兽疫链球菌

摘要： 兽疫链球菌、粪便链球菌、粪肠链球菌是鸡链球菌病的致病菌。鸡对本病最敏感。兽疫链球菌主要传染成鸡,粪肠链球菌则多侵袭雏鸡。通过呼吸道或消化系统传播,也可导致内源性传播。一般为散发,病死率10%~15%。

摘要： 兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)是一种营养缺陷型菌株,其生长代谢需要外源添加各类营养因子.通过在兽疫链球菌发酵对数生长初期外源添加氨基酸的方式研究其对透明质酸生产的影响.结果 表明,外源添加氨基酸对透明质酸的生产具有显著的促进作用.笔者初步研究了当添加质量浓度为0.5 g/L时,18种常见氨基酸对透明质酸产量的影响.在此基础上,在18种氨基酸中选取苯丙氨酸和丝氨酸对透明质酸合成进行浓度优化实验,结合细胞生长和代谢产物分析,更进一步研究氨基酸对透明质酸合成的影响.结果 表明,苯丙氨酸和丝氨酸添加质量浓度分别为0.5 g/L和0.5 g/L时,透明质酸产量提高最大,与对照相比分别提高了18.05％和17.44％,菌体浓度均没有增加,但是乳酸浓度分别降低了9.93％和15.80％,说明氨基酸的添加不是通过增加菌体量来提高透明质酸产量,而是改变了碳源流向,减少了乳酸积累,使得透明质酸产量显著提高.本研究为高产透明质酸的发酵工艺提供了借鉴与依据.

摘要： 透明质酸(HA)广泛应用于医学、化妆品、食品等领域.HA的生物活性取决于其分子量(Mw).透明质酸寡糖由于具有重要的生理活性与特殊生理功能,在医药领域具有重要的应用前景.兽疫链球菌因其发酵周期短、生产强度较强的特点,在商业生产HA上具有广泛的应用.为了高效发酵合成透明质酸寡糖和解决发酵过程的溶氧问题,文中通过在兽疫链球菌WSH-24中过表达透明质酸合酶HasA以及优化表达水蛭来源的透明质酸酶LHAase.重组菌株摇瓶发酵24 h,透明质酸寡糖积累至0.97 g/L,比野生菌提高了182.0％.在3L发酵罐中发酵24 h,透明质酸寡糖生产强度为294.2 mg/(L.h),HA积累至7.06 g/L,比野生茵的罐上水平提高了112.4％.文中所构建的发酵合成透明质酸寡糖的兽疫链球菌重组菌株具有重要的应用前景.

摘要： 兽疫链球菌( Streptococcus zooepidemicus )是一种营养缺陷型菌株,其生长代谢需要外源添加各类营养因子。通过在兽疫链球菌发酵对数生长初期外源添加氨基酸的方式研究其对透明质酸生产的影响。结果表明,外源添加氨基酸对透明质酸的生产具有显著的促进作用。笔者初步研究了当添加质量浓度为0.5g/L时,18种常见氨基酸对透明质酸产量的影响。在此基础上,在18种氨基酸中选取苯丙氨酸和丝氨酸对透明质酸合成进行浓度优化实验,结合细胞生长和代谢产物分析,更进一步研究氨基酸对透明质酸合成的影响。结果表明,苯丙氨酸和丝氨酸添加质量浓度分别为0.5g/L和0.5g/L时,透明质酸产量提高最大,与对照相比分别提高了18.05%和17.44%,菌体浓度均没有增加,但是乳酸浓度分别降低了9.93%和15.80%,说明氨基酸的添加不是通过增加菌体量来提高透明质酸产量,而是改变了碳源流向,减少了乳酸积累,使得透明质酸产量显著提高。本研究为高产透明质酸的发酵工艺提供了借鉴与依据。

摘要： 本文以一株产透明质酸(hyaluronic acid,HA)的兽疫链球菌为研究对象,在5.00 L发酵罐和250 mL摇瓶中考察了温度和pH对HA发酵过程中菌体生长、HA产量、HA分子量大小以及分布的影响.结果 显示,当pH为7.00时适合菌体生长,而在产物合成阶段更高的pH条件8.00下HA比生成速率更高.据此,设计了分段和周期性改变发酵过程pH的调控模式,研究表明:分段pH调控方式与pH为7.00时相比HA浓度没有提高,但是pH在7.00和8.00之间进行的分段调节时分子量提高了10.60％,同时显著降低了多分散系数,另外在pH在7.00和8.00之间进行的分段调节的同时在33°C的培养温度下收获时HA分子量提高了18.70％,而为后续工业化生产分子量更为集中的HA,同时降低不同分子量HA分离成本提供了方向.

摘要： 构建透明质酸发酵动力学模型可反映发酵过程中菌体生长量、基质消耗量及透明质酸产量之间的变化规律.采用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)进行摇瓶发酵,利用MATLAB软件对透明质酸含量、还原糖残量、菌体量的实验数据进行了非线性规划,建立了透明质酸生成动力学的模型.对拟合值与实验值进行比较,发现其吻合度较好,相对误差＜5％.本模型适用于培养基初糖质量浓度＜30 g/L的分批发酵,为透明质酸的产业化生产放大、发酵过程的工艺设计和管理控制提供科学的依据.%The construction of hyaluronic acid fermentation kinetics model can reflect the change rules between the biomass variation,substrate consumption and hyaluronic acid production in the fermentation process.The hyaluronic acid was fermented in shake flask by Streptococcus zooepidemicus,the hyaluronic acid content,reducing sugar residue content and bacterial amount were conducted with nonlinear programme,and the kinetic model of hyaluronic acid production was established by MATLAB software.The fitted value was coincided with the experimental value,and the relative error was less than 5％.The model was applicable to the batch fermentation in the medium with initial glucose concentration less than 30 g/L,and it could provide scientific basis for the industrial production amplification of hyaluronic acid,fermentation technology design and operation management.

摘要： 本研究以兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)为出发菌株,在10 L全自动发酵罐中进行透明质酸的发酵研究,考察葡萄糖浓度和补料方式对发酵结果的影响.结果显示,控制葡萄糖总浓度为80 g/L,采用初始葡萄糖浓度为40 g/L,一次性补加剩余40 g/L葡萄糖的方式时,菌体量和透明质酸的产量比分批培养时分别提高了13.5％和28.5％,乳酸的积累量降低7.89％,透明质酸的相对产率达到了10.02％,平均分子量达到了1.56×106 u.因此,透明质酸的发酵生产可以采用补糖的方式提高生产强度和产品质量.

摘要： 旨在构建一种在兽疫链球菌（Streptococcusequisubsp.zooepidemicus）中可用的基因诱导表达系统，并探究其在两步发酵中的应用。分别构建蔗糖、乳糖、木糖和乳酸链球菌素（nisin）诱导表达载体，以编码透明质酸合成酶的 hasA 基因作为报告基因，以 hasA 基因功能缺失导致荚膜缺陷的∆hasA 作为宿主菌，观察诱导后荚膜生成情况验证系统的可行性。结果显示，木糖和nisin 系统不能诱导 hasA 表达，乳糖系统诱导表达效率低，蔗糖系统可严谨且高效诱导基因表达。以∆hasA/pLH201菌株实施两步发酵，葡萄糖为唯一糖源时仅用于菌体生长，添加蔗糖诱导产生透明质酸，终产量达到3.4g/L。成功构建了一种以蔗糖为诱导物的可控-诱导基因表达系统，可用于兽疫链球菌两步发酵。%This work aimed at establishing an inducible gene expression system in Streptococcus zooepidemicus,and investigating the application of it in controllable two-stage fermentation. Induced expression vectors by sucrose,lactose,xylose and nisin were constructed, then using hasA of hyaluronic acid(HA)synthase as reporter gene,and ∆hasA with capsule-deletion resulted from the function deletion of gene hasA as the host bacterium,the feasibility of these systems was verified by observing the generation of capsule. The results showed that :The expression of hasA was not induced in the xylose and nisin vector,at low-efficiency in lactose vector,and efficient and rigorous in sucrose vector. A controllable two-stage fermentation mode was conducted using ΔhasA/pLH201 as strain and glucose only as sole sugar source for the growth of bacteria,and added sucrose induced the generation of HA,and HA production reached at 3.4 g/L. In conclusion,this study successfully constructed a sucrose-induced gene expression system that can be used for two-stage fermentation of S. zooepidemicus.

摘要： [目的]兽疫链球菌(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)中透明质酸主要的生物合成途径和相关基因已经被研究得比较透彻,探究一种挖掘与透明质酸合成相关新基因的策略.[方法]利用自杀质粒pSET4s::sacB在宿主基因组中的随机整合作用,筛选具有表型差异突变菌株构建突变体库,进一步利用连接介导PCR (Ligation mediated PCR,LM-PCR)方法和全基因组重测序,检测质粒整合位点,通过基因无痕敲除和回补实验验证插入位点.[结果]构建了包含150株具有表型差异突变株的突变体库;以荚膜合成能力缺失的1号突变株(M1)作为基础研究对象,检测到自杀质粒整合到基因组458 960位点上,破坏了编码塔格糖-6-磷酸激酶的lacC基因;无痕敲除lacC基因得到△lacC,表型分析发现△lacC表现为粘性荚膜特性;进一步全基因组重测序发现,除了lacC基因位点存在插入突变,206 613位点存在碱基G缺失,导致编码透明质酸合成酶的hasA基因发生移码突变,且回补hasA基因后,M1恢复粘性荚膜合成能力.[结论]M1突变株粘性荚膜合成能力的缺失由hasA基因功能缺失引起,与lacC基因功能缺失无关.初步建立了兽疫链球菌中高通量筛选与透明质酸合成相关新基因的策略,为今后挖掘新基因奠定了基础.

摘要： 选用一株ATCC 700400马链球菌亚种,通过离子注入法对链球菌代谢产物透明质酸的影响来找寻透明质酸低耗高产的可能和路径.注入离子选用N+,注入能量分别为15 keV和20 keV,范围是0(对照)、(20×1014～100 x 1014N+/cn2(不同氮离子注入参数以对比).透明质酸测定选用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)比浊法,通过对比来筛选HA高产型链球菌.结果表明,在注入能量为20 keV,剂量为20×1014 N+/cm2时,产出透明质酸浓度明显高于其他菌株,诱变效果最好,为今后进一步诱变筛选及发酵条件优化奠定了良好的基础.

摘要： 本文以兽疫链球菌作为发酵生产透明质酸(HA)的菌种,研究了其生长特性及产HA的特性,并通过紫外诱变得到一高产菌株SZM,其产HA量较出发菌株提高20℅以上.还通过正交实验研究了培养基组成等对菌的生长及产HA量的影响.放大试验表明该发酵过程稳定,发酵液中HA含量达到1.2g/L.

摘要： 该文研究了用兽疫链球菌发酵生产透明质酸的工艺，对发酵的搅拌转速、温度、糖沈度、表面活性剂、ＰＨ值等条件进行了优化，得到最佳发酵条件，透明质酸的发酵水平达到５．０～６．５ｇ／Ｌ。

摘要： 对发酵法制备透明质酸的菌种选育、工艺优化等方面的研究进展进行了综述,重点讨论了温度、pH值、搅拌转速,发酵时间以及培养方式等发酵条件对透明质酸产量和分子量的影响,并对发酵法生产透明质酸的发展前景进行了展望,旨在为发酵法生产透明质酸的发酵条件的研究提供参考和借鉴。

摘要： 对发酵法制备透明质酸的菌种选育、工艺优化等方面的研究进展进行了综述,重点讨论了温度、pH值、搅拌转速,发酵时间以及培养方式等发酵条件对透明质酸产量和分子量的影响,并对发酵法生产透明质酸的发展前景进行了展望,旨在为发酵法生产透明质酸的发酵条件的研究提供参考和借鉴。

摘要： 对发酵法制备透明质酸的菌种选育、工艺优化等方面的研究进展进行了综述,重点讨论了温度、pH值、搅拌转速,发酵时间以及培养方式等发酵条件对透明质酸产量和分子量的影响,并对发酵法生产透明质酸的发展前景进行了展望,旨在为发酵法生产透明质酸的发酵条件的研究提供参考和借鉴。

摘要： 对发酵法制备透明质酸的菌种选育、工艺优化等方面的研究进展进行了综述,重点讨论了温度、pH值、搅拌转速,发酵时间以及培养方式等发酵条件对透明质酸产量和分子量的影响,并对发酵法生产透明质酸的发展前景进行了展望,旨在为发酵法生产透明质酸的发酵条件的研究提供参考和借鉴。

摘要： 对发酵法制备透明质酸的菌种选育、工艺优化等方面的研究进展进行了综述,重点讨论了温度、pH值、搅拌转速,发酵时间以及培养方式等发酵条件对透明质酸产量和分子量的影响,并对发酵法生产透明质酸的发展前景进行了展望,旨在为发酵法生产透明质酸的发酵条件的研究提供参考和借鉴。

摘要： 本发明公开了一株马链球菌兽疫亚种突变株及其应用，本发明的马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)SFPE‑A17，于2021年11月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号的，保藏编号为CGMCC No.23795。利用本发明的马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)SFPE‑A17在发酵透明质酸的过程中，菌株生长速度显著加快，菌株更早开始积累透明质酸，透明质酸的产量较原始菌株提高42.9％，能够显著地降低生产成本，所得透明质酸分子量降低一倍，分子量平均分布为0.54×106Da，在中低分子量透明质酸市场能够提高产业效率，具有重要的工业应用前景。

摘要： 本发明公开了制备获得的3株抗马链球菌兽疫亚种SzM蛋白单克隆抗体，并在不同应用场景下对其免疫反应性进行评价。使用表达纯化的SzM蛋白免疫BALB/c小鼠，基于杂交瘤细胞技术获得一批候选杂交瘤细胞株。通过ELISA、Western Blot等方法筛选得到3株产抗SzM蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。Western Blot结果表明3株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体均能够与人工表达的或细菌中粗提的野生型SzM蛋白反应，且抗体均适用于Dot Blot、IFA等免疫学检测方法。3株单克降抗体均为IgG1亚型，κ轻链的抗体，结合区域位于SzM蛋白恒定区。纯化后的抗体经过体外调理吞噬实验表明有良好的调理吞噬活性。

摘要： 本发明主要涉及一株在低糖环境下生产透明质酸的马链球菌兽疫亚种及其应用，属于生物多糖生产技术领域。本发明筛选到的马链球菌兽疫亚种WTF101，于2022年1月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号，保藏编号为CCTCC NO：M 2022051。本发明的马链球菌兽疫亚种WTF101结合分批补料发酵技术，通过优化发酵培养基，平衡菌种生长与代谢之间的关系，最终在总糖含量为7.2％的条件下，透明质酸产量可达12.2g/L，发酵液的粘度可达74000mPa·s，原料与产物之间的转化效率可达16.9％，大大提高了透明质酸的生产效率，节约生产成本。

摘要： 本发明公开了一株马链球菌兽疫亚种突变株及其应用，本发明的马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)SFPE‑A17，于2021年11月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号的，保藏编号为CGMCC No.23795。利用本发明的马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)SFPE‑A17在发酵透明质酸的过程中，菌株生长速度显著加快，菌株更早开始积累透明质酸，透明质酸的产量较原始菌株提高42.9％，能够显著地降低生产成本，所得透明质酸分子量降低一倍，分子量平均分布为0.54×106Da，在中低分子量透明质酸市场能够提高产业效率，具有重要的工业应用前景。

摘要： 本发明涉及分子生物学技术领域，具体公开了马链球菌兽疫亚种的实时荧光定量PCR检测引物、方法与应用。本发明的马链球菌兽疫亚种的实时荧光定量PCR检测引物，其核苷酸序列如SEQ ID No.1‑2所示。以该引物进行马链球菌兽疫亚种的荧光定量PCR检测，特异性好、敏感度较高、成本低且快速，可用于大量样品检测。

摘要： 本发明涉及一株马兽疫链球菌(又称马链球菌兽疫亚种,Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)XJMSY16‑1，CGMCC No.12428，具有序列表1中的16S rRNA基因序列；该菌株分离自马链球菌病病马,革兰氏阳性细菌，细胞呈球状，排列成对，或呈弯曲的长链，在普通肉汤和平板生长不良；5%绵羊鲜血平板上发生β型溶血，露珠状小菌落周围形成完全透明的溶血带，宽度可达2.5～3.2 mm。生长呈兼性厌氧，生长温度从26°C～40°C，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4～7.5。发酵葡萄糖产酸，不能发酵乳糖，甘露醇及山梨醇。该菌株可用于制备马链球菌病灭活疫苗。由该菌株制备的疫苗针对性好，成本低，安全，保护效果好。

摘要： 本发明公开了一种在兽疫链球菌发酵过程中原位诱导纳米纤维素凝胶化的方法，在兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)发酵过程中加入纳米纤维素。通过上述方法，加入纳米纤维素既可形成凝胶，同时，对透明质酸的产量也有很大的提高，具有产品得率高，条件温和、可操作性强、经济环保等特点。

摘要： 本发明涉及一株马兽疫链球菌( 又称马链球菌兽疫亚种,Streptococcus equi subsp.zooepidemicus) XJMSY16‑1，CGMCC No.12428，具有序列表1中的16S rRNA基因序列；该菌株分离自马链球菌病病马,革兰氏阳性细菌，细胞呈球状，排列成对，或呈弯曲的长链，在普通肉汤和平板生长不良；5%绵羊鲜血平板上发生β型溶血，露珠状小菌落周围形成完全透明的溶血带，宽度可达2.5～3.2 mm。生长呈兼性厌氧，生长温度从26°C～40°C，最适生长温度37 °C，最适生长pH7.4～7.5。发酵葡萄糖产酸，不能发酵乳糖，甘露醇及山梨醇。该菌株可用于制备马链球菌病灭活疫苗。由该菌株制备的疫苗针对性好，成本低，安全，保护效果好。

摘要： 本发明提出了一种兽疫链球菌菌株。所述兽疫链球菌菌株的葡萄糖激酶基因过表达。根据本发明实施例的兽疫链球菌菌株经发酵处理后，所获得的HA产量显著提高。

摘要： 本发明提出了一种兽疫链球菌的基因工程菌株。所述基因工程菌株携带外源的基因表达框，所述外源的基因表达框包括第一基因表达框和第二基因表达框，其中，所述第一基因表达框包括第一启动子和hasA基因，所述第一启动子和hasA基因可操作的连接；所述第二基因表达框包括第二启动子和hasB基因，所述第二启动子和hasB基因可操作的连接。根据本发明实施例的兽疫链球菌的基因工程菌株，携带外源的hasA基因表达框和外源的hasB基因表达框，而不携带外源的hasC基因表达框，外源的基因表达框中的hasA基因和hasB基因在两个独立地启动子下启动表达，相比于现有兽疫链球菌的基因工程菌株，具有显著更高的HA合成产量。