD30阳性肿瘤(如人霍奇金淋巴瘤或间变性大细胞淋巴瘤)。

摘要： 本发明涉及抗癌药物力达霉素的强化融合蛋白：I131L、F132L突变后的mIL3-LDM，其编码基因；还涉及所述强化融合蛋白的基因工程构建方法和所述强化融合蛋白的用途。