Lgr5

摘要： 目的 研究二十二碳六烯酸(DHA)在炎性环境下对直肠癌细胞增殖和Lgr5表达的影响,探讨其对直肠癌细胞的双重作用。方法 MTT和克隆形成实验检测DHA对直肠腺癌细胞SW480和SW620细胞增殖和克隆形成能力的影响。Real-time qPCR和Western blot检测TNF- α和DHA作用前后Lgr5和Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果 DHA可有效抑制直肠癌细胞增殖和克隆形成能力。TNF- α可以显著激活NF-κB信号通路,DHA作用于直肠癌细胞后,可降低p65的磷酸化水平(P<0.05),并降低抗Lgr5 及Wnt/β-catenin相关蛋白CyclinD1表达水平(P<0.05)。结论 DHA抑制直肠癌细胞增殖和去分化为干细胞,同时可能抑制炎性信号通路对Lgr5+阳性直肠癌细胞的补充作用。

摘要： 富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(leucine-rich repeat containing G protein-coupled receptor 5,Lgr5)在体内分布广泛,可以作为多种上皮组织(包括小肠、结肠、胃和毛囊)中干细胞的标记物。为了探究小鼠(Mus musculus)胰腺发育过程中导管上皮细胞及体外培养的胰腺导管类器官中Lgr5的表达情况,本研究利用Lgr5-Cre^(ERT2+/–)和Rosa26-mTmG杂交后的转基因小鼠,经Tamoxifen(他莫昔芬)诱导后,观察不同发育阶段胰腺组织切片的荧光表达情况,并通过三维培养建立成体小鼠胰腺导管类器官,观察诱导后类器官细胞中的荧光变化。结果显示:Tamoxifen诱导的正常成体转基因小鼠胰腺导管内未检测到表达Lgr5的细胞;通过对孕鼠及哺乳母鼠注射Tamoxifen,在胚胎发育15.5 d和新生小鼠胰腺中也未发现Lgr5阳性细胞;但是将4-hydroxy-Tamoxifen(4-羟基–他莫昔芬)添加到培养基中,在Lgr5-Cre^(ERT2+/–);Rosa26-mTmG转基因小鼠胰腺导管来源的类器官中检测到部分细胞表达Lgr5。本研究结果证实,在成体及胚胎胰腺组织中没有检测到Lgr5表达,但在体外培养的胰腺导管类器官细胞中检测到Lgr5表达。本研究为探索胰腺发育过程中干/祖细胞特异性表达基因奠定了基础。

摘要： 目的 研究miR-340靶向富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)基因抑制结肠癌细胞增殖及β-连环蛋白(β-catenin)通路的作用.方法 培养人结肠癌细胞株HT29、SW480、LoVo及正常肠上皮细胞HIEC,检测miR-340的表达水平;将SW480细胞分为miR-NC 组(转染miR-NC mimic)、miR-340组(转染miR-340 mimic)、pcDNA3.1 组(转染pcDNA3.1 质粒),pcDNA3.1+miR-340组(转染pcDNA3.1 质粒及miR-340 mimic)、pcDNA3.1-Lgr5+miR-340组(转染pcDNA3.1-Lgr5质粒及miR-340 mimic),MTS法检测增殖活力A490,荧光定量PCR检测miR-340的表达水平,Western blot检测Lgr5、β-catenin、cyclinD1的表达水平,双荧光素酶报告基因验证miR-340靶向Lgr5.结果 HT29、SW480、LoVo细胞中miR-340的表达水平均低于HIEC细胞,且SW480细胞中miR-340的表达水平最低;miR-340组的A490水平、Lgr5、β-catenin、cyclinD1的表达水平、Lgr5野生型双荧光素酶报告基因的荧光活力均低于miR-NC组;pcDNA3.1+miR-340组的A490水平、Lgr5、β-catenin、cyclinD1 的表达水平均低于pcDNA3.1 组,pcDNA3.1-Lgr5+miR-340组的A490水平、Lgr5、β-catenin、cyclinD1的表达水平均高于pcDNA3.1+miR-340组.结论 miR-340能够抑制结肠癌细胞的增殖,靶向Lgr5基因并抑制β-catenin通路是可能的分子机制.

摘要： 目的 探讨组织微小RNA-1243(miR-1243)、富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(LGR5)、微小RNA-146a(miR-146a)在甲状腺乳头状癌(PTC)肿瘤恶性生物学特征评估中的价值.方法 选取2017年1月至2020年8月本院收治的104例PTC患者组织为癌组织组,并取其癌旁组织作为癌旁组织组.采用分化程度、T分期、淋巴结转移评估PTC恶性生物学特征,采用实时荧光定量PCR检测癌组织、癌旁组织的miR-1243、miR-146a表达,采用免疫组化检测LGR5表达,比较癌组织、癌旁组织的miR-1243、LGR5、miR-146a表达,并对数据进行统计学分析.结果 癌组织miR-1243表达低于癌旁组织,LGR5、miR-146a表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);癌组织LGR5阳性率显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(62.50％vs4.81％,P<0.05);miR-1243与LGR5(r=-0.570,P<0.001)、miR-146a(r=-0.708,P<0.001)呈负相关,LGR5与miR-146a呈正相关(r=0.726,P<0.001);miR-1243与T分期、淋巴结转移呈负相关(P<0.05);LGR5、miR-146a与T分期、淋巴结转移呈正相关(P<0.05).结论 组织miR-1243、LGR5、miR-146a可作为评估PTC肿瘤恶性生物学特征的分子标志物,为PTC靶向治疗、临床决策等提供重要参考信息.

摘要： 目的 探讨β-catenin及Lgr5在正常胃黏膜、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎及胃癌中的表达及其临床意义.方法 收集2014-03至2015-06在武警特色医学中心住院及门诊病例105例,其中正常黏膜23例,慢性浅表性胃炎25例,慢性萎缩性胃炎27例,胃癌30例.应用免疫组化方法检测β-catenin及Lgr5的表达和分布,根据阳性细胞比例和染色强度进行半定量评分.结果 β-catenin在正常胃黏膜阳性表达率为8.7％,在慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎及胃癌中阳性表达率依次增高,分别为28.0％、59.3％、83.3％,差异有统计学意义(P<0.05).Lgr5在正常胃黏膜阳性表达率为13.0％,在慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎及胃癌中阳性表达率依次增高,分别为32.0％、66.7％、86.7％,差异有统计学意义(P<0.05).结论 β-catenin、Lgr5是判断从胃炎到胃癌发展过程中Wnt/β-catenin信号通路异常活化的重要标志物,其异常活化与胃癌的发生、发展密切相关.

摘要： 目的 研究阿司匹林对人结肠癌细胞株Caco-2的生长作用以及对Lgr5表达的影响,探讨其预防结肠癌发生的可能机制.方法 运用噻唑蓝(MTT)比色法检测阿司匹林对Caco-2细胞存活率的影响;流式细胞术分析不同药物浓度和不同时间对Caco-2细胞凋亡的影响;采用实时-反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定各组阿司匹林干预不同时间后Caco-2细胞中Lgr5 mRNA表达;免疫组化Envison法检测阿司匹林对Lgr5蛋白在Caco-2细胞内定位变化.结果 阿司匹林对Caco-2细胞增殖有抑制作用,且有明显的浓度和时间依赖性;对Caco-2细胞促凋亡作用(包括早期凋亡和总凋亡)呈明显的浓度和时间依赖性,不同浓度组和不同时间组与对照组比较均差异有统计学意义(均P＜0.05);阿司匹林呈时间依赖性地抑制Caco-2细胞中Lgr5 mRNA的表达,各实验组与对照组比较均差异有统计学意义(均P＜0.05);Lgr5蛋白在Caco-2细胞中大量表达,主要位于细胞质,少数定位于细胞膜,而细胞核不着色;5.0 mmol·L-1组中Lgr5蛋白亚细胞定位与对照组相同,10.0 mmol·L-1组和15.0 mmol·L-1组可见Lgr5蛋白亚细胞定位发生了改变,除了细胞膜、细胞质有表达外,细胞核也有表达.结论 阿司匹林通过抑制Lgr5基因的表达,并影响Lgr5蛋白亚细胞定位,呈时间和浓度依赖性地抑制体外培养的结肠癌Caco-2细胞的存活以及促进细胞凋亡,可能是阿司匹林防治结直肠癌的重要机制之一.

摘要： 目的 分析肿瘤生长速率(TGR)、富含亮氨酸的G蛋白偶联受体5(LGR5)和核苷酸还原酶M1(RRM1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及疾病进展中的评估作用.方法 选取2015年1月至2018年1月于合肥市第二人民医院就诊的97例NSCLC患者,取所有患者术中新鲜肺癌组织(NSCLC组)及距离癌组织5 cm处癌旁组织(对照组),比较不同组织TGR值及LGR5、RRM1的表达情况.分析影响NSCLC患者预后生存的相关因素及TGR、LGR5、RRM1对患者预后生存的影响.结果 NSCLC组LGR5阴性率及RRM1阳性率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).中低分化、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结侵犯者TGR升高率、LGR5阴性率及RRM1阳性率高于高分化、Ⅰ+Ⅱ期及无淋巴结侵犯者,差异有统计学意义(P<0.05).中低分化、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结侵犯、TGR升高、LGR5阴性及RRM1阳性表达为影响NSCLC患者预后生存的独立危险因素(P<0.05).TGR、LGR5、RRM1单项及联合检测AUC分别为0.820、0.715、0.821、0.905,各指标AUC以联合检测最大(P<0.05).TGR降低、LGR5阳性组及RRM1阴性组平均生存时间长于TGR升高、LGR5阴性组、RRM1阳性组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 TGR、LGR5、RRM1与NSCLC疾病进展、预后均有着密切关系,可作为预测患者预后生存的分子标志物和肿瘤治疗的潜在靶点.

摘要： 目的 观察阿司匹林对结肠腺瘤术后复发及干细胞标志物亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5(1 eucine-rich repeat-containing G protein coupled receptor 5,Lgr5)的影响,分析阿司匹林在防治结肠腺瘤术后复发中的临床价值.方法 选取2017年6月至2018年6月苏北人民医院手术治疗的结肠腺瘤患者85例,随机数字法分为干预组(43例,术后予以常规治疗+阿司匹林治疗)和对照组(42例,术后予以常规治疗).对比两组的术后复发情况及干细胞标志物Lgr5表达的差异,分析干细胞标志物Lgr5与术后复发的相关性.结果 与术前比较,对照组和干预组术后12月的Lgr5表达值均下降,但干预组Lgr5表达值降幅高于对照组(P<0.05).在术后12月时,对照组的腺瘤复发率为45.24％,显著高于干预组的18.60％(P<0.05).对照组术后12月的Lgr5阳性率54.76％,显著高于干预组的23.25％(P<0.05).干细胞标志物Lgr5阳性与术后复发正相关(r=0.785,P=0.014).结论 阿司匹林对结肠腺瘤术后复发有较佳的预防作用,同时由于其可降低结肠腺癌干细胞标注物Lgr5阳性表达率,可能在预防术后结肠腺瘤术后复发中起到一定的作用.

摘要： 目的:观察理气化湿方对皮下接种胃癌MGC-803细胞裸鼠肿瘤组织的干预作用及其对瘤体β-catenin、Wnt3a、Lgr5+基因和蛋白表达的影响.方法:将胃癌MGC-803细胞接种于健康雄性裸鼠腋下,成瘤后将裸鼠随机分为模型组、胃复春组(0.56?g/kg)和理气化湿方低、中、高剂量(3.9、7.8、15.6?g/kg)组,每组7只.各组分别灌胃给予相应药物或生理盐水,每日1次,共灌胃4周.灌胃结束后处死所有裸鼠,取肿瘤组织,切片、染色,显微镜下观察病理组织学改变.另一部分肿瘤组织应用RT-PCR法、Western?Blot法检测β-catenin、Wnt3a、Lgr5+基因和蛋白的表达情况.结果:模型组肿瘤组织细胞大小形态不一,核浆比例增大,核分裂明显,个别腺体呈共壁现象或囊状扩张;理气化湿方中、高剂量组肿瘤组织细胞形态较均匀,固有腺体排列整齐紧密,偶有淋巴细胞浸润,腺上皮和腺管分界清楚.与模型组比较,各给药组肿瘤组织β-catenin、Wnt3a、Lgr5+基因与蛋白表达水平均明显降低(P0.05).结论:理气化湿方可通过抑制β-catenin、Wnt3a、Lgr5+增殖,调控Wnt/β-catenin信号通路的异常活化,从而改善瘤体的病理状态、分化程度.

摘要： 本文提供的是微聚集体多细胞、最小极性化移植物的构建体，其含有表达含有富含亮氨酸重复序列的G‑蛋白偶联受体(LGR)的细胞，用于伤口治疗应用、组织工程学、细胞疗法应用、再生医学应用、医学/治疗应用、组织愈合应用、免疫疗法应用和组织移植疗法应用，其优选与递送载体/基底/支持物/支架联合以用于直接施用。

摘要： 本公开属于奶牛乳腺炎标志物技术领域，具体涉及LGR4作为奶牛乳腺炎预防、诊断或治疗标志物的应用。本公开以半同胞健康和大肠杆菌乳腺炎奶牛为模型，对血液嗜中性粒细胞进行DNA甲基化和RNA‑seq测序，整合分析转录组和甲基化数据，筛选出奶牛嗜中性粒细胞中的关键基因LGR4。通过亚硫酸盐测序法、克隆测序法和实时荧光定量PCR实验等方法检测关键基因LGR4在血液嗜中性粒细胞中外显子区域的甲基化水平、可变剪接体和基因的表达情况，鉴定出调控LGR4基因可变剪接模式的DNA甲基化分子标记，揭示了基因外显子区DNA甲基化在奶牛乳腺炎中发挥调控作用的分子机制，为奶牛乳腺炎的抗病分子育种提供新证据。

摘要： 本发明涉及LGR4/RSPO阻断剂与抗免疫检查点抑制剂联合用于肿瘤的免疫治疗，具体地，涉及一种产品组合，包括：(i)第一药物组合物，所述第一药物组合物含有(a)第一活性成分，所述第一活性成分为LGR4/RSPO阻断剂，以及药学上可接受的载体；和(ii)第二药物组合物，所述第二药物组合物含有(b)第二活性成分，所述第二活性成分为抗免疫检查点的抑制剂，所述免疫检查点选自下组：PD‑1、PD‑L1、CTLA‑4、TIM3、TIGITICOS、LAG3、OX40、CD47、VISTA、4‑1BB、或其组合；以及药学上可接受的载体。本发明联用LGR4/RSPO阻断剂和抗免疫检查点抑制剂可有效用于(i)治疗肿瘤；(ii)抑制肿瘤生长；(iii)抑制肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞细胞的抗肿瘤活性；和/或(iv)提高肿瘤对于抗免疫检查点疗法的敏感性。

摘要： 本文提供的是微聚集体多细胞、最小极性化移植物的构建体，其含有表达含有富含亮氨酸重复序列的G‑蛋白偶联受体(LGR)的细胞，用于伤口治疗应用、组织工程学、细胞疗法应用、再生医学应用、医学/治疗应用、组织愈合应用、免疫疗法应用和组织移植疗法应用，其优选与递送载体/基底/支持物/支架联合以用于直接施用。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，公开了抗LGR5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗LGR5单克隆抗体和应用。本发明所述抗LGR5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞保藏编号为CGMCC？NO：11086。本发明提供的杂交瘤细胞可稳定分泌产生抗LGR5蛋白单克隆抗体，且与LGR5蛋白特异性结合，而与蛋白芯片上近10000种其他蛋白无交叉反应，显著提高了LGR5蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠性，广泛适用于各种干细胞和肿瘤干细胞的标记。

摘要： 本发明属于胶质瘤技术，具体涉及一种应用CRISPR/Cas9和split GFP双分子荧光互补技术标记胶质瘤干细胞标志物LGR5的方法及试剂盒，克服因缺乏高特异性的抗体，使得现有方法无法准确检测LGR5在GSCs中的内源蛋白表达水平的难题。本发明巧妙的应用CRISPR/Cas9技术用较小的亚基GFP11标记LGR5蛋白，同时构建稳定表达较大亚基GFP1‑10蛋白的GSCs。当两个片段在同一细胞内，这两个部分能够稳定地相互作用，产生具有发光功能的GFP，从而可检测胶质瘤干细胞中的LGR5内源表达水平。其检测方法稳定性好，便于推广。

摘要： 本发明公开的是一种新型的消化道肿瘤特异性LGR5核心启动子及其筛选构建方法，启动子为p312/‑1786、p312/‑1188、p312/‑888、p312/‑688、p312/‑388、p312/‑188中任一种，用PCR方法，以DNA基因组为模板，使用LGR5启动子特异性引物，得到PCR产物为LGR5启动子全长序列p312/‑1786，用Nhe I和Hind III双酶切，并且与pGL3‑Basic质粒连接，得到pGL3‑p312/‑1786质粒；以pGL3‑p312/‑1786为模板，用携带Nhe I和Hind III酶切位点的不同的引物，经PCR获得含有不同LGR5启动子片段长度的质粒，并与pGL3‑Basic质粒连接，分别得到对应的质粒，具有高效的消化道肿瘤特异性，易于掌握、提高了腺病毒载体的靶向性和安全性。

摘要： 本发明描述了用于治疗癌症的抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物，其包含结合EGFR的细胞外部分的可变结构域和结合LGR5的细胞外部分的可变结构域，其中所述抗体或其功能部分、衍生物和/或类似物与拓扑异构酶I抑制剂一起施用。

摘要： 本发明涉及一种Lgr4在制备成骨细胞能量代谢药物中的应用。本发明证明了Lgr4敲除会使成骨细胞的有氧糖酵解和成骨能力受损，揭示了Lgr4在成骨细胞中的代谢调节功能，并有望为抗骨质疏松症治疗提供新的药物靶点。

摘要： 本申请公开了一种LGR液态水同位素分析装置，包括壳体、高精度线性工作台、第一条板、竖板、第二条板、导槽、导块、螺纹杆、螺纹座、伺服电机、连通座、进气口、第一连接管、汽化室、第二嵌合块、第二嵌合槽、连接套、气口、第一出气口、第二连接管、第二出气口、LGR液态水同位素分析仪、第三连接管、固定座、连接座、控制器、切换按键、接口、纵向移动座、侧板、活动板、导向槽、导向块、螺杆、脚轮、螺纹孔、旋转盘、第一嵌合槽、第一嵌合块、轴承和电磁阀。本申请有益之处在于具有五个汽化室，便于进行自由切换，与LGR液态水同位素分析仪及其自动进样器连用，满足高盐水长时间测量的需求。