摘要：
目的观察补肾养精颗粒对早发性卵巢功能不全(POI)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制。方法取雌性SD大鼠90只,随机分为空白组15只和模型组75只,模型组采用雷公藤多苷灌胃方法制备POI模型,空白组给予0.9%氯化纳注射液灌胃,每天1次,连续14 d。造模结束后,将模型组分为模型对照组、补佳乐组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组各15只。补佳乐组给予0.1 mg/(kg·d)补佳乐灌胃,中药低、中、高剂量组分别给予补肾养精颗粒1.75、3.5、7.0 g/(kg·d)灌胃,空白组和模型对照组给予0.9%氯化纳注射液2 mL/d灌胃,连续给药15 d。给药结束后24 h,每组分别取6只大鼠给予孕马血清促性腺激素(PMSG)50 IU皮下注射,48 h后处死,取双侧卵巢,流式细胞定量分析法检测卵巢颗粒细胞的凋亡状态。各组剩余9只大鼠取双侧卵巢,透射电子显微镜下观察卵泡的超微化结构;取卵巢组织,采用Westernblotting法检测Hedgehog信号通路关键基因Shh、Ptch1、Gli1及凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与空白组比较,模型对照组颗粒细胞早期凋亡率及晚期凋亡率均升高,正常细胞比例降低;与模型对照组比较,各治疗组颗粒细胞晚期凋亡率降低,正常细胞比例增加;中药高剂量组颗粒细胞早期凋亡率较其他剂量组降低;中药中、高剂量组颗粒细胞晚期凋亡率较中药低剂量、补佳乐组降低,正常细胞比例增加(P<0.05或<0.01)。与空白组比较,模型对照组见卵母细胞形态欠规则,细胞核固缩,颗粒细胞形态欠规则,见凋亡相,细胞器结构异常且数量偏少。与模型对照组比较,各治疗组细胞器形态改善或恢复正常,数量增多,卵母细胞及颗粒细胞形态改善,其中中药中、高剂量组卵母细胞形态基本接近空白组。模型大鼠卵巢组织中Shh、Ptch1、Gli1以及Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白表达水平升高;各治疗组卵巢Shh、Ptch1、Gli1及Bcl-2蛋白表达均升高,Bax蛋白表达均降低;中药中、高剂量组Shh、Gli1蛋白表达水平较中药低剂量组、补佳乐组升高(P<0.05或<0.01)。结论中、高剂量补肾养精颗粒可明显抑制POI大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,其机制可能与激活Hedgehog信号通路后下调促凋亡基因、上调抑凋亡基因表达有关。
