内切葡聚糖酶

摘要： 【目的】在枯草芽孢杆菌中表达绿色木霉(Trichodoma vivide,T.viride)内切葡聚糖酶基因EgⅦ。研究内切葡聚糖酶基因EgⅦ的生物信息、基因克隆与表达及重组酶学性质。【方法】提取纤维素酶生产菌株绿色木霉AS3.3711的总RNA,通过反转录合成cDNA,并以之为模板利用PCR技术扩增获得内切葡聚糖酶基因EgⅦ,并进行生物信息学分析;构建了重组表达载体pMA5-EgⅦ,并利用热激转化法将其转入枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,B.subtilis)WB600感受态细胞中,成功进行表达。【结果】生物信息学分析表明,内切葡聚糖酶基因EgⅦ编码249个氨基酸,蛋白质的分子量为26.8002 KD,理论等电点7.62,属于胞外蛋白;预测蛋白质三级结构与二级结构一致,由ɑ-螺旋、延伸链区、β-转角和无规则卷曲构成。电泳结果表示,重组枯草芽孢杆菌在EgⅦ基因片段大小符合处出现条带,表明成功将EgⅦ-pMA5转化到B.subtilis WB600中。刚果红染色结果显示重组枯草芽孢杆菌在CMC培养基上出现较大直径的透明圈,重组菌株上清粗酶液DNS酶活力达到22.71 U/mL,表明绿色木霉内切葡聚糖酶基因EgⅦ可以在枯草芽孢杆菌中表达,并具有较高活性。重组酶酶学性质分析表明,该酶的最适温度是60°C,最适pH值为6.4,且温度在50°C以下,pH值在5.6~8.0范围内,酶活力具有良好的稳定性。【结论】通过对内切葡聚糖酶基因EgⅦ克隆及分析,获得了表达内切葡聚糖酶基因EgⅦ的枯草芽孢杆菌基因工程菌,了解了重组酶酶学性质,为纤维素酶的广泛应用提供了理论基础。

摘要： 为探索利用黑曲霉固态发酵凉茶渣进行资源化利用的可行性,以内切葡聚糖酶、木聚糖酶和果胶酶的活力为指标,对氮源、碳源、含水量、发酵时间、浸泡液pH值和温度共6个单因素进行考察;根据单因素试验结果,添加4％硫酸铵作为氮源,2％葡萄糖为碳源,通过正交试验,以3种酶活力的总和为指标,优化制备工艺,发现含水量为70％,浸泡液pH值为9.00,温度为31°C,发酵168 h,是3种酶的最佳生产工艺.最佳工艺条件下发酵产物的内切葡聚糖酶活力为(5.72±0.23)U/g,木聚糖酶活力为(42.43±2.50)U/g,果胶酶活力为(29.81±0.69)U/g,3种酶活力总和为(77.96±1.08)U/g.

摘要： 由柑橘黄单胞菌芒果致病变种(Xanthomonas citri pv.mangiferaeindicae,Xcm)引起的芒果细菌性角斑病是芒果上的一种重要的细菌性病害.利用同源基因克隆技术克隆了Xcm上内切葡聚糖酶(endoglucanase)基因CEL的全长,经测序后运用多种生物信息学软件对其序列进行分析.结果表明:CEL基因的完整阅读框包含1134 bp,编码377个氨基酸;预测分子量为40.72 kDa;等电点为9.01;不稳定指数39.93,为稳定蛋白;亲水性为–0.081,有信号肽;总磷酸化位点有51个,无跨膜螺旋;在二级结构预测中,α-螺旋、β-转角、无规则卷曲和延伸结构分别为35.28％、6.10％、16.45％和42.18％.经保守结构域预测,具有Cellulase保守结构域.系统进化树结果显示,该基因的氨基酸序列与X.citri pv.punicae str.LMG 859(CCF67690.1)的亲缘关系最近.以gyrB、GAPHD和rpoD作为内参基因,经qRT-PCR分析CEL在Xcm侵染芒果叶片12 h后表达量持续上升,明显高于对照,在72 h处为最大表达量,由此推断该基因在病菌侵染时发挥重要作用.

摘要： 采用机械法、内切葡聚糖酶预处理/机械法、木聚糖酶预处理/机械法制备得到木质纤维素纳米纤丝,通过分析形态与结构特性探索了酶预处理过程对木质纤维素纳米纤丝性能的影响.结果表明,内切葡聚糖酶/机械法制备的木质纤维素纳米纤丝具有最高的保水值(564％)、最优的比表面积(173.71 m2/g)和最稳定的Zeta电位(-45.43 mV).内切葡聚糖酶预处理能够疏松木质纤维微观结构,利于后续机械研磨分离出更细小的纤丝.

摘要： [目的]利用豆腐黄浆水为发酵原料制备芽孢杆菌制剂,降低芽孢杆菌制剂生产成本,提高菌制剂活菌数.[方法]利用豆腐黄浆水发酵制备枯草芽孢杆菌SB13和地衣芽孢杆菌BL14菌制剂,并以菌落数为指标,采用单因素试验进行制备工艺优化;通过体外模拟消化及DNS法分析其作为饲料添加剂的功效.[结果]菌株SB13和BL14在黄浆水基质中均能正常生长,其产孢最佳温度为35°C,最适培养时间分别为72 h和48 h,最佳保护剂分别为10％脱脂奶粉和4％蔗糖,最适载体分别为10％麦耚和10％淀粉,最适干燥工艺均为冷冻干燥.此工艺条件下,SB13和BL14菌制剂的活菌数分别为6.40×108和9.80×108 cfu·mL-1,菌存活率分别为97.71％和94.69％.两种菌制剂经过人工胃、胰液处理2 h后,菌存活数在2.55×107～13.10×107 cfu·mL-1,内切葡聚糖酶活保存率均大于39％(胃液)和72％(胰液),并对鸡、猪和牛饲料均有显著的糖化作用.其中,菌株BL14对金黄色葡萄球菌有显著抑制效果.[结论]实现了黄浆水在芽孢杆菌制剂生产中的创新应用,降低了生产成本;通过工艺优化提高了菌制剂中的单位活菌数;制备的芽孢杆菌制剂有助于促进畜禽对饲料的吸收利用,其中菌制剂BL14还可应用于金黄色葡萄球菌感染的畜禽治疗.

摘要： 真菌能够诱导分泌纤维素酶,其中GH9家族蛋白是其中具有内切葡糖酶活性的纤维素酶成员之一.本研究利用生物信息学方法,分析了灰盖拟鬼伞GH9蛋白(Cc_GH9)的编码基因序列、基本理化性质、信号肽、亚细胞定位、跨膜螺旋、二级结构、三级结构、磷酸化位点、O-糖基化修饰位点、功能结构域、系统进化以及基序分析,为该基因后续的生理功能研究奠定基础,也为灰盖拟鬼伞纤维素酶的开发提供新思路.结果表明:Cc_GH9基因含有10个内含子,编码基因全长1770nt,编码589个氨基酸.Cc_GH9的N端前21个氨基酸为信号肽序列,为分泌性蛋白,定位于胞外,是稳定亲水性蛋白,在556～578位氨基酸为跨膜螺旋部分,属于跨膜蛋白.二级结构中以无规则卷曲和α-螺旋为主,在29个丝氨酸(S)上、17个苏氨酸(T)上和17个酪氨酸(Y)上可能发生磷酸化修饰,在182位丝氨酸(S)处可能发生O-糖基化修饰,含有Glyco_hydro_9保守结构域,与拟鬼伞Coprinopsis marcescibilis的GH9蛋白亲缘关系最近,包含3个基序.

摘要： 为提高枯草芽孢杆菌内切葡聚糖酶的分泌水平,对枯草芽孢杆菌SB13产内切葡聚糖酶的促进因子进行了筛选,并通过正交试验进行条件优化,结果表明:MgSO_(4)、VB_(1)、VB_(2)和大豆多糖对菌SB13产内切葡聚糖酶均有显著的促进作用,各因子对菌SB13产内切葡聚糖酶的最佳促进浓度分别为(w/v):MgSO_(4)0.6%、VB_(1)0.2%、VB_(2)0.4%和大豆多糖0.8%,正交试验法L_(9)3^(4)表明菌SB13最优促酶因子组合为VB_(1)0.2%、VB_(2)0.5%、Mg^(2+) 1.6%、大豆多糖0.4%,优化获得最优促进温度为30°C、pH值为7.0。通过对促进因子的筛选及条件优化,最终使菌SB13产内切葡聚糖酶活力分别提高了200%,为高内切葡聚糖酶水平的芽孢杆菌制剂生产及应用提供参考依据。

摘要： 为构建高效表达的内切葡聚糖酶基因工程菌,本研究以牛瘤胃液中微生物全基因组为模板,通过PCR扩增方法得到eg片段,将其克隆至表达载体pMG36e中获得分泌型表达载体pMG36e::eg;将测序正确后的重组质粒电转导到乳酸菌(Lactococcus lactis NZ9000)中,得到L.lactis NZ9000/pMG36e::eg重组菌株,将发酵上清液通过10%三氯乙酸(Trichloroacetic acid,TCA)/丙酮沉淀法浓缩蛋白后,用刚果红染色法和3,5-二硝基水杨酸(3,5-Dinitrosalicylic acid,DNS)法检测该蛋白酶活性,使用滤纸酶活力(filter paper enzyme activity,FPA)法检测该蛋白酶的总酶活,并对重组内切葡聚糖酶进行酶学性质研究。结果表明:从牛瘤胃微生物中克隆得到一个基因大小为1500 bp左右的条带,该酶分子量为50 kDa左右,经刚果红染色有明显水解圈,水解圈直径为2.32 cm;采用DNS法测定该重组蛋白的酶活为12.4019 U·mL^(−1),用FPA法测定总酶活为12.2469 U·mL^(−1);重组蛋白酶对羧甲基纤维素钠、滤纸、微晶纤维素、脱脂棉均有酶活性;最适反应温度为90°C;最适反应pH为6;其中Cu^(2+)、Mn^(2+)、Ba^(2+)、Zn^(2+)、Co^(2+)等均可以提高重组酶的酶活力,而Fe^(2+)可抑制重组内切葡聚糖酶活力。本试验纤维素酶eg基因在L.lactis NZ9000中的稳定高效表达为提高青贮饲料的营养价值和消化率提供了技术支持。

摘要： 内切葡聚糖酶(EG)是纤维素酶的重要组分,在纤维素降解酶系中发辉重要作用.由于天然微生物来源的内切葡聚糖酶产量低,极大地制约了其生产和应用,所以对内切葡聚糖酶进行高效异源表达是解决这一问题的有效途径.为了获得高效内切葡聚糖酶酿酒酵母工程菌,本研究从纤维梭菌中克隆了内切葡聚糖酶(EG)基因,全长1 996 bp,编码440个氨基酸,并与来源于酿酒酵母的PGK启动子序列、来源于pPIC9K质粒的α-信号肽序列以及来源于pSH65质粒的CYC1终止子序列通过重叠延伸PCR法构建完整表达盒(PαEGC),通过整合rDNA的方法构建内切葡聚糖酶酿酒酵母的表达载体,在酿酒酵母中进行内切葡聚糖酶的随机多拷贝表达.利用微滴数字PCR鉴定内切葡聚糖酶拷贝数,并探索拷贝数与蛋白表达量之间的关系.通过rDNA整合法获得了拷贝数为l、3、4、7、9、11、15、16、19、21、22、23的内切葡聚糖酶酿酒酵母工程菌,结果表明当拷贝数为15时,酶活性最高,为351 U/mL.本研究成功构建了内切葡聚糖酶酿酒酵母工程菌,为其他工业酶异源高效表达提供参考和借鉴.

摘要： 纤维素酶是指能降解纤维素的一类酶的总称,主要包括三类,分别为内切β-1,4-葡聚糖酶(EC3.2.1.4)、纤维二糖水解酶(EC3.2.1.91)和β-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.21).其中,内切β-1,4-葡聚糖酶是纤维素酶系中的重要组分,能随机水解纤维素的β-1,4-葡萄糖苷键,产生纤维低聚糖,广泛用于纺织和洗涤等工业.rn 内切β-1,4-葡聚糖酶应用于洗涤剂中,可使棉织物的纤维素结构膨松,利于洗涤剂成分进入纤维间隙与污垢充分接触,从而大大提高了洗涤效果,并且用添加纤维素酶的洗涤剂洗过的衣物,色泽鲜艳、柔软,对衣物损伤小.rn 近年来，诺维信，杰能科等国外公司的纤维素酶已在国内市场销售，售价较高，而国内目前尚无很好的产品代替进口酶制剂，随着洗涤工业的发展，洗涤用内切p-1,4-葡聚糖酶的需求童日益增大，因此挖掘耐表面活性剂的内切p-1,4-葡聚糖酶基因，并且构建适合大规模发酵生产的基因工程菌，实现内切p-1,4-葡聚糖酶的工业化生产对于洗涤剂行业的发展至关重要.rn 本研究克隆表达了一种内切葡聚糖酶，重组菌在TB培养基中经过IPTG诱导，实现了高效表达.摇瓶发酵48h产酶达到46IU/mL,3L全自动发酵罐发酵33 h酶活最高，为656.6 IiJ/mL，为目前报道的最高水平.对重组酶进行了分离纯化及酶学性质研究，重组酶的最适pH和最适温度分别为5.5和80°C.重组酶具有良好的热稳定性，在50°C和60°C条件下的半衰期分别为132 h和65 h.动力学参数Km为5.1 mg/mL, Ymax为22.3 UimL，重组Ce15A在常见的洗涤用表面活性剂(SDS,LAS,AE09和TX-10 )中稳定性好，25°C放呈1h后残留酶活在90%以上，具有潜在的工业应用价值.

摘要： 根据史永磊的方法稍作改变.对培养基的氮源及浓度、碳源及浓度和无机盐离子添加剂及浓度作单因素试验,在此基础上运用响应曲面回归分析(Response surface analysis,RSA)方法对重组大肠杆菌发酵培养基进行优化.

摘要： 本文利用小麦蓝矮病植原体16SrDNA基因和延伸因子(EF-TU)tuf基因序鉴定小麦蓝矮病植原体是属于植原体16SrI组，完成了小麦蓝矮植原体的分类，分析了免疫收列膜蛋白(Imp)基因的克隆和分子特性，小麦蓝矮植原体寄主范围的分子鉴定及病原多态性RFLP分析，小麦蓝矮病植原体胸普酸激酶基因(tmk)的分离、原核表达。

摘要： 本发明涉及源自嗜松青霉(Penicillium pinophilum)的内切葡聚糖酶PPCE和含有所述内切葡聚糖酶的纤维素酶配制物，以及利用它们处理含纤维素纤维的方法。上述内切葡聚糖酶PPCE对纤维具有高活性，最适温度为低温，且最适pH为强酸性。

摘要： 公开Staphylotrichum coccosporum来源的新的内切葡聚糖酶、编码上述内切葡聚糖酶的多核苷酸、以及含有上述内切葡聚糖酶的纤维素酶配制物。上述内切葡聚糖酶或纤维素酶配制物可用于含有纤维素的纤维的色彩的澄澈化、起毛的减少、肌肤触感和外观的改善、色彩的局部性变化、以降低硬化等为目的的洗涤用，以及纤维加工用途。

摘要： 本发明提供了一种内切葡聚糖酶，该酶可用于减少含纤维素纤维的绒毛、改善其手感和外观、使颜色澄明、局部改变颜色、降低硬挺度并可用于洗涤剂组合物中，还可用于使废纸脱墨和提高纸浆的打浆度等。从Humicola insolens中克隆了一种编码内切葡聚糖酶NCE5的cDNA并测定了其DNA序列和由该DNA序列推导出的氨基酸序列。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种内切葡聚糖酶基因、内切葡聚糖酶及其制备方法和应用。本发明内切葡聚糖酶基因macel的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其是通过对来源于嗜热真菌Melanocarpus albomyces的内切葡聚糖酶的序列(GenBank:AJ515703.1)进行综合优化得到。本发明内切葡聚糖酶MaCel的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其不仅丰富了内切葡聚糖酶的种类和来源途径，且其自身具有较高的酶活性和耐热性，在较宽的pH范围内也表现出良好的稳定性，具有良好的应用前景和产业价值。

摘要： 本发明涉及源自嗜松青霉(Penicilliumpinophilum)的新型内切葡聚糖酶PPCE和含有所述内切葡聚糖酶的纤维素酶配制物，以及利用它们处理含纤维素纤维的方法。上述内切葡聚糖酶PPCE对纤维具有高活性，最适温度为低温，且最适pH为强酸性。

摘要： 公开Staphylotrichum coccosporum来源的新的内切葡聚糖酶、编码上述内切葡聚糖酶的多核苷酸、以及含有上述内切葡聚糖酶的纤维素酶配制物。上述内切葡聚糖酶或纤维素酶配制物可用于含有纤维素的纤维的色彩的澄澈化、起毛的减少、肌肤触感和外观的改善、色彩的局部性变化、以降低硬化等为目的的洗涤用，以及纤维加工用途。

摘要： 本发明涉及源自嗜松青霉(Penicillium pinophilum)的新型内切葡聚糖酶PPCE和含有所述内切葡聚糖酶的纤维素酶配制物，以及利用它们处理含纤维素纤维的方法。上述内切葡聚糖酶PPCE对纤维具有高活性，最适温度为低温，且最适pH为强酸性。

摘要： 公开Staphylotrichum coccosporum来源的新的内切葡聚糖酶、编码上述内切葡聚糖酶的多核苷酸、以及含有上述内切葡聚糖酶的纤维素酶配制物。上述内切葡聚糖酶或纤维素酶配制物可用于含有纤维素的纤维的色彩的澄澈化、起毛的减少、肌肤触感和外观的改善、色彩的局部性变化、以降低硬化等为目的的洗涤用，以及纤维加工用途。

摘要： 本发明提供了一种内切葡聚糖酶，该酶可用于减少含纤维素纤维的绒毛、改善其手感和外观、使颜色澄明、局部改变颜色、降低硬挺度并可用于洗涤剂组合物中，还可用于使废纸脱墨和提高纸浆的打浆度等。从Humicola insolens中克隆了一种编码内切葡聚糖酶NCE5的cDNA并测定了其DNA序列和由该DNA序列推导出的氨基酸序列。

摘要： 本发明涉及一种由β‑葡聚糖产生的新型β‑1，3‑1，6‑内切葡聚糖酶，并产生低聚糖或葡糖。更具体地说，本发明提供一种通过使用对β‑葡聚糖展现β‑1，3‑内切葡聚糖酶活性和β‑1，6‑内切葡聚糖酶活性以及对海带低聚糖展现转糖基化活性的β‑1，3‑1，6‑内切葡聚糖酶而以高产率产生不同聚合度的低聚糖或葡糖的效应。