INS-1细胞

摘要： 目的探讨丝胶是否通过影响自噬和氧化应激发挥保护链脲佐菌素(STZ)致胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)损伤的作用。方法INS-1细胞随机分为A、B、C、D、E五组。A组(正常组)细胞常规条件培养24h,不做其他处置;B组(STZ致损伤组)细胞中加入10mmol/L的STZ培养24h;C组、D组、E组细胞中分别加入10mmol/L的STZ和不同剂量的丝胶(150μg/mL、300μg/mL、600μg/mL)培养24h。分别采用免疫蛋白印迹法和实时荧光定量PCR法检测细胞自噬相关基因蛋白和mRNA表达,DCFH-DA活性氧(ROS)荧光探针检测细胞ROS的含量。结果C组、D组、E组LC3B-II/LC3B-I、SIRT1、ATG5、BECLIN1、PINK1蛋白和mRNA的表达均明显高于B组(PD组>C组,差异有统计学意义(P<0.05)。C组、D组、E组INS-1细胞ROS含量明显低于B组(P<0.05);3组细胞ROS含量依次为E组INS-1细胞损伤的作用,其保护机制与丝胶能减轻氧化应激和增强自噬作用有关。

摘要： 目的探讨番石榴叶(PGL)水提物对四氧嘧啶(ALX)诱导的体外INS-1细胞凋亡的保护作用及其可能的机制。方法以大鼠胰岛细胞瘤细胞株INS-1建立体外模型,利用CCK-8法测定药物对INS-1细胞活力的影响;采用化学自发光法测定各组细胞的细胞内ATP含量;采用Hoechst33342法测定凋亡形态学;采用Annexin V-FITC法测定细胞凋亡;采用DCFH-DA法测定细胞内活性氧含量;采用Rhodamin 123法检测细胞线粒体膜电位;采用Western blot法测定Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase 3、GRP78、CHOP、Nrf2、HO-1蛋白的表达量。结果PGL水提物各剂量组的细胞活力、细胞内ATP含量、线粒体膜电位及Bcl-2、Nrf2及HO-1等凋亡及抗氧化应激相关蛋白的表达量和Nrf2的核转位程度均高于ALX20组,差异有统计学意义(P<0.05);PGL水提物各剂量组的细胞核浓染、核固缩及凋亡细胞的比例、细胞内活性氧含量以及Bax、Cleaved-Caspase 3、GRP78及CHOP等凋亡及内质网应激相关蛋白的表达均低于ALX组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PGL水提物能有效逆转ALX诱导的体外INS-1细胞凋亡,其机制与PGL水提物增强细胞抗氧化应激、减轻内质网应激有关。

摘要： 目的:探究槲皮素对糖尿病大鼠胰岛β细胞损伤的作用及机制.方法:将SD大鼠随机分为4组,即对照组、糖尿病组、槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组,每组8只.除对照组外,其他3组大鼠予高脂饲料喂养以及一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,剂量为40 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型.比较各组葡萄糖耐量试验的血糖水平.将INS-1细胞分为正糖组、正糖+槲皮素组、高糖组、高糖+槲皮素组,采用MTT法检测INS-1细胞活性,葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)试验检测高糖刺激下细胞的胰岛素分泌能力.DCFH-DA荧光探针检测各组细胞活性氧(ROS)水平,实时荧光定量PCR(qPCR)法检测增殖调节因子PDX-1和促凋亡蛋白BAX的表达.结果:与糖尿病组比较,槲皮素低剂量组、高剂量组大鼠血糖水平明显降低(P＜0.01).高糖刺激下INS-1细胞活性显著降低,加入槲皮素12h后细胞活性显著升高(P＜0.05).高糖组INS-1细胞上清液中的胰岛素浓度显著低于正糖组(P＜0.001),与正糖组比较,正糖+槲皮素组胰岛素浓度升高(P＜0.05);与高糖组比较,高糖+槲皮素组胰岛素浓度显著升高(P＜0.05).与正糖组比较,高糖组细胞ROS的荧光强度及BAX mRNA相对表达量均显著升高(P＜0.001),PDX-1 mRNA相对表达量显著降低(P＜0.001);高糖+槲皮素组细胞ROS荧光强度及BAX mRNA相对表达量较高糖组明显降低(P＜0.05),PDX-lmRNA相对表达量显著升高(P＜0.05).结论:槲皮素可改善糖尿病大鼠的糖代谢,抑制胰岛p细胞氧化应激,减少胰岛β细胞凋亡,并促进胰岛β细胞的胰岛素分泌.

摘要： 目的 考察配伍黄柏对知母中芒果苷(mangiferin,MGF)在INS-1细胞药代动力学特征的影响,及芒果苷在正常和氧化损伤状态的INS-1细胞内的分布变化.方法 以芒果苷单体、知母和知母-黄柏药对形式等剂量给药INS-1细胞,运用LC-MS/MS测定INS-1细胞中MGF的含量;设置正常组和模型组(140μmol·L-1 H2O2处理INS-1细胞1 h),给药100μmol·L-1 MGF,分离线粒体、细胞核及胞质并检测其中的MGF.结果 与单体给药相比,知母和药对给药后MGF在细胞内的浓度升高,药对组AUC(0-t)明显高于单体组和知母组(P<0.01);INS-1细胞单次给药MGF 100μmol·L-1后,正常组MGF主要分布于细胞核,模型组MGF主要分布于胞质;与正常组相比,MGF在模型组的线粒体和胞质中Cmax和AUC(0-t)升高(P<0.01),细胞核中Cmax和AUC(0-t)明显降低(P<0.05).结论 配伍黄柏对知母有效成分芒果苷进入INS-1细胞具有促进作用;氧化损伤处理会改变MGF在INS-1细胞内的分布.

摘要： 目的 建立LC-MS/MS法测定芒果苷(mangiferin,MGF)在INS-1细胞的含量,考察不同剂量芒果苷在INS-1细胞药代动力学特征,及同剂量下正常和模型组的药动学参数.方法 以芦丁为内标,细胞样品采用乙腈:乙酸(40:1)液液萃取.色谱柱为C18柱(150×2.1 mm,3.5μm),1％冰乙酸-甲醇为流动相,在电喷雾离子化和正离子多反应模式下运用QTRAP 6500+型液质联用仪测定.INS-1细胞给药剂量为50、100、500μmol·L-1 MGF;用140μmol·L-1 H2 O2损伤INS-1细胞1 h后给药100μmol·L-1 MGF;进行MGF药动学研究.结果 在2～500μg·L-1范围内,MGF线性关系良好.日内、日间RSD均≤14.49％,准确度在93.97％ ～103.54％.细胞给药MGF低中高剂量后,AUC(0-t)和Cmax随给药剂量增加而增加;正常和造模组INS-1细胞Cmax分别为454.83±45.46和334.00±35.00μg·L-1,AUC(0-t)分别为13289.23±1080.58和9349.89±1101.36μg·h·L-1.结论 该方法简单、特异、灵敏、可靠,适用于测定INS-1细胞中MGF.在50～500μmol·L-1剂量内,MGF在INS-1细胞内未表现出线性药动学特征;模型组INS-1细胞Cmax和AUC(0-t)明显低于正常组.

摘要： 目的:探讨在妊娠期糖尿病(GDM)患者中miR-138-5p对胰岛β细胞功能的影响及其相关作用机制。方法:通过RT-qPCR对比15例GDM患者与15例的正常健康孕妇外周血中miR-138-5p的表达差异;miR-138-5p mimic及inhibitor分别转染入β细胞系INS-1细胞中,过表达或抑制其在该细胞中的表达水平,并通过RT-qPCR验证转染效率;利用MTT增殖实验、Annexin V-FITC凋亡实验及胰岛素释放实验分别检测miR-138-5p对INS-1细胞的增殖、凋亡和胰岛素释放能力的影响;通过miRNA靶基因预测软件Target Scan筛选miR-138-5p的目标靶基因,并利用双荧光素酶基因报告及Western blot实验进行验证;功能挽救实验证实miR-138-5p是否通过靶向调控其目标基因而发挥对INS-1细胞的增殖、凋亡及胰岛素释放能力影响;Western blot实验检测miR-138-5p在INS-1细胞中作用的分子信号通路。结果:与正常健康孕妇相比,GDM患者外周血中miR-138-5p的表达显著低表达;在INS-1细胞中转染miR-138-5p mimic及inhibitor后可显著促进或抑制miR-138-5p的表达;过表达miR-138-5p可明显促进INS-1细胞的增殖,抑制其发生凋亡并促进细胞对胰岛素的释放能力;而下调miR-138-5p的表达,可显著抑制INS-1细胞的增殖,促进其发生凋亡及抑制细胞的胰岛素释放能力;通过miRNA靶基因预测软件Target Scan筛选缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)为miR-138-5p的目标靶基因,双荧光素酶基因报告实验及Western blot实验提示miR-138-5p可抑制INS-1细胞中HIF-1α的表达;功能挽救实验证实miR-138-5p通过调控HIF-1α的表达,影响INS-1细胞的增殖、凋亡及胰岛素释放能力;Western blot实验明确miR-138-5p可能通过靶向调控HIF-1α的表达,影响PI3K/AKT信号通路中PI3K、AKT及其磷酸化后的p-PI3K、p-AKT蛋白而发挥对INS-1细胞的作用。结论:在GDM患者中,miR-138-5p可能通过靶向调控HIF-1α的表达,进而影响PI3K/AKT信号通路,促进β细胞的增殖、抑制其凋亡,并促进其胰岛素释放能力从而保护β细胞的功能。

摘要： 目的:通过研究降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞PI3K/AKT/FOXO1通路中相关蛋白与基因表达的影响,探讨降糖消渴颗粒含药血清保护胰岛B细胞的分子机制.方法:选取FOXO1高表达INS-1稳定细胞株,分别以1％ 、5％ 、10％ 、15％ 、20％ 不同浓度降糖消渴颗粒含药血清干预,用MTT法计算细胞成活率以观察药物毒性,分别检测各组细胞中总FOXO1蛋白水平以确定最佳药物浓度开展后续实验.细胞用或不用PI3K抑制剂LY294002干预后,以Western blotting检测细胞中总FOXO1、p-FOXO1、Akt、p-Akt和细胞核内外的FOXO1、p-FOXO1的蛋白表达,qRT-PCR检测FOXO1mRNA和AktmRNA含量.结果:不同浓度含药血清对细胞均无毒性,其中10％ 为最佳药物干预浓度.10％ 含药血清使磷酸化FOXO1和Akt的表达升高;在胞质和胞核中,10％ 含药血清使FOXO1的表达降低,磷酸化表达升高,抑制剂LY294002使FOXO1和p-FOXO1表达均降低.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,Akt mRNA表达升高,FOXO1mRNA表达降低,抑制剂使FOXO1mRNA表达降低,结果与Western blotting结果一致.结论:降糖消渴颗粒含药血清可通过PI3K/AKT/FOXO1通路促进FOXO1磷酸化出核以抑制FOXO核转录实现保护胰岛B细胞的作用.

摘要： 目的:探讨过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPAR)γ激动剂罗格列酮对钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(CASK)的影响,探索CASK是否参与罗格列酮对胰岛素分泌的调控作用.方法:用不同浓度罗格列酮处理胰岛β细胞系INS-1细胞检测氯化钾刺激胰岛素分泌(KSIS);用不同浓度及时间罗格列酮处理INS-1细胞,检测CASK的mRNA、蛋白及定位变化;观察干扰CASK后罗格列酮对KSIS的影响情况.结果:罗格列酮处理后INS-1细胞的KSIS功能明显增强(P0.05).结论:PPARγ激动剂罗格列酮上调INS-1细胞CASK基因的表达,但CASK并不参与罗格列酮对胰岛分泌的调控作用.

摘要： 目的 探讨艾塞那肽对高糖诱导INS-1细胞的内质网应激(ERS)及对JNK信号通路的影响.方法 小鼠INS-1细胞按不同的处理方式分为4组:对照组(A组,完全培养基)、高糖组(B组,30mmol/L糖培养基)、高糖+100nmol/L艾塞那肽组(C组)、高糖+100nmol/L艾塞那肽+JNK激动剂组(D组).每天换液前观察各组细胞生存状态,培养7天后,MTT法检测细胞活性;提取细胞总蛋白,Western blot法检测Bip、CHOP、P-SAPK/JNK、caspase-3蛋白的表达水平.结果 培养至第4天B组细胞出现死亡,培养至第6、7天B组及D组细胞出现大量死亡;与A组比较,B组和D组的活性(A值)下降(P<0.05);与A组比较,B组高糖刺激后导致内质网应激上调Bip、CHOP、P-SAPK/JNK、caspase-3的表达量(P<0.05);与B组比较,C组艾塞那肽可通过抑制内质网应激下调Bip、CHOP、P-SAPK/JNK、caspase-3表达量(P<0.05);与C组比较,D组JNK激动剂促进JNK信号通路上调P-SAPK/JNK、caspase-3表达量(P<0.05).结论 艾塞那肽可以缓解或阻断高糖刺激诱发的INS-1细胞内质网应激(ERS),抑制JNK信号通路,减少细胞凋亡.

摘要： 探究蓝刺头多糖ETPB对H2O2造成INS-1细胞氧化损伤的作用,为后续研究奠定基础.本实验通过体外培养1NS-1细胞,采用MTT法检测细胞存活率筛选出50μm/L作用24h可建立氧化损伤模型、ETPB的最大安全浓度为250μg/ml;ETPB作用48h后加入H202作用24h,结果显示ETPB干预组能显著提高细胞存活率.SOD活性、MDA含量,检测结果显示EPTB干预组显著提高SOD活性,显著降低MDA含量.结果显示ETPB对INS-1由H2O2引起的氧化损伤有保护作用.

摘要： 探究蓝刺头多糖ETPB对H2O2造成INS-1细胞氧化损伤的作用,为后续研究奠定基础.本实验通过体外培养1NS-1细胞,采用MTT法检测细胞存活率筛选出50μm/L作用24h可建立氧化损伤模型、ETPB的最大安全浓度为250μg/ml;ETPB作用48h后加入H202作用24h,结果显示ETPB干预组能显著提高细胞存活率.SOD活性、MDA含量,检测结果显示EPTB干预组显著提高SOD活性,显著降低MDA含量.结果显示ETPB对INS-1由H2O2引起的氧化损伤有保护作用.

摘要： 探究蓝刺头多糖ETPB对H2O2造成INS-1细胞氧化损伤的作用,为后续研究奠定基础.本实验通过体外培养1NS-1细胞,采用MTT法检测细胞存活率筛选出50μm/L作用24h可建立氧化损伤模型、ETPB的最大安全浓度为250μg/ml;ETPB作用48h后加入H202作用24h,结果显示ETPB干预组能显著提高细胞存活率.SOD活性、MDA含量,检测结果显示EPTB干预组显著提高SOD活性,显著降低MDA含量.结果显示ETPB对INS-1由H2O2引起的氧化损伤有保护作用.

摘要： 探究蓝刺头多糖ETPB对H2O2造成INS-1细胞氧化损伤的作用,为后续研究奠定基础.本实验通过体外培养1NS-1细胞,采用MTT法检测细胞存活率筛选出50μm/L作用24h可建立氧化损伤模型、ETPB的最大安全浓度为250μg/ml;ETPB作用48h后加入H202作用24h,结果显示ETPB干预组能显著提高细胞存活率.SOD活性、MDA含量,检测结果显示EPTB干预组显著提高SOD活性,显著降低MDA含量.结果显示ETPB对INS-1由H2O2引起的氧化损伤有保护作用.

摘要： 探究蓝刺头多糖ETPB对H2O2造成INS-1细胞氧化损伤的作用,为后续研究奠定基础.本实验通过体外培养1NS-1细胞,采用MTT法检测细胞存活率筛选出50μm/L作用24h可建立氧化损伤模型、ETPB的最大安全浓度为250μg/ml;ETPB作用48h后加入H202作用24h,结果显示ETPB干预组能显著提高细胞存活率.SOD活性、MDA含量,检测结果显示EPTB干预组显著提高SOD活性,显著降低MDA含量.结果显示ETPB对INS-1由H2O2引起的氧化损伤有保护作用.

摘要： 本发明涉及反义寡核苷酸，具体而言，其通过靶定胰岛素基因(INS)的天然反义多核苷酸，来调节胰岛素基因(INS)的表达和/或功能。本发明还涉及这些反义寡核苷酸的鉴定及其在治疗与胰岛素基因(INS)表达有关的疾病和病症中的用途。

摘要： 本发明公开了一种INS/DVL组合导航系统鲁棒智能协同校准方法，步骤一：建立包括状态方程和量测方程在内的传统INS/DVL系统模型；步骤二：采用基于声测距的交替校正算法对海洋无人运动平台进行校正；步骤三：利用基于统计相似度度量的鲁棒卡尔曼滤波器滤除输出异常值。本发明涉及的基于水声测距的交替校正算法不需要参考站点或者母船的支持，不仅扩大了海洋无人运动平台的工作范围，而且进一步提高了其定位精度；本发明鲁棒滤波器计算量小于现有的鲁棒滤波器，在高采样频率的导航应用中更具优势，而且对于异常值造成的非高斯场景其鲁棒性强于现有的鲁棒滤波器，本发明定位精度优于传统的INS/DVL组合导航系统。

摘要： 本发明公开了B7‑H4+单核细胞型MDSC在制备INS激素治疗疗效预测试剂中的应用。外周血中B7‑H4+单核细胞型MDSC作为检测靶点在制备预测激素治疗特发性肾病综合征疗效的试剂中的应用。检测外周血中B7‑H4+单核细胞型MDSC的试剂在制备预测激素治疗特发性肾病综合征疗效的试剂中的应用。B7‑H4+单核细胞型MDSC作为激素敏感型特发性肾病综合征分型标志物的应用。INS患者治疗早期出现B7‑H4+单核细胞型MDSC的升高与激素治疗敏感有关，早期观测INS患者激素治疗后B7‑H4+单核细胞型MDSC的变化可以有效预测激素疗效。

摘要： 本发明公开了一种P糖蛋白作为保护因子在影响INS‑1 832/13细胞胰岛素分泌中的应用。研究阐明了P糖蛋白对大鼠胰岛素瘤细胞INS‑1 832/13细胞胰岛素分泌方面的作用机制。体外试验发现，P糖蛋白可通过提高细胞内cAMP含量，进一步激活PKA信号转导通路，增加PKA、CREB活性。同时，本实验验证了P糖蛋白与脂筏相关蛋白，小窝蛋白(Caveolinl)、L型钙离子通道蛋白1.2(Cav1.2)、钾离子通道蛋白(Kir6.2)、腺苷酸环化酶的存在相互作用，从而影响胰岛素的分泌。本发明为研究胰岛保护因子，提高胰岛移植临床转归提供理论基础。

摘要： 本发明公开了一种用于INS‑1大鼠胰岛细胞培养的试剂盒，所述试剂盒配方的组成为：氨基酸类2.5×10

摘要： 本发明公开了汽车内饰INS膜片结构，包括有第一层PMMA亚克力层、第二层油墨印刷花纹层，第三层ABS基材层，所述的第三层ABS基材层再分为上下层，上层是半透明或透明层，下层是不透光层，上下层基材之间通过复合或共挤形成。透光图案层最后是将裁切后成型膜片通过激光精雕在成型膜片的ABS不透光层获得，不受INS工艺前几个步骤的影响，因此，彻底解决了因INS工艺中拉伸而产生的形变位移以及漏光问题，能大幅提高产品的生产效率和生产质量。

摘要： 本发明涉及反义寡核苷酸，具体而言，其通过靶定胰岛素基因(INS)的天然反义多核苷酸，来调节胰岛素基因(INS)的表达和/或功能。本发明还涉及这些反义寡核苷酸的鉴定及其在治疗与胰岛素基因(INS)表达有关的疾病和病症中的用途。

摘要： 本发明公开一种ELM辅助的GNSS/INS组合导航无人靶车定位方法，实现步骤为：生成训练集；构建ELM神经网络；在卫星信号有效情况下训练ELM神经网络；预测卫星信号失锁情况下的误差补偿值；利用误差补偿后的导航信息进行定位。本发明利用构建的ELM神经网络在卫星信号短暂失锁情况下通过对样本集中加速度和角速度值进行训练，利用该训练好的网络预测卫星信息和惯性导航信息的导航信息误差值，以修正惯性导航系统输出的导航信息，辅助GNSS/INS组合导航系统进行室外无人靶车实时导航定位。本发明与现有技术相比，减小了室外无人靶车定位误差并提高了定位实时性。

摘要： 本发明公开了一种车载GNSS/INS/里程计组合导航方法，属于组合导航领域。本发明首先建立包含杆臂效应的GNSS/INS/里程计组合导航系统的卡尔曼滤波模型；然后利用GNSS和里程计的输出、车辆的非完整性约束为外部观测进行卡尔曼滤波预测以及更新，估计出杆臂效应误差的状态向量。该方法增强了组合导航系统GNSS观测条件不利时的精度和自主能力，无需事先确定INS与里程计之间的杆臂，从而避免了在导航前对杆臂的量测过程，同时能够有效补偿导航过程中由于载体震动而导致的杆臂误差实时变化的问题，对不同车辆具有普适性。

摘要： 本发明公开了一种INS辅助GNSS PPP精密动态导航定位方法，包括构建GNSS PPP/INS紧组合观测方程、状态方程，并将方程线性化；构建INS虚拟观测方程，通过推导的INS随机误差传递过程，建立INS虚拟观测方程的随机模型；构建GNSS PPP宽巷、超宽巷组合观测值，并进行外部约束的电离层改正、差分码偏差改正和小数偏差改正；通过多次中间过程，首先利用LAMBDA方法计算基准星宽巷、超宽巷模糊度固定解，其次计算各频点窄巷的模糊度固定解；估计其他卫星的模糊度固定解，获得精密动态导航定位结果。本发明从构建合适的GNSS PPP/INS紧组合滤波模型以及组合模糊度固定解出发，构建了INS虚拟观测值，针对GNSS PPP/INS组合系统的混合整数最小二乘估计，提出改进函数模型与随机模型，实现精密动态导航定位。