摘要:
目的:本实验通过建立单侧输尿管梗阻大鼠(UUO)模型,从组织和分子水平对Wnt11在梗阻性肾间质纤维化中的表达部位及其与肾间质纤维化的关系进行初步研究.方法:48只SPF级雄性Wistar大鼠(115-160克,4-6周),购自中国医科大学附属盛京医院实验动物中心.随机分为:模型组(UUO)和阴性对照组,模型组根据梗阻时间3d、5d、7d、14d、21d分为5组,每组8只.模型组(UUO组):行左侧输尿管结扎束制作梗阻性肾纤维化模型,10%水合氯醛(3ml/Kg)腹腔注射麻醉后右侧卧位固定,于左侧胁腹部触及肾脏大体位置后竖直切口,暴露肾脏,沿左肾下极寻找并分离输尿管,用4-0号手术线上下结扎后剪断,分层缝合并关闭腹腔.对照组不予特殊处理.分别于术后3d,5d,7d,14d和21d10%水合氯醛(3ml/Kg)腹腔注射麻醉后,无菌条件下取左侧肾组织,盐水冲洗,纱布吸干表面水分,一部分置于4%多聚甲醛固定后待做肾脏病理形态学检测和免疫组化,一部分置于-80°C冰箱中待行PCR基因检测.结果:1.大体形态观察:UUO组大鼠左侧肾脏随着梗阻时间延长体积逐渐增大,表面光滑度下降,颜色由深红色逐渐变为苍白,5d开始出现明显的肾积水,随时间延长积水亦增多明显,肾皮质逐渐变薄,皮髓质界限不清,对照组为正常肾脏表现.病理改变:HE染色随着梗阻时间延长,肾间质炎性细胞浸润,肾小管萎缩,凹陷,囊状改变.Masson染色可见梗阻后肾纤维化随梗阻时间呈现逐步加重趋势.2.Wnt11蛋白和mRNA在UUO大鼠肾脏中的表达情况:免疫组化观察对照组Wnt11蛋白在肾小管上皮细胞表达较少,可见于集合管胞浆内;UUO组术后3d在肾小管上皮细胞胞浆可见表达,并随时间延长表达明显增加.Realtime PCR检测Wnt11基因显示其随梗阻时间出现持续升高趋势.结论:胚胎肾脏发育基因Wnt11在梗阻性肾病中出现表达,且随着梗阻时间的延长Wnt11表达更加明显.Wnt11蛋白在梗阻性肾病中的肾小管上皮细胞出现重新表达,且随梗阻时间延长表达逐渐增加.Wnt11表达与肾间质纤维化程度呈正相关,可能参与肾小管上皮转分化的发生发展.