凝胶层析

摘要： 旨在获得特异性蛋白提取效果好的细粒棘球绦虫(Eg)成虫蛋白提取方法,采用7种方法提取Eg成虫蛋白,以ELISA、SDS-PAGE、Western-blot等检测方法比较各蛋白提取方法的提取效果,对7种蛋白提取物进行凝胶层析获得不同蛋白组分,经过ELISA、SDS-PAGE、Western-blot等检测各组分中特异性蛋白的含量,判断各提取方法的提取效果。结果表明,7种方法均能用于提取特异性蛋白;各蛋白提取物的ELISA、SDS-PAGE和Western-blot检测显示,PBS超声破碎蛋白中特异性蛋白含量较其他蛋白提取物高。凝胶层析和ELISA检测结果表明特异性蛋白分子质量较大。比较特异性组分占总蛋白的百分比发现,PBS液氮研磨蛋白、Tris-HCl超声破碎蛋白和PBS超声破碎蛋白中特异性组分较多。本研究通过分析结合物理化学7种方法提取蛋白,为寻找蛋白质组学标准物质提供了参考依据。

摘要： 为获得不同分子质量且分布相对集中的丝素蛋白,采用葡聚糖凝胶层析技术对再生丝素蛋白溶液进行梯度纯化、分离.通过使用合适的葡聚糖凝胶并控制层析流速,有效分离出不同分子质量的丝素蛋白,并进一步对获得的4组不同分子质量的丝素蛋白的黏度、电负性、氨基酸组成和分子构象进行分析.结果表明:丝素蛋白溶液的黏度和等电点随其分子质量的减小而减小,其电负性的提高主要源自于丝素重链被切断,且富含非重复区域的较小分子质量的肽链;4组不同分子质量的丝素蛋白均可自组装形成一定的β-折叠结构,分子质量越高的丝素蛋白越易形成稳定的分子构象.

摘要： 文章主要采用超滤、凝胶层析对脱脂玉米胚芽粕水解物进行分离,评价玉米胚芽粕水解物及分离所获得的组分的抗氧化活性.结果表明,玉米胚芽粕水解液经超滤分级后,筛选得到分子量<6 kDa的组分抗氧化活性较强,进一步采用Sephadex G-15凝胶层析分离,得到G1、G2、G3、G44个抗氧化活性组分,其中G2组分抗氧化活性最强.玉米胚芽粕水解物具有较强的清除超氧阴离子自由基、羟自由基、DPP H·能力、抗油脂氧化能力和还原力.

摘要： 目的:建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)病毒浓缩液(sIPV)纯化层析柱柱效.方法:连续对3个批次Sabin sIPV病毒的纯化工艺的凝胶层析柱和离子层析柱的柱效进行检测并分析其柱效值,检测两种层析获得的病毒纯化液的D抗原、总蛋白含量、比活性及纯度.结果:通过对连续3个批次的sIPV病毒纯化工艺的监测,建立凝胶层析柱的柱效不低于3 605 N/m,离子层析柱的柱效不低于2 222 N/m,凝胶柱效值＞离子柱的柱效值,连续3批检测D抗原和总蛋白含量稳定,比活性为78～ 86 DU/μg,纯度为100％.结论:建立的层析柱柱效获得的病毒纯化液质量稳定.

摘要： 目的:建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)病毒浓缩液(sIPV)纯化层析柱柱效。方法:连续对3个批次SabinsIPV病毒的纯化工艺的凝胶层析柱和离子层析柱的柱效进行检测并分析其柱效值,检测两种层析获得的病毒纯化液的D抗原、总蛋白含量、比活性及纯度。结果:通过对连续3个批次的sIPV病毒纯化工艺的监测,建立凝胶层析柱的柱效不低于3605N/m,离子层析柱的柱效不低于2222N/m,凝胶柱效值>离子柱的柱效值,连续3批检测D抗原和总蛋白含量稳定,比活性为78~86DU/μg,纯度为100%。结论:建立的层析柱柱效获得的病毒纯化液质量稳定。

摘要： 为了筛选具有降解黄曲霉毒素B1(AFB1)作用的菌株,并分离纯化高效AFB1降解酶,以AFB1作为降解AFB1菌株生长的能源和碳源进行初筛,将初筛得到的菌株接种于含有AFB1的培养基中,选择降解率最高的菌株进行固体发酵培养后提取粗酶液,通过硫酸铵分级沉淀和葡聚糖凝胶对降解AFB1的活性物质进行分离,SDS-PAGE蛋白质电泳检测降解酶蛋白质分子质量大小,并通过酶联免疫法测定不同分子质量的酶蛋白对AFB1的降解率,26 S rDNA和同源序列分析对降解率最高的菌株进行菌种鉴定.结果显示,降解AFB1能力最高的菌株为Y8,降解率为77.05％,凝胶层析分离出的31.7 ku的酶蛋白对AFB1的降解率达54.33％;菌种鉴定结果表明,真菌Y8为米曲霉.综上,筛选的米曲霉Y8能够高效降解AFB1,可有效缓解黄曲霉毒素对畜禽的危害,具有提高养殖效益的潜在应用价值.

摘要： 目的：研究大蝎子草地上部分的化学成分。方法：采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶层析及MCI柱层析及结晶、重结晶方法分离纯化大蝎子草地上部分化合物,并运用波谱及化学方法对所分得的化合物进行结构鉴定。结果：从大蝎子草地上部分分离纯化得到5个化合物,经波谱解析鉴定为尿嘧啶、儿茶酚、5-硝基愈创木酚、β-谷甾醇及草酸,除化合物β-谷甾醇外均为首次从大蝎子草地上部分分离得到。结论：大蝎子草地上部分成分有尿嘧啶、儿茶酚、5-硝基愈创木酚、β-谷甾醇及草酸。

摘要： 在微波辅助的条件下,利用碱性蛋白酶和风味蛋白酶分步对紫苏饼粕蛋白进行水解,应用正交试验确定了最佳的酶解条件.通过Sephadex G-15凝胶层析、反相高效液相色谱(reversed phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)法和电子舌技术对酶解液成分与鲜味的变化进行了表征.结果表明,在微波功率400W条件下,第1步碱性蛋白酶最佳酶解条件为酶添加量1 600 U/g、pH 10.0、微波温度60°C、微波时间35min;第2步风味蛋白酶的最佳酶解条件为酶添加量1 600 U/g、pH 6.5、微波温度65°C、微波时间40 min,分步酶解最终水解度为44.86％.最后通过凝胶层析、RP-HPLC与电子舌表征,证明微波辅助分步酶解法快速、高效,且与单独酶解所得产物相比,其产物鲜味改善明显.%Umami peptide was prepared by microwave-assisted sequential enzymatic hydrolysis of perilla seed meal protein with alcalase followed by flavorzyme.Optimization of the hydrolysis conditions was performed using an orthogonal array design.Sephadex G-15 gel permeation chromatography,reversed phase-high performance liquid chromatography (RP-HPLC) and electronic tongue were applied to characterize the changes in peptide composition and umami taste during the hydrolysis process.The results showed that the optimum conditions for alcalase hydrolysis were as follows:microwave power,400 W;enzyme dosage,1 600 U/g;pH,10.0;temperature,60 °C;and hydrolysis time,35 rain,and the optimum conditions for flavorzyme hydrolysis were as follows:enzyme dosage,1 600 U/g;pH,6.5;temperature,65 °C;and hydrolysis time,40 min.A degree of hydrolysis of 44.86％ was obtained under the optimized conditions.Compared with single enzymatic hydrolysis,the microwave-assisted stepwise enzymatic hydrolysis was quicker and more efficient and showed improved taste.

摘要： In order to prepare the Hypophthalmichthys molitrix skin peptides with good antioxidant activity,the Hypophthalmichthys molitrix skin was hydrolyzed by using of the four common commercial enzymes,namely, trypsin,Alcalase 2. 4L, bromelain and papain;ABTS radical scavenging activity and ferrous ion-chelating activity were determined;and the hydrolyzates were separated by ultrafiltration and gel chromatography to obtain better hydrolyzate separation fractions. The results showed that the antioxidant activity of the protein hydrolysate increased, among which the antioxidant activity of the protein hydrolysate after a 2-hour enzymolysis had a stronger antioxidant activity. An ultrafiltration was carried out to the hollow fiber ultrafiltration membranes with the cut-off molecular weight of 10 kDa, 5 kDa and 3 kDa. Among the 4 fractions after the ultrafiltration,the smaller the molecular weight was,the stronger the antioxidant activity was. The fraction with a molecular weight less than 3 kDa was separated into 3 sub-fractions by Sephadex G-15 gel chromatography,among which the larger the molecular weight was, the stronger the antioxidant activity was, whose ABTS radical scavenging ability (79. 65±0. 87)% and Fe2+ chelating capacity (93. 40±0. 20)% were determined at the concentration of 0. 51 mg/mL. This study provided a theoretical reference for the exploitation and utilization of antioxidant peptides from Hypophthalmichthys molitrix skin.%为制备抗氧化活性良好的鲢鱼鱼皮蛋白肽,采用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶等4种常见的商业酶对鲢鱼鱼皮进行酶解,测定酶解物的ABTS自由基清除力和Fe2+螯合力来评价其抗氧化活性,并用超滤及凝胶层析对酶解物进行分离,以期得到活性更好的酶解物分离组分.酶解后产物的抗氧化活性均有所提高,其中碱性蛋白酶酶解2 h产物活性较强.对此酶解物用截留分子量为10 kDa、5 kDa和3 kDa的中空纤维超滤膜进行超滤,得到的4个组分中,分子量越小的组分抗氧化活性越强.分子量小于3 kDa的组分经Sephadex G-15凝胶层析得到3个组分,其中分子量最大的组分活性较好,在0.51 mg/mL质量浓度下测定其ABTS自由基清除率和Fe2+螯合力分别为(79.65±0.87)%和(93.40±0.20)%.该研究成果对鲢鱼鱼皮抗氧化肽的开发具有较好的指导作用.

摘要： 目的：研究鸡胚尿囊腔培养流感病毒的纯化方法。方法：采用中空纤维超滤、病毒裂解和两次sepharose4FF凝胶层析纯化流感病毒。结果：通过中空纤维超滤可去除76.53％～93.66％卵清蛋白，再通过两次sepharose4FF凝胶层析纯化，流感病毒样品总蛋白质／血凝素比值小于4.5，卵清蛋白含量小于500ng/90 μg血凝素，SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹的电泳条带和血凝素特异性条带与英国NIBSC的标准品一致。结论：该工艺纯化的流感病毒纯度符合现行《中国药典》的要求。

摘要： 本文就啤酒废酵母制取多肽的过程进行了研究，采用正交法确定了自溶的最佳条件，用SephadexG-25凝胶层析从啤酒废酵母自溶液中分离出10种多肽，并采用Fe2+-邻二氮菲氧化法测定所得各分离多肽的总抗氧化能力。

摘要： 研究了可催化合成环十五内酯脂肪酶的分离纯化方法.Candida sp.GXU08菌株发酵后经硫酸铵分级沉淀发现酶活主要分布在40％～60％的硫酸铵饱和度,40％～60％的分级沉淀再经Sephacryl-S400凝胶层析分离后得到了两个明显的蛋白质峰,其冻干后酶粉均有催化合成环十五内酯的能力.采用考马斯亮蓝法测定两种酶粉的蛋白质含量,结果表明:小峰段蛋白质含量远小于大峰段,而其脂肪酶对合成环十五的催化能力却比大峰段要高,即小峰段酶粉具有相对较高的催化活性.

摘要： 本文将凝胶层析技术及荧光分光光度法相结合进行饮用水中铝形态的分析.结果表明凝胶层析对胶体态铝和溶解态铝有较好的分离效果;依据衍生试剂8-羟基喹啉(8-HQ)和EBBR与不同铝形态结合强度的差异,通过荧光分光光度法,可分析饮用水中单核铝、无机单核铝,再结合硝酸消解,可将测定饮用水中的总铝、溶胶态铝和胶体态铝.对饮用水中铝形态分析表明:清华地下水和北京给水管网末端水的总铝含量均在50 μg/L以下,无机单核铝为饮用水中铝的主要存在形态.

摘要： 从健康的斑节对虾幼体及其养殖环境中分离得到具有拮抗作用的新菌株SA18,利用经典引物扩增出其gyrb基因鉴定为橙色假交替单胞菌属，以11种弧菌,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等做对比发现SA18对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑菌活性,采用点种法测定抑菌谱，并用液体发酵法制备SA18胞外活性物质，杯碟法测定抑菌活性及发酵上清液的理化性质。结果表明：以2216E液体培养基体积与锥形瓶体积比约为30％ pH7.83-7.98时28°C静置培养36h后开始得到有抑菌活性的发酵液,72h后活性达到最大,杯碟法抑菌活性检测得知，拮抗菌A18所产抑菌物质保存在发酵液中,进一步测定蛋白和去蛋白上清得出，抑菌物质为胞外蛋白.以60％-70％的硫酸铵浓度为最佳提取浓度.有较好的抗紫外照射和抗酸碱的性质，发酵液中的生物活性物质对热敏感,在30°C活性最大，随着温度上升,活性降低,上升到60°C活性丧失;对酸碱不敏感;经过蛋白酶K和胰蛋白酶的处理活性没有降低.用超滤透析葡聚糖凝胶层析等方法分离纯化,其中大分子的分子量在5000 Da以上。初步判定起抑菌作用的物质不是单一的，有可能为大分子的糖蛋白及部分的小分子物质起作用，纯化产物紫外吸收谱分析表明菌株SA18的胞外活性物质含蛋白质。

摘要： 螺旋藻(spirulina)是一种蓝绿藻，非洲、美洲的当地居民食用螺旋藻已有几百年的历史。螺旋藻是高营养、高能量和安全有效的食物资源，上世纪六十年代以来，世界范围内掀起了螺旋藻研究热潮，七十年代，联合国粮农组织将其列入21世纪食品资源开发计划，并认为是“人类未来最理想的食品”。笔者近几年来对钝顶螺旋藻中的多糖类化合物进行了较系统的研究，先后采用有机溶剂分级沉淀、三氯乙酸去游离蛋白、膜分离等化学、物理方法，并通过凝胶层析和离子交换层析等生化技术，从螺旋藻干粉中分离、纯化得到三种多糖化合物SppA-1, SppB-1和SppC-1，经高效液相色谱和毛细管电泳鉴定为均一多糖。测定了这些多糖化合物的平均分子量、多糖含量、单糖组成、UV、IR光谱行为、元素分析及氨基酸组成等理化性质，现对结果进行介绍。

摘要： 为了提高热敏肠毒素纯化的收获率和纯度，本试验就大肠杆菌热敏肠毒素的纯化方法做了进一步的研究。采用多黏菌素B浸出，80％饱和度的(NH4)2SO4盐析后，用SephadexG-100凝胶层析分离纯化，采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测热敏肠毒素的分子量及纯度。电泳图谱和平板免疫溶血试验表明，此法所纯化的热敏肠毒素蛋白含量高，回收率高。

摘要： 目的：利用凝有层析法进一步了解DMSA对肝脏内铜的解毒及增加排泄的作用机理。方法：大鼠ipCuSO10mg/kg/d×7d后24h，igDMSA500mg/kg/d×3d，于2，3，8和24h处死取肝脏和24h尿液，凝胶层析。结果：层析分离出一个大分子的Cu－蛋白复合物，一个低分子的Cu－DMSA复合物。结论：DMSA能减少Cu与蛋白结合量，与Cu形成低分子量易扩散络合物，增加尿铜排泄。

摘要： 乳铁蛋白是一种铁结合性糖蛋白,具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生理功能.因此,乳铁蛋白应用于食品、医药、饲料和化妆品等领域具有非常广阔的前景.乳铁蛋白的分离纯化方法较多,本文采用盐析法和层析法从来源丰富的牛初乳中分离纯化乳铁蛋白,并利用电泳和分光光度法法检测其纯度和含量,所获得的乳铁蛋白的分子质量为90,000u,纯度大约为92％.

摘要： 乳铁蛋白是一种铁结合性糖蛋白,具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生理功能.因此,乳铁蛋白应用于食品、医药、饲料和化妆品等领域具有非常广阔的前景.乳铁蛋白的分离纯化方法较多,本文采用盐析法和层析法从来源丰富的牛初乳中分离纯化乳铁蛋白,并利用电泳和分光光度法法检测其纯度和含量,所获得的乳铁蛋白的分子质量为90,000u,纯度大约为92％.

摘要： 一种利用琼脂糖凝胶亲和层析色谱提取医药级超高纯度乳酸链球菌素的方法，它涉及一种利用制备超高纯度乳酸链球菌素的方法。本发明解决目前生产上利用常规提取方法制备Nisin纯度不高的问题。它包括：选择Nisin生物效价≧8500IU/mL的发酵液，在经过两级大小孔径不同的超滤膜超滤浓缩后，经过活性炭脱色，泡沫分离浓缩，沉淀，离心沉淀分离；然后先用酸与盐的混合溶液平衡色谱柱，再用平衡缓冲液溶解将生物效价≥15000IU/mg的发酵液离心沉淀配制成1.0～50.0g/L的样品走柱液溶液，在经过洗脱液洗脱后，沉淀Nisin，对得到的Nisin沉淀进行2～3次丙酮洗涤，洗涤后进行冷冻干燥和胶体磨打磨。

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种超大孔琼脂糖亲和层析凝胶及其制备方法。通过双乳液法制备超大孔琼脂糖亲和层析凝胶及其系列复合凝胶，制备得到的大孔琼脂糖微球可以应对复杂生物体系样品的分离，避免因样品杂质而堵塞；同时结合刷状功能化聚合物提高琼脂糖空隙内部与样品的接触面积，实现对目标物的高效率富集。该方法基本将大孔琼脂糖高通透性和基质耐受性及小颗粒高柱效和亲和效果结合起来，实现了基质耐受性及样品富集效果的有效结合。

摘要： 本实用新型公开了一种凝胶过滤层析介质制备用抽滤装置，包括抽滤机主体，所述抽滤机主体的左侧活动连接有储料瓶，所述储料瓶的顶部活动安装有层析柱，所述层析柱的外表面固定安装有支撑架，所述层析柱的内部活动安装有辅助组件，所述辅助组件的顶部活动安装有密封塞，所述密封塞的顶部活动安装有漏斗。本实用新型通过设置层析筒用于存放填料，方便使用者更换，减少层析柱使用完毕后需要清理的面积，能更快将层析柱投入使用，提高工作效率，通过设置密封盖，在使用者取出使用完毕后的层析筒时用密封盖将层析筒的底部封住，防止残液流出，通过设置固定块和限位块对放置在层析柱内部的层析筒进行限位，提高连接牢固性和密封性。

摘要： 本发明涉及一种高效纯化大量PCR产物的方法及其应用。具体地，本发明提供了一种纯化双链DNA的方法，其中利用用于大分子的填料通过凝胶层析方法进行纯化，特别地所采用的填料是Sepharose 6 Fast Flow。纯化的双链DNA可以用作基因敲入的修复模版，例如用于将CAR基因定点整合至T细胞以制备CAR‑T细胞。通过本发明的方法，可以大批量纯化PCR产物，纯化的双链DNA纯度高并且可有效去除PCR体系中残余的DNA聚合酶、引物和dNTP，纯化得率高(可达80％)，并且操作简单，成本低，特别是洗脱液可以是PBS缓冲液、水及其他中性溶液，利于纯化双链DNA后续的应用。

摘要： 本发明涉及一种减少蛋白在protein L凝胶层析中形成多聚体的方法，包括：(1)在protein L洗脱体系中加入半胱氨酸(Cys)，利用NaOH溶液中和洗脱体系；(2)蛋白protein L凝胶层析纯化后的样品利用G25葡聚糖凝胶层析处理，用于去除Cys。本发明有效抑制了低pH洗脱引起的多聚体形成，且纯化蛋白没有发生降解。本发明工艺操作简单，效果明显，为实验室研究及工业生产中protein L凝胶层析工艺提供参考，也为进一步研究去除其它类似蛋白在纯化中形成多聚体的方法提供了新思路。

摘要： 本发明公开了一种适用于低温离心的葡聚糖凝胶层析柱的制备方法及应用，称取葡聚糖凝胶Sephadex G‑25 3g，置入50ml柱平衡液，室温下充分溶胀。戴上一次性PE手套取少量玻璃棉glass wool填入小型医用注射针管的底部，压实，填高至医用注射针管的0.5ml刻度处，以替代商品层析柱的多孔板，注入已充分溶胀的葡聚糖至医用注射针管的2.5ml刻度处，注入过程中防止产生气泡，静置5分钟，然后置于4°C500转/分中离心1分钟，备用。与以往的脱盐器具和方法相比，既能达到理想的脱盐效果，又极大缩短了脱盐时间，节约了实验成本，具有较高的应用价值。

摘要： 本发明公开了一种用于蛋白纯化的简易凝胶层析柱，所述凝胶层析柱包括：层析柱柱体、进样管、出样管、上密封塞和下密封塞，所述进样管通过所述上密封塞伸入到所述层析柱柱体内，所述出样管通过下密封塞伸出所述层析柱柱体；所述进样管的下端设有进样缓冲装置，所述进样缓冲装置包括缓冲槽、与所述缓冲槽连接的两根柔性支撑杆；所述层析柱柱体的内侧设有凸台，两个所述支撑杆的末端可支撑在所述凸台上。本实用新型的层析柱在将滤纸从层析柱的上端口放入，由于设置了进样缓冲装置，从而形成了以上样缓冲装置、滤纸为过滤和缓冲的双层保护，使得凝胶的上表面可收到双层缓冲和对液体的过滤，使得蛋白纯化效果更好。

摘要： 本实用新型涉及层析分离技术领域，具体涉及一种凝胶层析柱分离装置，凝胶层析柱分离装置包括洗脱组件和层析组件，洗脱组件包括洗脱瓶、瓶塞和第一玻璃活塞，层析组件包括层析柱、砂芯滤板和第二玻璃活塞；洗脱瓶采用棕色树脂玻璃，方便光敏性药物的测定，瓶塞为磨口瓶塞，可密封，防止洗脱液的挥发，外侧有刻度，可以直观观察洗脱液的用量，洗脱瓶与层析柱由玻璃活塞相连。层析柱外侧标有刻度，方便实验条件中径高比的确定，砂芯滤板可自动截留凝胶，方便洗脱液收集，层析柱下端安装的第二玻璃活塞可控制洗脱液流速；通过上述结构，控制洗脱液流速以及观测径高比，便于洗脱液的添加。

摘要： 本实用新型公开了一种利用注射器改造的凝胶层析柱，涉及凝胶层析柱技术领域，包括注射器层析柱主体的一侧设施有配重支撑座，所述注射器层析柱主体的底部设置有恒流泵导出管，所述注射器层析柱主体与配重支撑座之间设置有夹持机构。本实用新型通过采用密封塞、导流楔形块、挡水带、挡水槽和软质密封条之间的配合，首先使得密封塞靠近导流楔形块的一端放入到注射器层析柱主体的内部，再转动密封塞使得密封塞的一端逐渐与注射器层析柱主体的内壁螺纹连接，同时挡水带逐渐与挡水槽卡接，形成防水线，再通过软质密封条的软质材料的特性，使得软质密封条受到挤压与注射器层析柱主体的内壁抵接紧密，进一步提升连接处的密封性。

摘要： 本实用新型涉及控制设备的技术领域，特别是涉及一种实现凝胶层析柱匀速滴流装置，其使从滴流管处流出的凝胶能够匀速滴流，达到产品制备工艺所能达到的标准，提高装置使用效果；包括两组支腿、两组固定杆、两组凝胶制备管、两组第一密封盖、两组第一转动螺杆、两组第一压板、两组第一连接管、两组过滤装置、两组第二连接管、储料主体、软管、调节开关、流速检测反馈器和滴流管，固定杆与支腿的顶部连接，固定杆的另一端与一组凝胶制备管连接，并且第一密封盖固定在凝胶制备管的顶端，第一密封盖的中心部位设置有螺纹孔，第一转动螺杆与第一密封盖螺装连接，并且第一转动螺杆的底端与位于凝胶制备管内的第一压板连接。