内胚层窦瘤

摘要： Objective To construct recombinant lentiviral vector of miRNA let-7a,establish a stable testicular tumor cell line (TYST-1) overexpressing let-7a and examine its effect on the cellular proliferation of testicular yolk sac tumor (TYST).Methods The primers of human miRNAlet-7a gene were designed for amplifying let-7agene fragments by polymerase chain reaction (PCR) according to miRBase database Let-7a sequence was amplified,purified and ligated with lentiviral vector plasmid (GV309).The DH5α competent cells were transformed and positive clones identified by PCR and sequencing.The recombinant lentivirus was packaged in 293T cells.Viral titer was determined by fluorescence method.Then the vector was transfected into TYST.After puromycin selection and culture expansion,stable cell clones of overexpressing let-7a (TYST-1) were established.The expression of let-7a was detected by quantitative realtime polymerase chain reaction (qRT-PCR).And cell counting Kit-8 (CCK-8) method was employed for examining the proliferation of TYST cell after transfection.Results The successful construction of 1et-7a lentiviral vector was confirmed by plasmid enzyme digestion and DNA sequencing.The intracellular expressions of miRNA let-7a increased by 3.0 and 3.8 folds after transfecting with miR-let-7a than those in negative control and blank control groups respectively (P＜0.05).CCK-8 assay showed that cell proliferation of TYST in miR-let-7a group was significantly lower than those in negative control and blank control groups (P ＜ 0.05).Conclusions Let-7a recombinant lentiviral vector has been successfully constructed.A stable testicular tumor cell line is established after vector transfection.And let-7a suppresses the TYST cell proliferation.%目的 构建microRNAlet-7a重组慢病毒表达载体,建立稳定表达let-7a的睾丸卵黄囊瘤细胞株(TYST-1),并探索let-7a过表达后对睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞增殖的影响.方法 根据miRBase数据库let-7a的序列,设计合适的引物序列,利用聚合酶链反应(PCR)钓取目的基因片段,经过扩增、酶切后,与慢病毒载体GV309连接.转化DH5α感受态细胞,阳性克隆进行PCR及测序鉴定.293T细胞中包装慢病毒,利用荧光法测定病毒滴度.将构建好的let-7a慢病毒载体感染睾丸卵黄囊瘤(TYST)细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株,建立稳定表达let-7a的TYST-1.用Quantitative real-time PCR (qRT-PCR)检测let-7a表达水平,用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测let-7a过表达后对TYST细胞增殖的影响.结果 构建的let-7a慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;let-7a慢病毒感染组细胞内let-7a水平比阴性病毒对照组和空白对照组分别提高3.O倍和3.8倍(P＜0.05).CCK-8法细胞增殖试验结果显示,较空白组和阴性病毒组,let-7a慢病毒感染组细胞的增殖能力明显受到抑制(P＜0.05).结论 成功构建let-7a慢病毒载体并感染TYST细胞,获得稳定过表达let-7a的TYST-1;并证实let-7a过表达后抑制了TYST细胞的增殖.

摘要： Ovarian yolk sac tumour (OYST),also called ovarian endodermal sinus tumour (OEST) are rare and highly malignant tumours of utmost importance occurring in children and young adults.AFP and glypican-3 are characteristic immunohistochemical markers.Cisplatin-based chemotherapy has dramatically improved the prognosis of OYST.Fertilitysparing surgery seems a reasonable approach in initial treatment even for patients with advanced stage.Three courses of BEP (bleomycin,etoposide,cisplatin) is the current standard therapy and four courses is recommended in case of bulky residual disease after surgery.There is a rare situation of ovarian yolk sac tumour complicating pregnancy in which adjuvant chemotherapy must be given after laparotomy.It can increase the risk of fetal malformation and pregnant death during gestation period.It may have an influence on prognosis in the case that tumor tissue types,selection of chemotherapy regimens,staging,not satisfied with the residual,preoperative and postoperative level of serum AFP.On the other hand,the choice of operation method has little impact on the prognosis of patients.Minimal invasive technique,assisted reproductive technology and protection of ovarian function during chemotherapy can make benefit in patients with malignant ovarian germ cell tumours.%卵巢卵黄囊瘤(OYST)又称卵巢内胚窦瘤(OEST),属卵巢生殖细胞恶性肿瘤(MOGCT),发生率低,多见于儿童及青年女性,恶性程度高,生长迅速,易早期转移,预后差.甲胎蛋白(AFP)及磷脂酰肌醇3(glypican-3)是OYST重要的免疫组织化学标志物,铂类为基础的化疗药物显著提高了患者预后生存.因OYST对化疗药物敏感,保留生育功能是其手术原则,即使是对于分期较高的患者也可保留生育功能.手术+术后3～4周期辅助化疗(博来霉素、依托泊苷、铂类)系OYST的标准治疗方法.妊娠期合并OYST者少见,术后可以继续妊娠,孕期需要辅助化疗,但会增加胎儿畸形概率及孕妇死亡风险.肿瘤的组织类型、化疗方案种类的选择、肿瘤的分期、非满意的肿瘤细胞减灭术、术前血清AFP值及术后AFP下降值可对预后有影响,但手术方式的选择对患者预后影响不大.微创技术、辅助生殖技术及化疗期间卵巢功能的保护可使MOGCT患者获得益处.

摘要： 目的 探讨妊娠晚期并巨大卵巢卵黄囊瘤的发病特点及治疗原则.方法 对1例妊娠晚期并巨大卵巢卵黄囊瘤的临床资料进行回顾性分析.结果 本例因停经35+3周,右上腹痛2 d入院.行腹部超声检查示妊娠并卵巢肿瘤,急诊行剖宫产及腹腔探查术,术中诊断为妊娠并卵巢卵黄囊瘤,行患侧附件及瘤体切除术,术后患者及家属拒绝进一步治疗出院.3个月后电话随访,患者在某医院行规范化疗,一般状况良好.结论 卵巢卵黄囊瘤恶性程度高,预后差,及早手术并尽量保留生育功能为治疗首选方法.

摘要： 本发明提供了一种人内胚层诱导分化培养基，所述培养基由以下培养基A和培养基B组成：培养基A由以下组分组成：DMEM/F12培养基、维生素C和ChIR99021；培养基B由以下组分组成：DMEM/F12培养基、维生素C和LDN‑193189。同时还提供了一种体外诱导干细胞向内胚层细胞分化的方法，使用本发明的诱导分化获得的内胚层可在体外分化为肝细胞，胰腺前体细胞和肺前体细胞，在体内畸胎瘤实验中亦发现可向肺，胃肠道上皮细胞分化，表明此方法分化而来的内胚层具有分为肝，肺和胰腺的潜力。

摘要： 本发明涉及制备能够分化成中胚层或内胚层细胞系的多能游走细胞(MMC)。所述多能游走细胞(MMC)是稳定和健康的，能够传代至少20次(可能无限地)，并可以经冷冻后复苏、再扩增和分化为多种细胞系。因此，它们是储存稳定的。产生这些细胞的方法针对从胚泡(blastocycts)产生多能细胞类型(MMC)，从而不用经过典型的人胚胎干细胞(hESC)状态即可产生治疗上有用的细胞类型。还描述了多能游走细胞、中内胚层细胞以及中胚层细胞(IsIl+)。

摘要： 我们公开了从多能干细胞中产生中胚层或者内胚层细胞的方法，该方法包括在多能干细胞中激活Wnt信号通路。在一些实施方案中，在Wnt信号通路被激活的至少部分时间内，多能干细胞处于大体上二维构型的形式，例如单细胞层。

摘要： 本发明涉及从源自多能干细胞、诱导多能干细胞和胚胎干细胞的细胞群中富集胰腺祖细胞的方法。本文公开了用于富集胰腺祖细胞的标志物CD51和CD177，以及用于富集或耗竭肝脏祖细胞的标志物CD275。

摘要： 本发明提供一种用于制备内胚层细胞系的培养体系以及利用该培养体系制备内胚层细胞系的方法，所述培养体系包括包含TGF‑β受体抑制剂、RA受体激活剂和cAMP激活剂的组合物，其中，所述组合物不包含外源转录因子。使用本发明的培养体系和培养方法能够诱导改变细胞命运的重编程，使体细胞重编程为内胚层细胞系。

摘要： 本发明涉及控制人多潜能干细胞包括人胚泡来源的干(hBS)细胞分化和获得特定内胚层细胞的方法。特别地，本发明涉及将特定浓度的FGF2用作关键因子以控制来源于hPS细胞的定形内胚层细胞分化成特定内胚层细胞。本发明还提供获得内胚层细胞的方法，所述方法包括FGFR的使用和MAPK信号转导途径的激活。

摘要： 本发明涉及允许从多能干细胞例如人胚胎干细胞和定形内胚层细胞的有效分化，以形成胰内胚层细胞的方法。本发明直接应用于制备终代胰岛β细胞，所述胰岛β细胞可作为治愈糖尿病的部分治疗使用。此外，本发明可用于从人胚胎干细胞和定形内胚层细胞制备肝内胚层细胞。本发明涉及使用没有饲养细胞的确定成分培养基，从干细胞，优选人胚胎干细胞，制备定形内胚层和胰内胚层细胞的方法。从胚胎干细胞提供胰内胚层细胞的简单的两个步骤代表了本发明的其他实施方案。

摘要： 本发明的课题在于提供用于得到最合适的体细胞作为细胞治疗制剂的内胚层细胞团。本发明的内胚层细胞团是细胞团中的未分化细胞的含有率降低、且包含能分化为最合适的体细胞作为细胞治疗制剂的内胚层细胞的细胞团。进而，本发明的源自内胚层细胞团的体细胞作为细胞治疗制剂具有优异的治疗效果。

摘要： 本文提供了用于通过使多能干细胞与视黄酸信号传导途径激动剂和骨形态发生(BMP)途径抑制剂接触而不将干细胞暴露于转化生长因子β(TGFβ)途径激动剂中来产生背侧前肠内胚层(DFE)细胞的组合物、系统、试剂盒和方法。在某些实施方案中，使DFE细胞与视黄酸信号传导途径激动剂和FGFR途径抑制剂接触以产生胰腺内胚层(PE)细胞(例如，具有背侧特征(dorsal identity))。在其它实施方案中，使PE细胞与ALK5抑制剂和Notch抑制剂接触以产生内分泌细胞(例如，表达胰岛素的内分泌细胞)。在某些实施方案中，提供了用于产生前部结构域内胚层(ADE)细胞的组合物、系统、试剂盒和方法。

摘要： 本发明属于细胞分化技术领域，尤其涉及一种外周血干细胞分化成内胚层细胞的方法及其应用。本发明中通过将外周血干细胞置于BM、Activin A、Wnt3a、TGF‑b、LIF、TNF‑a、IFN‑a、vinterferron‑α,β,γ、B‑27、N2存在条件下诱导培养，得到内胚层细胞。该技术是对内胚层细胞分化成胰岛细胞的技术补充，加大了干细胞分化成胰岛细胞并用于胰岛移植的临床应用范围。该技术有望解决胰岛细胞来源问题和胰岛移植的异源问题，提高胰岛移植的临床效果和移植物的长期存活。