几丁质酶基因

摘要： 本研究基于生物信息方法对中华按蚊的几丁质酶基因家族进行全基因组鉴定与分析。利用BLAST、HMM及Softberry网站中的基因预测程序进行序列鉴定、检验及补充,筛选出23个中华按蚊几丁质酶基因及类似基因,并进行系统发生分析,将中华按蚊几丁质酶基因分为八大家族,其外显子数为2~13个,跨度较大;基因分布分析结果表明AsCht5-1、AsCht5-2、AsCht5-3、AsCht5-4和AsCht5-5位于Scaffold14,在染色体上成簇分布。以上鉴定与分析结果为后续对中华按蚊几丁质酶基因功能的研究奠定了一定基础。

摘要： 以农杆菌介导法将水稻几丁质酶基因导入甜瓜品种"雪脆蜜2号",PCR检测发现目的基因业已导入甜瓜植株,Southern blot杂交分析证明目的基因已整合到转基因甜瓜植株的染色组上,即获得了甜瓜转基因植株;田间抗病的生物学鉴定结果证明转基因植株提高了对白粉病的抗性,同对照比较,抗性提高2～4级,转基因甜瓜植株的其它农艺性状与阴性对照基本一致.结论为通过转基因技术能够筛选和培育出高抗白粉病的甜瓜新品种.

摘要： 为研究几丁质酶在猕猴桃抗果实熟腐病中的功能及抗性利用,对猕猴桃几丁质酶基因进行克隆并分析其蛋白结构.以猕猴桃抗病品种'金艳'果实为材料,接种果腐病菌(Botryosphaeria dothidea),72 h后提取果实总RNA.使用引物对AcC-F/AcC-R和RT-PCR技术,扩增几丁质酶基因.克隆、测序和序列分析表明,该基因(命名为AcCHI1,基因登录号MH580296)开放阅读框为795 bp,编码264个氨基酸,与茶树(Camellia sinensis)几丁质酶蛋白序列同源性最高,为81％.生物信息学分析表明,该蛋白属于I类几丁质酶,分子质量28.6 ku,等电点8.58,为亲水性稳定蛋白,含有信号肽,无跨膜结构,二级结构主要由无规则卷曲构成,三级结构与I类几丁质酶同源模板(4tx7.1.A)结构相似性为69.7％.研究结果为进一步开展猕猴桃几丁质酶基因功能研究和应用提供了理论依据.

摘要： 为了探讨花生几丁质酶在抵御真菌性病害中的作用,克隆了花生几丁质酶基因并通过遗传转化验证了该基因的功能.以花生品种花育23号基因组DNA和RNA为模板,通过PCR及RT-PCR扩增分别获得长度为1779 bp的花生几丁质酶基因DNA序列及795 bp的全长cDNA序列.DNA及cDNA序列比对结果表明,该基因包含3个外显子和2个内含子,内含子剪切符合"GT……AG"规则,其cDNA序列被命名为Ah-Chi,编码265个氨基酸,GenBank注册号为HQ439775.利用NCBI在线Blast进行序列比对,结果表明,该蛋白产物与水稻、玉米、紫花苜蓿、大豆、拟南芥的相关蛋白的同源性分别达到83％,83％,72％,58％,49％.用Ah-Chi替换掉植物表达载体pCAMBIA1301上的Gus基因,成功构建了植物过表达载体pCAMBIA1301-Ah-Chi.利用农杆菌介导法将pCAMBIA1301-Ah-Chi转化花生胚小叶外植体,获得再生小苗,经嫁接移栽获得再生植株.利用PCR扩增筛选获得转基因阳性植株,RT-PCR扩增结果表明,转基因植株中Ah-Chi基因表达量增加.用黑斑病菌接种转基因植株和非转基因对照植株离体叶片7 d后,发现非转基因植株叶片褐化及坏死程度较为严重,而转基因植株叶片褐化及坏死程度相对较轻,初步说明转基因植株抗病性增强.

摘要： According to the conserved sequences of chitinase gene,the chitinase gene ChCHI was isolated from leaf of Chrysanthemum morifolium using RT-PCR and RACE method (The accession number in GenBank:KX881373).The full-length cDNA of CHCHI was 1385 bp,containing a 960 bp open reading frame which encodes 319 amino acids.Encoding product of ChCHI gene was a kind of hydrophilic and stable protein with a molecular weight of 33.5 kD and isoelectric point of 6.38.Prediction of secondary structure indicated that the protein was mainly composed of alpha helix and random coil.Sequence alignment and phylogenetic analysis showed that the amino acid sequence of ChCHI belongs to family 19 of glycoside hydrolase.CHCHI was highly identified with the chitinase protein from Mikania micrantha (ACO25187.1) with the similarity of 87％.The results of qRT-PCR analysis showed that the expression level of the ChCHI gene in leaves of Chrysanthemum morifolium was significantly increased under the SA treatments.The results implied that ChCHI gene may play an important role in the molecular regulation of resistance to environmental stress in chrysanthemum morifolium.%根据GenBank发布的几丁质酶基因的保守序列设计简并引物,采用RT-PCR和RACE技术,克隆到菊花1个几丁质酶基因ChCHI(GenBank登录号为KX881373).ChCHI基因cDNA全长为1 385 bp,包含960 bp开放阅读框,编码319个氨基酸.ChCHI属于亲水性蛋白,相对分子质量约为35.5 kD,等电点为6.38,为稳定蛋白,二级结构预测表明该蛋白以α螺旋和无规则卷曲为主.蛋白序列比对和进化树分析表明,ChCHI基因编码的蛋白属于糖苷水解酶19家族几丁质酶,与薇甘菊(AC025187.1)几丁质酶蛋白的亲缘关系最近,序列一致性为87％.qRT-PCR分析结果显示,SA处理可以明显提高贡菊叶片中ChCHI的表达量.菊花ChCHI在对抗环境胁迫的分子调控中起重要作用.

摘要： The chitinase with an inhibition effect on various pathogenic fungi was cloned and analyzed to reveal the inhibition mechanism of B.subtilis HAS against sugarcane S.scitaminea.Results: The genome of HAS strain contains a chitinase coding sequence with 834 bp and the chitinase coding sequence has chitinase protein with 278 animo acids.The homology between the chitinase coding sequence and B.subtilis subsp.subtilis str.168)(ref| NP_390566.1)listed in GenBank is up to 98％.In conclusion, the chitinase in B.subtilis HAS strain may play a vital role to inhibit sugarcane S.scitaminea.%为揭示枯草芽孢杆菌菌株HAS对甘蔗黑穗病菌抑制作用的机理,选取对多种病原真菌有抑制作用的几丁质酶进行克隆与分析.结果表明:菌株HAS基因组中含有1个ORF全长834 bp的几丁质酶编码序列,其具有编码278个氨基酸的几丁质酶蛋白,该序列同GenBank上登录的几丁质酶蛋白(Bacillus subtilis subsp.subtilis str.168)(ref| NP_390566.1)的同源性最高,达98％.推测该几丁质酶在菌株HAS抑制甘蔗黑穗病菌过程中可能起关键作用.

摘要： To clarify the role of chitinase in the process of pear resistance disease, the total RNA of Yali was extracted and specific primers were designed to amplify the coding region of PbChiⅡprotein by RT-PCR,analysed the expression pattern of PbChiⅡafter treatment with pathogens. The prokaryotic expression vector pET30a-PbChiⅡwas constructed and the recombinant protein was expressed in E. coli BL21 ( DE3 ) . The recombinant protein growth ability was analyzed under abiotic stress. The results showed that the length of PbChiⅡ( GenBank accession Number:KP876485) gene was 969 bp,Quantitative Real-time PCR ( qRT-PCR) analysis revealed that the expres-sion of PbChiⅡwas regulated by pathogens, and enhanced up to the peak at 48 h after treatment with Venturia nashicola during 96 h. The PbChiⅡgene was successfully subcloned into the expression vector pET30a. SDS-PAGE analysis showed that a specific recombinant protein of approximately 35 . 53 kDa was produced in the BL21 ( DE3) with the prokaryotic expression vector pET30a-PbChiⅡin 37 °C with 1. 0 mmol/L IPTG for 2 hours. This protein enhanced the stress of isolate with NaCl,CuCl2 ,CdCl2 and ZnSO4 . This research provided basic references for further study the function of PbChiⅡ.%为明确几丁质酶在鸭梨抗病过程中的作用,以鸭梨为试材,提取总RNA,采用RT-PCR方法克隆几丁质酶基因PbChiⅡ,分析PbChiⅡ在梨黑星病菌诱导下的表达模式,构建原核表达载体pET30a-PbChiⅡ,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达PbChiⅡ蛋白,分析重组蛋白在非生物胁迫下的生长能力.结果表明:PbChiⅡ基因全长(基因登录号:KP876485)969 bp,实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)分析显示,PbChiⅡ基因的表达受病原菌的调控,在供试的96 h内,梨黑星病菌可诱导该基因表达,且表达量在48 h达到最高.将PbChiⅡ基因成功克隆到原核表达载体pET30a上,SDS-PAGE分析表明,该重组蛋白在37°C,1.0 mmol/L IPTG诱导2 h,表达量最大.转pET30a-PbChiⅡ载体的大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达了分子量约35.53 kDa的重组蛋白.诱导的蛋白可增强菌体在NaCl、CuCl2、CdCl2和ZnSO4等非生物胁迫下的生长能力.为进一步探索PbChiⅡ基因的功能提供了基础资料.

摘要： Chitinase,which can degrade most fungal cell walls,prevent or interrupt the fungal infection,colonization and expansion in plants,has attracted a lot attention in fungi disease resistance.In this paper,we reviewed the characteristics of chitinase originated from fungi,the inhibition mechanism to fungi,the resistance evaluation of the transgenic plants,the application of chitinase-producing strains and related products in the biological control,and prospects for the development in the future.%几丁质酶可以降解大多数真菌细胞壁,阻止或中断真菌在植物体内的侵染、定殖和扩展,在抗真菌病害的研究方面受到广泛关注.本文综述了真菌源几丁质酶的特性,对真菌的抑制作用机制,转几丁质酶基因植株的抗性评价,产几丁质酶菌株和相关制剂在生物防治方面的应用,并对其在生产上的发展前景进行了展望.

摘要： 以鸭梨为试材,采用qRT-PCR技术克隆鸭梨果实几丁质酶基因PbChiⅡ,并对几丁质酶氨基酸序列进行聚类分析;同时采用荧光定量PCR的方法对鸭梨植株不同器官及水杨酸(salicylic acid,SA)和梨轮纹病菌(Botryosphaeria berengeriana de.Not.f.sp.piricola (Nose) Koganecawa et.Sokwwa)处理后几丁质酶基因的表达量进行了分析,以期为该基因的进一步研究与利用提供参考依据.结果表明:PbChiⅡ基因长度为969 bp,核苷酸序列及推导的氨基酸序列与沙梨的同源性均达到100％,该基因属于第Ⅱ类几丁质酶基因;PbChiⅡ在根和果实中表达量较大.在鸭梨果实中,SA和病原菌可诱导该基因表达,且表达量在48 h达到最高,初步推测PbChiⅡ可能参与SA介导的植物抗病防卫反应的信号通路及轮纹病菌引起的防卫反应.

摘要： 为建立高效的香蕉遗传转化体系并将几丁质酶基因转到香蕉主栽品种巴西蕉中，以获得抗香蕉枯萎病的新种质，本研究以巴西蕉球茎横切薄片为转化受体，摸索了卡那霉素和G-418的最佳筛选浓度，优化了共培和筛选等条件，建立了以农杆菌介导的巴西蕉薄片遗传转化体系。试验结果表明，G-418更适合于香蕉薄片为受体的筛选用抗生素，其最佳筛选浓度50mg/L；共培则以固体-液体-固体培养基共培6天效果最好，经过对抗性芽2～3次继代筛选和PCR鉴定，试验获得5个转基因株系。

摘要： 根据登录号为AY525367的三类酸性几丁质酶基因设计引物,从香蕉果实cDNA文库中扩增到了该基因.对在乙烯利催熟处理、1-MCP抑制处理以及对照条件下的香蕉果实采后不同时期分别进行了该基因的差异表达分析.结果表明：乙烯利处理的香蕉果实,基因表达量在采后第4天达到高峰,且在果实采后成熟的整个过程中,基因表达的整体水平都比抑制处理和对照的要高,对照处理的果实基因表达呈现出明显的下调趋势;而1-MCP抑制处理的香蕉果实,几丁质酶基因表达量一直都比较低.这一结果表明,几丁质酶基因的表达受乙烯诱导,受1-MCP抑制.因此我们推测,外界刺激诱导或抑制了几丁质酶基因的表达以后,才促进或推迟了果实的成熟过程.我们还发现,无论何种处理的香蕉果实,刚从树上采下时即采后0天,基因表达量都很高.这个结果表明,在香蕉果实采后成熟过程中,机械剌激是一种很重要的信号,它能诱导几丁质酶基因的表达.

摘要： 选用"金辉一号"为试验材料,通过农杆菌介导成功地将菜豆几丁质酶基因导入到南瓜中,4株转化植株的PCR检测结果为阳性,扩增出900bp的目标带,初步证明几丁质酶基因整合到南瓜基因组中。

摘要： 几丁质酶是昆虫病原真菌金龟子绿僵菌致病力的主要因子之一.本实验用RT-PCR方法,从本实验室分离筛选到的高毒力金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae HN1中,扩增得到几丁质酶基因全长,此基因全长为1275bp,登录号为DQ011865,经Blast分析此基因序列与M.anisopliae E6的chi1基因(AF02749)同源率为96％.以pET-22b(+)为基础载体,构建pET-chi重组表达载体,在大肠杆菌(Escherichia.coli)BL 21中进行表达.经SDS-PAGE分析,获得了42kDa大小的重组目的蛋白,目的蛋白占表达总蛋白含量的63.3％.菌体经冷冻与超声波破碎后,按DNS法可测得几丁质酶的活性.

摘要： 本文对小拟南芥几丁质酶基因的克隆、序列分析及原核表达进行了研究，文章首次成功地从新疆特色野生植物小拟南芥中扩增出几丁质酶基因的cDNA，并成功构建了几一厂质酶基因的原核表达载体质粒PET-CH,通过大肠杆菌对该重组质粒进行了初步表达。该基因在大肠杆菌中的初步表达，为进一步研究该基因的生物功能和应用奠定了理论基础。

摘要： Chitinase is responsible for chitin metabolism in a wide range of organisms. However, currentknowledge on insect chitinase and possible functions in relation to low temperature stress is very limited. Sixchitinase genes from cold treated desert beetle Microc}era puuctipeuuis obtained by RNA-seq technology werecharacterized, and their expression patterns in different tissues and in response to cold were investigated. Multiplesequence alignment was carried out using Clusta1W1.81 and Phylogenetic trees were generated by MEGAS. Theexpression patterns were studied by quantitative real-time PCR. These genes were assigned to three differentchitinase groups. Almost all of them were highly expressed in midgut, some are expressed in fat body or hindgut.-40C had stronger effect than 40C in inducing chitinase expression. Chitinase genes from M. puuctipeuuis exist in abig family. The tissue specific and cold inducible expressions suggest that the chitinases may have diversefunctions and play roles in insect cold adaptation.

摘要： 蛋白质酶抑制剂(Trypsin inhibitor，TI)是一种存在植物中的蛋白质，在植物受到伤害后会诱导表达，影响啮食者消化和吸收作用，是一种植物体自身防御机制。几丁质作为多数真菌细胞壁的主要成分，同时也大量存在于昆虫和动物的甲壳中，几丁质酶催化水解几丁质中β-1，4-乙酰氨基葡糖的作用进行生物降解以达到抗真菌和抗虫的目的。本文以甘蓝型油菜主栽品种ZS758为材料，采用不同浓度激素配比建立了子叶柄高效再生体系，通过添加酚类物质(乙酞丁香酮)、选用不同农杆菌侵染浓度、共培养时间以及抗生素梯度筛选等方法，获得了甘蓝型油菜ZS758遗传转化体系。

摘要： 本文利用基因枪法,以几丁质酶基因转化麝香百合愈伤组织代号(1、2、4、5),在轰击压力1300psi、轰击距离6cm、100μg金粉/枪处理条件下,经抗性培养基筛选,从筛选愈伤组织中分别得3株、1株、0株、5株植株.筛选频率分别为2％、0.6％、0％、3.3％,有可能获得转基因植株.

摘要： 用设计的特异性引物和PCR技术,成功地从粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)Q901基因组DNA中扩增并克隆几丁质酶A基因(chiA)序列(GenBank登录号:AY433954).核苷酸序列测定分析结果表明,chiA扩增片段长为1841bp,含有一个1692bp的开放阅读框(ORF),编码蛋白chiA由563个氨基酸组成.氨基酸序列同源性及结构域分析表明,chiA为糖基水解酶18家族的成员,包括信号肽区(23AA)、PKD(73AA)和催化区(387AA)三个结构域.

摘要： 本文将蝎毒基因BmKITS和几丁质酶基因chitinase2个抗虫基因采用不同的启动子ubi或35S,连到2个高效的植物表达载体pWM101和pBI101中,2个重组表达质粒分别经过限制性酶切分析和PCR鉴定,实验结果表明2个含有双价抗虫基因的植物重组表达质粒均已构建成功.

摘要： 本发明公开一种高效几丁质酶的制备方法及应用，首先涉及一种编码几丁质酶的基因和与之对应的几丁质酶，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其对发酵工业废弃物黑曲霉菌丝体水解具有更高的催化活性。通过构建枯草芽孢杆菌表达系统，使得制备AnChi的成本显著下降，提高了应用范围和生产能力。

摘要： 本发明提供了一种新的具有抗真菌活性更高、具广谱抗性、对植物不产生毒害作用的几丁质酶以及表达该酶的基因。该基因来源于绿色木霉(Trichoderma viride)，利用其分离出42KD的几丁质酶的完整基因及cDNA，并构建大肠杆菌表达载体和植物表达载体，之后又获得了转基因抗真菌病的植株。

摘要： 本发明提供一种昆虫几丁质酶5基因的基因片段及其dsRNA的应用，通过对舞毒蛾几丁质酶5基因的克隆和测序，得到核苷酸序列为SEQ ID NO：1的全长几丁质酶5基因，从中选出序列为SEQ ID NO：2的几丁质酶5基因片段，用于dsRNA的合成。将上述dsRNA注入舞毒蛾的体腔后，舞毒蛾因蜕皮困难死亡。为安全无公害的害虫防治方法的研制提供新的途径。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种几丁质脱乙酰酶基因、几丁质脱乙酰酶及其制备方法和应用。本发明几丁质脱乙酰酶基因cdaba的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其是通过对来源于萎缩芽孢杆菌Bacillus atrophaeus几丁质脱乙酰酶的序列进行综合优化得到。本发明几丁质脱乙酰酶CdaBa的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其不仅丰富了几丁质脱乙酰酶的种类和来源途径，而且酶比活可达352U/mg，在较宽的温度范围和较宽的pH范围内均表现出良好的稳定性，具有良好的应用前景和产业价值。

摘要： 本发明公开一种高效几丁质酶的制备方法及应用，首先涉及一种编码几丁质酶的基因和与之对应的几丁质酶，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其对发酵工业废弃物黑曲霉菌丝体水解具有更高的催化活性。通过构建枯草芽孢杆菌表达系统，使得制备AnChi的成本显著下降，提高了应用范围和生产能力。

摘要： 本发明提供了一种新的具有抗真菌活性更高、具广谱抗性、对植物不产生毒害作用的几丁质酶以及表达该酶的基因。该基因来源于绿色木霉(Trichoderma viride),利用其分离出42KD的几丁质酶的完整基因及cDNA,并构建大肠杆菌表达载体和植物表达载体,之后又获得了转基因抗真菌病的植株。

摘要： 本发明涉及农业生物技术领域，具体是一种基于基因沉默技术的舞毒蛾几丁质脱乙酰基酶基因及其基因片段以及该基因片段的dsRNA与dsRNA在影响害虫发育过程中的应用。本发明根据舞毒蛾几丁质脱乙酰基酶基因LdCda1获得了基因片段LdCda2，以及该基因片段LdCda2的dsRNA，利用dsRNA能够使昆虫因变态过程中受阻而发育迟缓，有望减少农药的大量使用，保护环境，降低生产成本，提高经济收益，具有市场应用前景，为安全无公害的害虫防治方法的研制提供了新途径。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种几丁质酶基因、几丁质酶及其制备方法和应用。本发明几丁质酶基因chiam的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其是通过对来源于地中海拟无枝菌酸菌Amycolatopsis mediterranei几丁质酶的序列进行综合优化得到。本发明几丁质酶ChiAm的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其不仅丰富了几丁质酶的种类和来源途径，而且酶比活为48U/mg，在较宽的温度范围和较宽的pH范围内均表现出良好的稳定性，具有良好的应用前景和产业价值。

摘要： 本发明属于基因工程领域，具体地说是一种利用毕赤酵母工程菌株表达棘孢木霉几丁质酶的方法。发明以棘孢木霉（Trichoderma asperellum）为材料获得了1个几丁质酶基因，命名为tachi1，DNA序列为1679bp，含有3个内含子、1个1275bp的ORF，编码424个氨基酸。构建重组表达载体pPIC9K/tachi1，利用电击法转化Pichia pastoris GS115，工程菌株GS-tachi1-K接种于含BMMY培养基中，在28°C、200 rpm/min振荡培养7.5 d，几丁质酶活达到17.93 U/mL，蛋白表达量为6.19 g/L。SDS-PAGE检测该蛋白的分子量为44 kDa，酶反应最适的温度和pH分别为50 °C和5.5，50 °C以下保持较高的酶活力，在酸性条件下稳定。该酶活性高、稳定性好，有比较重要的经济价值和社会价值。

摘要： 本发明涉及一种嗜几丁质类芽孢杆菌几丁质酶基因及其克隆表达与应用，所述一种嗜几丁质类芽孢杆菌几丁质酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述几丁质酶基因编码上述嗜几丁质类芽孢杆菌几丁质酶，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。所述的编码基因编码的酶可有效降解几丁质‑，其编码的几丁质酶活性高，它能有效的降解几丁质，尤其是能够直接降解虾和/或蟹壳粉末获得几丁寡糖，降低工业生产的成本。