分子生物学鉴定

摘要： 从降香中分离纯化获得一株产纤维素酶内生真菌JXP2-2,并对其进行了产酶活性测定和分子生物学鉴定。结果表明,菌株JXP2-2在PDB液体培养基中培养4.5 d时的产酶活性最强,纤维素酶活力达到84.50 IU·mL^(-1);菌株JXP2-2与尖孢炭疽菌(Colletotrichum acutatum)KX347475的碱基相似度高达99%,初步鉴定其为尖孢炭疽菌。

摘要： 研究从患烂鳃病的扁吻鱼及其水样中分离到5株优势菌株,观察优势菌株的菌落形态及生长曲线,提取菌株16S rDNA进行分子生物学鉴定,并采用水产生产实践中常用抗生素对菌株进行药敏试验,同时探讨了培养基、培养时间、培养温度3个因素对菌株药敏性的影响。结果表明:编号33、37、38的菌株属于柠檬酸杆菌属(Citrobacter sp.),编号35、36的菌株属于气单孢菌属(Aeromonas sp.);生长曲线测定表明,5株细菌用MH培养基在18°C下培养时,0~18 h均处于适应期,33、37和38号菌株在培养28~32 h进入衰亡期,35和36号菌株在培养22~26 h进入衰亡期;综合培养基、培养时间、培养温度3个因素,最终判定,对土霉素敏感的菌株为33和38号,对恩诺沙星敏感的菌株为35和38号,对氟苯尼考敏感的菌株为33、35、36和38号,对多西环素敏感得菌株为33和38号,5个菌株对新霉素和甲氧苄啶均不敏感;培养时间对药敏试验结果的影响较小,而培养基和培养温度对药敏试验结果的影响较大。

摘要： 在乌鲁木齐市多家宠物医院、宠物店、犬舍、流浪犬基地、社区随机选取无明显临床症状的犬共1054只,采集其体表蜱虫889只,通过形态学鉴定及蜱虫的线粒体16S rDNA基因扩增序列进行分子生物学鉴定。鉴定得到假头基呈六角形的蜱虫,所采集的蜱虫初步鉴定为血红扇头蜱和图兰扇头蜱。发现血红扇头蜱和图兰扇头蜱的16S rDNA基因与已发表的国内河北株(JF979377)及新疆株(KU364373)同源性分别为97%和99%,与形态学鉴定结果一致。

摘要： 【目的】研究传统发酵酸凝硬质奶酪中乳酸菌的分离鉴定及其体外益生特性,得到产酸性能较高的菌株,测试体外益生特性,筛选出优良益生菌。【方法】采用传统分离纯化方法,以新疆伊犁地区昭苏县农家自制自然发酵酸凝硬质奶酪为原材料,运用稀释涂布、平板划线以及复筛纯化的方法,从自然发酵奶酪中分离得36株菌株,观察其菌落与菌株形态特征并检测生理生化,选取符合条件的菌株运用16S rDNA同源序列分析方法鉴定其分子生物学。【结果】鉴定6株为乳酸菌,5株是瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus),另外1株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。这些菌株的耐胆盐、耐酸、耐模拟胃液以及表面特性得知植物乳杆菌E_(11)在这些方面的性能最佳。【结论】该菌株在浓度为0.5%的胆盐培养基中存活率达到46.42%,pH 2的条件下存活率仍然保持在20%以上,静置5 h后其自凝集率达到63.6%,对二甲苯的疏水率为44.26%。

摘要： 为调查贵州省浮萍种间亲缘关系及变异情况,研究在贵州省辖9个地级行政区的多处水环境中共采集到41份浮萍种质,通过形态鉴定这些种质中33个属于绿萍属(Lemna),6个属于紫萍属(Spirodela),2个属于斑萍属/兰氏萍属(Landoltia)。利用叶绿体atpF-atpH间隔序列和rpS16内含子序列进行分子生物学分析和鉴定,41份浮萍种质聚类到Lemna aequinoctialis、Lemna minor、Spirodela polyrhiza和Landoltia punctata 4个种。atpF-atpH间隔序列和rpS16内含子序列的单倍型多样性分别为0.98700和0.64700,群体突变率分别为0.15380和0.14334,平均每kb核苷酸差异数为47.20000和61.72200,核苷酸多态性分别为0.08725和0.09158。研究讨论了中国亚热带温润季风地区浮萍的遗传多样性,为浮萍亲缘关系分析提供了依据,也为亚热带湿润季风气候地区植物的种属鉴定及资源化利用奠定了基础。

摘要： 枸杞是我国宝贵的“药食同源”型植物资源,我国药典收载的唯一药用枸杞植物。枸杞鲜果属于多汁小浆果,皮薄肉厚,水分含量高,采摘后容易被病原菌侵染,难以贮藏保鲜。为明确侵染不同品种枸杞鲜果的病原菌种类,采用形态学、分子生物学等2种方法开展枸杞鲜果采后主要病原菌的分离鉴定研究,经鉴定和致病性确定链格孢属(Alternaria)、葡柄霉属(Stemphylium)、毛霉属(Mocur)、曲霉属(Aspergillus)是枸杞鲜果的主要致腐病原真菌,杆菌和沙门菌的近似属为枸杞鲜果腐烂病害的潜在生防菌,同时发现,宁杞7号在枸杞主栽品种中具备明显的抗病优势。以上结果可为枸杞鲜果采后腐烂病害拮抗菌的筛选和生物防治提供理论基础,也为今后枸杞及制品安全流通提供了技术保障。

摘要： 为了解黑龙江省林蛙肺部寄生线虫的种类和感染情况,2019年-2020年在黑龙江省采集黑龙江林蛙778只和东北林蛙174只,从其肺脏内检获线虫进行形态学鉴定后,提取虫体DNA,用通用引物对其核糖体DNA的内转录间隔区(ITS)序列进行PCR扩增,并进行克隆和测序,经Blast进行同源性分析,并应用MEGA 6.0软件构建系统发生树;同时分析林蛙肺线虫的感染情况。结果表明,黑龙江林蛙和东北林蛙检出的肺线虫形态一致,初步鉴定为蟾蜍棒线虫(Rhabdias bufonis)。获得的ITS序列长度为711 bp,与GenBank中已公布的蟾蜍棒线虫(KF999593)序列的相似性为99.43%,与蟾蜍棒线虫(KF999593)处于同一分支中。依据形态学与分子生物学鉴定结果该虫体为蟾蜍棒线虫。2种林蛙肺脏线虫总感染率为90.97%,平均感染强度为13.45条。东北林蛙肺线虫的感染率和平均感染强度分别为89.66%和18.19条;黑龙江林蛙感染率和平均感染强度分别为91.26%和12.41条,2种林蛙的感染率和感染强度差异均不显著(P>0.05)。研究结果可为黑龙江省林蛙肺线虫病的防控提供科学依据。

摘要： 从新疆阜康市和库尔勒市的苹果及香梨根际土壤中分离到一种线虫,通过形态特征观察、形态测计,并提取DNA,扩增其18S rDNA、28S rDNA D2-D3和ITS区基因片段,利用NJ法构建系统进化树,进行种类鉴定。结果表明,供试线虫群体形态学特征与畸形轮线虫山东种群、荷兰种群测计值基本一致,构建的18S rDNA区、28S rDNA D2-D3区和ITS区序列系统进化树与NCBI上记录的畸形轮线虫聚为同一支。结合形态学特征与分子生物学特征,将该新疆线虫种群鉴定为畸形轮线虫(Criconemoides informis),也是该线虫在新疆果树上的首次报道。

摘要： 南京农业大学食品科学技术学院研究人员分离并鉴定山东潍坊生姜根腐病病原菌,研究了5种芽孢杆菌来源抗菌脂肽(fengycin,bacillomycin D,iturin A,brevibacillin V和brevibacillin)对病原菌的抑菌作用,并在土壤环境中通过生姜切片侵染试验法测定了抗菌脂肽对生姜根腐病的防治效果。形态学和分子生物学鉴定结果表明,生姜根腐病病原菌为群结腐霉(Pythium myriotylum)。

摘要： 为探明广西南宁地区水牛体内前后盘吸虫的种类,通过对其肝脏来源虫体进行鉴定,确定水牛感染的具体种属.本研究对南宁市某屠宰场水牛肝脏进行剖检、病理观察,并采集肝脏内寄生的前后盘吸虫进行虫卵孵育,对孵育所得的虫卵及虫体进行形态观察,对成虫虫体进行HE及苏木素染色,观察其内部的结构,并采用分子生物学方法对成虫进行鉴定.结果显示,虫体感染的肝脏表面有出血点,且呈现淤血、化脓灶、肝脏肿大、质地偏软等肉眼可见病变.虫卵呈椭圆形、淡灰色、有卵盖且内含圆形胚细胞,卵黄细胞不充满整个虫卵.对成虫染色观察可见虫体由体壁及内部生殖、消化等系统构成.体壁由皮层和肌层组成,虫体可见生殖系统、消化管和一些肌束与纤维组织,其中生殖系统包括卵巢、子宫和睾丸等生殖器官,消化管分布于整个体腔.虫体核糖体基因ITS-2扩增产物为441 bp,分析显示与GenBank中Explanatum explanatum(AB743577.1)相似性达99.3％.遗传进化分析显示此虫体与Explanatum explanatum具有很近的亲缘关系,同属一个分支.综合剖检病理变化,虫卵特性,虫体形态特性及分子生物学结果,确定该虫体为前后盘科的Explanatum explanatum.本研究结果为前后盘科吸虫分类鉴定提供一定的理论基础,并进一步丰富该科的虫体种类,此外初步了解广西南宁地区水牛前后盘吸虫病的流行情况,并为准确防治吸虫感染提供一定的理论依据.

摘要： 本文应用厌氧Hungate技术,从大庆油田注聚站的采出液中分离到一株聚丙烯酰胺降解菌株.对该菌株进行形态、生理生化、分子生物学鉴定.分离菌株为G-,短杆菌,无芽孢,菌株最适pH值为8.0,喜中性偏碱环境;最适温度为38°C,属于嗜中温菌,具有硫酸盐还原功能,产H2S,兼性厌氧.通过16S rDNA和16S～23S rDNA间隔区序列鉴定,A12菌株与Anaerofilum pentosovorans(AP716816S)的相似性最高,鉴定为Anaerofilum属,暂时命名为Anaerofilum pentosovorans A12(GenBank登录号为DQ011251).GC-MS初步分析聚合物发生断链,低分子量化合物除含双键、环氧和羰基的聚丙烯酰胺碎片外,大多属于一般丙烯酰胺低聚体的衍生物,菌株对聚合物具有一定的生物降解功能.分离得到的菌株具有好的聚丙烯酰胺降解能力.

摘要： 对从酱醅中分离筛选出的耐高渗嗜盐性乳酸细菌, 进行了生理生化鉴定, 结果如下:该菌革兰氏染色呈阳性,过氧化氢酶反应呈阴性,可以在pH 5.0下生长, 在18％或更高的NaCl浓度中能够正常生长代谢, 从葡萄糖主要产L(+)乳酸,属于四联球菌属的嗜盐性乳酸球菌. 进一步对该菌进行分子生物学鉴定,测得菌株的16S rRNA序列与GenBank登记号为FSB201的嗜盐四联球菌(Tetragenococcus halophilus)具有99％的同源性.再将该16S rRNA序列与乳酸菌分类中17个模式菌株的16S rRNA序列共同创建进化树,发现筛选菌与GenBank登记号为AB106344、AB106343的嗜盐四联球菌亲缘关系最近,证明筛选菌应属四联球菌属中嗜盐四联球菌中的一种.

摘要： 从放牧饲养条件下随机挑选10头屠宰后的青海大通牦牛瘤胃中采集食糜样本,使用亨盖特滚管技术筛选得到29株厌氧真菌菌株.以小麦秸秆为底物,测定这些菌株第六天培养液中乙酰酯酶,阿魏酸酯酶,木聚糖酶,羧甲基纤维素酶和微晶纤维素酶的活性.发现各菌株五种酶活差异显著,阿魏酸酯酶活性最高的菌株比活性最低的菌株活性高出7.9倍,在五种酶活中差异最显著;而羧甲基纤维素仅高出2.5倍,在五种酶活中差异最不显著.对五种酶活进行相关分析,乙酰酯酶,阿魏酸酯酶,木聚糖酶和羧甲基纤维素酶相互间均存在很强的正相关性(r＞0.67,P＜0.0001),而且它们之间的相关性高于其与微晶纤维素间的相关性(P＞0.05).从中筛选得到一株高产纤维降解酶厌氧真菌YAK11,该菌株培养液中第六天酶活分别达到165.24mU,10.69mU,1138mU,83.67mU和16.01mU.通过18S rDNA基因序列分析这株菌,初步确定该菌株为Neocallimastix frontalis。

摘要： 分离患病三疣梭子蟹样本中的病原菌,对分离菌株进行形态特征、理化特性和分子生物学鉴定.采用普通营养琼脂及zobell2216E海水营养琼脂分离患病样本中的病原菌.采用细菌常规生化鉴定方法,了解细菌的形态和生理生化特性.采用16S rRNA和gyrB基因序列同源性比对,进一步明确该病原菌的分类学地位.采用人工感染实验的方法,证明分离菌株是三疣梭子蟹致病病原菌.该菌革兰氏阴性,氧化酶阳性,葡萄糖发酵型,在低于10g/L的NaCl胨水中不生长.16S rRNA和gyrB基因与需钠弧菌(Vibrio natriegen)同源序列具有99%的相似性.分离菌株对三疣梭子蟹有明显的致病性.需钠弧菌是引起江苏省连云港市赣榆县石桥镇九里村三疣梭子蟹严重死亡的病原菌.

摘要： 本文中通过对美国进境大豆病害分离，共得到32个菌株，并对其中3株镰刀菌进行了形态学和分子生物学鉴定，确认了它们分别是尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)和拟枝孢镰刀菌(Fusarium sporotrichioides)。本研究证实了美国大豆中镰刀菌的多样性，可为港口的植物检疫工作提供借鉴，有利于更好地把好国门关。

摘要： 从患病缢蛏中分离到一株病原菌，暂命名为12#菌。对该菌株的16SrDNA的全序列进行PCR扩增并测序，然后用NCBIBLAST对测序结果进行比对。16S rDNA序列分析表明：12#菌与多株气单胞菌的16S rDNA的同源性均在95％以上。在细菌系统分类学中应归属于气单胞菌属。从构建的系统发育树中可以看出：12#菌与点状产气单胞菌(Aeroonas punctata)共同构成一个分支，且该菌株与点状产气单胞菌(Aeromonas punctata)的16SrDNA同源性达到99％以上，由此可以初步认为该菌为点状产气单胞菌(Aeromonas punctata)。

摘要： 本试验从患病缢蛏中分离到一株病原菌，命名为1#菌株。采用传统方法提取菌株DNA，PCR扩增其16S rDNA基因片段、测序，得到该菌基因片段序列长度为1438 bp。用MegAlign软件进行比对5种不同种细菌基因序列，并构建进化树。16S rDNA产物序列分析结果表明：该菌株的16S rDNA的核苷酸序列与多株假单胞菌的同源性为99％，在系统发育树上构成一个分支。在细菌系统发育分类学上，该菌株属于假单胞属，但与巳定名的假单胞菌有一定的差异，与几种未定名的Pseudomonas sp．的亲缘关系最接近。因此，对其分类地位的最后确定还需进一步的系统发育学分析。

摘要： 三次采油产生大量含聚丙烯酰胺(PAM)污水,亟待生物化学处理,其中最核心的问题是PAM的生物降解.从油田产聚合物污水和污泥中分离到7株PAM降解菌,并对其种属进行了电镜分析和分子生物学鉴定,结果分析表明7株菌分别归类于放线杆菌纲(Actinobacteria)和α-变形菌纲(Alphaproteobacteria)及芽孢杆菌(Bacillus).降解结果表明,7株聚丙烯酰胺(PAM)降解菌在合适的营养条件下协同作用,对油田的含PAM的污水具有较好的处理效果.经过3d的处理,微生物菌群将补充了磷和氮的污水的COD降低了87.7％;经过18d的处理,微生物菌群将补充了磷的污水的COD由13499mg·L-1降低为283mg·L-1,降低幅度达到了97.9％.建议进一步研究微生物群落中各菌株的协同作用机制和降解酶系及微生物群落的最佳培养条件.

摘要： 本发明公开了一种鉴定棉铃虫和烟青虫幼虫的分子生物学方法及其专用引物对。所述专用引物对包括由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2组成的引物对甲，由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4组成的引物对乙。本发明针对棉铃虫和烟青虫幼虫形态难以鉴别，不能提供科学有效防治措施的现状，提供了一种科学有效、简便易操作、准确且低成本的快速鉴定方法及其专用引物对，在植物检疫、农业防治方面有重要意义。

摘要： 本发明提供一种用于鉴定刀鲚和短颌鲚的引物和分子生物学方法，其中该引物包含扩增引物组和延伸引物组；所述扩增引物组的核酸序列如SEQ ID NO：1‑16所示，所述延伸引物组的核酸序列如SEQ ID NO：17‑24所示。该引物组合物能够有效用于刀鲚和短颌鲚物种的鉴定。该分子生物学方法步骤包括：构建待测刀鲚和短颌鲚SNP位点区域核酸测序文库，并对其进行测序获得测序结果；基于所述测序结果，确定所述刀鲚和短颌鲚SNP位点区域核酸序列；然后利用Structure2.3.2软件，绘制群体遗传差异的柱形图和个体遗传差异的柱形图，利用该分析判断物种种类。该方法步骤简便、准确、高效且费用低廉。

摘要： 本发明涉及一种海水养殖贝类的种类鉴定技术领域，尤其是一种利用形态学和分子遗传学技术对贝类样品进行种类鉴定的方法，该方法采用分子生物学方法与形态学方法相结合的方法对贝类进行鉴定，通过分子生物学方法对具有一定形态特征的贝类样品进行准确鉴定，总结可用于种类鉴定的形态特征，建立形态特征检索表，再利用形态特征检索表对其他样品进行种类识别，并采用分子生物学方法进行验证，能显著提高贝类种质资源鉴定的准确率，解决先前种类鉴定的诸多难点。

摘要： 本发明公开了一种快速鉴定新疆两种同域分布的雅罗鱼分子生物学方法，包括如下步骤：1)采用改良酚‑氯仿法分别提取雅罗鱼组织的基因组；2)设计线粒体12S rRNA基因的引物；3)以两种鱼的DNA为模板，进行PCR扩增；4)PCR产物用1％琼脂糖凝胶电泳检测，挑选条带清晰的PCR产物进行测序；5)序列比对。有益效果为：本发明分子生物学方法科学有效、简单快捷、准确可行，特异性强、可信度高，不用处死雅罗鱼，能够一次性对两种物种同时进行扩增，具有高效快速和便捷的优点。

摘要： 本发明公开了一种鉴定棉铃虫和烟青虫幼虫的分子生物学方法及其专用引物对。所述专用引物对包括由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2组成的引物对甲，由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4组成的引物对乙。本发明针对棉铃虫和烟青虫幼虫形态难以鉴别，不能提供科学有效防治措施的现状，提供了一种科学有效、简便易操作、准确且低成本的快速鉴定方法及其专用引物对，在植物检疫、农业防治方面有重要意义。

摘要： 本发明属于微生物基因型鉴定技术领域，尤其涉及一种中型无绿藻分子生物学鉴定方法及应用。本发明旨在利用分子生物学方法进行中型无绿藻鉴定及基因分型，以进一步调查该病原在我地区的感染情况，并进行防控措施的研究。基因型鉴定技术方案要点包括：根据目标cob基因序列设计引物，其中，针对中型无绿藻基因1型和2型的cob基因序列的正、反向引物序列；提取待测DNA模板；利用设计的引物及获取的DNA模板进行PCR反应，并根据电泳结果判断基因型。

摘要： 本发明公开了一种分子生物学与形态学相结合鉴定鱼类早期个体的方法，其步骤：A、数据库建立：采集可以准确鉴定种类的样品保存于乙醇中，建立鱼类的barcoding数据库；B、样品保存：将采集的样品保存在添加硼酸钠或乙酸钠的4%甲醛保存液中；C、样品形态分组：在解剖镜下将不能准确确定种类的样品依据形态特征归类，记录形态特征；D、分子生物学鉴定：将选出的样品提取DNA、扩增mtDNA的COI基因片段并测序，确定种类；E、形态学鉴定：依据步骤C中记录的样品形态特征，进行种类鉴定；F、鉴定结果的分子生物学验证。方法易行，操作简便，准确性极高，解决了种类鉴定的技术难题，为鱼类早期资源的提供了技术支持。

摘要： 本发明公开了老陈醋醋化阶段不同微生物菌株分子生物学鉴定试验方法，实验材料包括采集的老陈醋醋化阶段74株不同菌株(Y1‑Y74)，实验包括如下步骤：引物设计及合成；老陈醋醋化阶段不同菌株DNA提取及浓度测定；老陈醋醋化阶段不同菌株26S rDNA片段扩增；PCR扩增产物纯化与回收；目的片段和pEASY‑T1载体连接；转化；蓝白斑筛选与菌液PCR；测序；数据处理。本发明应用分子生物学技术，对看家基因26S rDNA测序鉴定，对老陈醋醋化阶段74株不同菌株进行分子生物学鉴定，结果显示Y1‑Y25、Y27‑Y29、Y31‑Y67、Y69、Y72‑Y74为酿酒酵母；Y26为毕赤酵母；Y30、Y71为毕赤酵母；Y68为红酵母；Y70为盔形毕赤酵母，为增香酵母的筛选鉴定提供依据。

摘要： 本发明涉及一对人参属特异性引物及中成药内人参属中药材的分子生物学鉴定方法，所述人参属特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；并涉及一种人参属中药材特异性DNA分子标记，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；以及一种利用人参属特异性引物鉴定中成药内人参属中药材的方法；应用本发明发现的特异性引物对，可在基因组混杂且碎片化的状态下，对中成药内的人参属药材进行快速直观的检测，整个过程操作简单，可重复性良好。

摘要： 本发明属于微生物基因型鉴定技术领域，尤其涉及一种中型无绿藻分子生物学鉴定方法及应用。本发明旨在利用分子生物学方法进行中型无绿藻鉴定及基因分型，以进一步调查该病原在我地区的感染情况，并进行防控措施的研究。基因型鉴定技术方案要点包括：根据目标cob基因序列设计引物，其中，针对中型无绿藻基因1型和2型的cob基因序列的正、反向引物序列；提取待测DNA模板；利用设计的引物及获取的DNA模板进行PCR反应，并根据电泳结果判断基因型。