共转化

摘要： 高效安全的转基因技术对于推进转基因植物商业化生产、降低食品和环境安全风险具有重要意义.共转化法是获得无标记转基因植物的有效手段,为了确立筛选基因(bar)与目的基因β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,gus)共转化小麦(Triticum aestivum)的最佳摩尔比,建立安全高效的小麦共转化体系,本研究以普通小麦'科农199'为受体材料,完整质粒pAHC25为参照,采用基因枪介导法将Ubi-bar基因表达盒或pAHC20与Ubi-gus基因表达盒分别按摩尔比1:1,1:2,1:3共6个独立共转化组合导入受体材料,经胚性愈伤组织诱导、选择培养、再生等过程筛选稳定转化子.结果表明,随着Ubi-gus摩尔浓度增加,gus基因瞬时表达率显著增加,但瞬时表达与稳定表达之间无相关性.不同组合之间转化率差异显著,其中以Ubi-bar或pAHC20:Ubi-gus摩尔比1:2转化率最高.Ubi-bar或pAHC20:Ubi-gus摩尔比为1:2时,完整质粒转化率显著低于最小表达盒,但是,摩尔比为1:1或1:3时,完整质粒显著高于最小表达盒的转化率.GUS染色和Southern blot检测结果表明,gus基因能在受体细胞中稳定整合、表达及遗传.除结实差,阳性株系在形态上与对照无差异.该转化体系的建立为小麦遗传转化研究打下了坚实的基础.

摘要： 为了解睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonastestosteroni,C.testosteroni)ATCC11996的激素降解原理,研究了睾丸酮丛毛单胞菌中三种调控蛋白LysR familytranscriptionalregulator、LuxR family transcriptional regulator、TetR family transcriptional regulator(LysR、LuxR、TetR)对短链脱氢酶Short-chain dehydrogenase/reductase(SDRx)的生物学作用.SDRx作为SDR家族中的一员对甾体激素降解具有重要作用,利用基因同源重组及移码突变原理构建SDRx敲除株,并检测其在五种不同甾体激素培养条件下降解量,基因敲除对甾体激素降解能力影响程度为睾丸酮>甲睾酮>孕酮>雌酮>雌二醇;构建SDRx蛋白表达载体并进行原核表达,得到纯化目的蛋白浓度116.66μg/mL;制备特异性小鼠多克隆抗体,ELISA方法测定抗体效价为1:8000;分别构建了含有三种调控蛋白与SDRx启动子共转化菌株,用ELISA方法检测了其SDRx的表达量,LuxR和TetR调控蛋白在两种激素条件下对SDRx脱氢酶的表达起到促进作用,且睾丸酮诱导条件下的促进作用尤为显著,其中睾丸酮条件下TetR的促进作用更明显大于LuxR.

摘要： 优化了黑曲霉柠檬酸生产菌株的原生质体形成条件并建立基因表达系统.利用酶解法制备原生质体,最优的酶解液配比为5 mg/mL溶壁酶、0.2 U/mL几丁质酶和460 U/mL葡萄糖醛酸酶.最优的渗透压稳定剂为0.7 mol/L KCI,茵丝层厚度50 μm,茵体量为0.003 g/mL.在培养基中添加1 mmol/L Mn2+有助于减少原生质体形成所需的酶量,在培养基中添加葡萄糖醛酸酶有助于得到独立的孢子进行萌发,从而促进原生质体的形成.利用共转化的方式,可以同时将两个表达框整合到基因组上并实现基因表达.

摘要： 利用电激转化法对橡胶树悬浮细胞系进行转化,初步确定卡那霉素的筛选浓度、共转化的实验条件.通过电激共转化法将NPTII、GUS、EGFP和HbCBF1基因成功导入到橡胶树悬浮细胞并整合到基因组中.通过卡那霉素抗性筛选、GFP荧光观察和PCR验证等方法,确定外源DNA片段转化成功.共筛选得到95个抗性愈伤组织,其中9个愈伤组织经过PCR验证确定整合有外源DNA片段,1个愈伤组织共转化有NPTII和GUS基因.此结果表明电激共转化法可成功应用于橡胶树悬浮细胞转化操作.

摘要： 为了研究荠菜CBF抗冷途径多基因共表达对转基因植株耐寒性的影响,通过同尾酶法将CbCBF、CbICE53、CbRCI35以及CbCOR15bP进行结合,构建了CbCOR15bP.:CbICE53+pCaMV35S::CbCBF+pCaMV35S::CbRCI35多价植物表达载体并进行了烟草的转化,通过形态观察以及电解质渗透率和相对水含量这两个生理指标的测定显示,转基因植株在4°C和-4°C低温处理情况下,多基因共转化的转基因植株在电解质渗透率和相对水含量与野生型和空载对照之间的差异非常明显,转基因植株在低温下的抗寒冻能力也明显增强,说明CBF途径多基因共转化可以明显提高烟草的抗寒冻能力,此项研究具有一定的实际应用意义.

摘要： Tomato yellow leaf curl virus ( TYLCV) is one of the most devastating viruses of cultivated tomatoes in the world. Recently, the disease occurred suddenly in China, spreading towards north from south, which has resulted in great economic losses. The lack of resistance resource limits the TYLCV resistance breeding. In order to generate engineered re-sistance, the plant expression vectors SUC2-GroEL and pBI121-AC1-AC2 were co-transformed into tomato by agrobacterium-mediated genetic transformation method, and nineteen kanamycin resistant regenerated tomato plants were obtained, inclu-ding five plants of SUC2-GroEL vector, three plants of pBI121-AC1-AC2 vector and three plants of double vectors confirmed by PCR and RT-PCR. T0 generation of the transgenic plants were inoculated with TYLCV, and it turned out 8 were TYLCV resistant. The carrying rates of TYLCV by T1 generation achieved via vectors SUC2-GroEL, pBI121-AC1-AC2, and SUC2-GroEL/pBI121-AC1-AC2 were 35%, 25%, and 15%, respectively, suggesting that the plants with double genes have a stronger disease resistance than other plants with single gene.%本研究将已构建的SUC2-GroEL和pBI121-AC1-AC2植物表达载体共转化番茄，共获得19株卡那霉素抗性再生植株。经过PCR和RT-PCR检测，初步获得转SUC2-GroEL载体的阳性植株5株，转pBI121-AC1-AC2载体的阳性植株3株以及转SUC2-GroEL/ pBI121-AC1-AC2双载体的阳性植株2株。利用TYLCV侵染性克隆农杆菌注射接种法对T0代转基因阳性植株进行抗性鉴定，获得抗TYLCV的转基因植株7株。对T0代未扩出病毒条带的T1代植株进行抗性鉴定，结果发现转SUC2-GroEL、pBI121-AC1-AC2、SUC2-GroEL/pBI121-AC1-AC2不同载体的株系植株中平均带毒率依次是35%、25%和15%，推断转双基因的植株的抗病能力优于转单个基因植株的抗病能力。

摘要： Selectable marker genes were widely used in the transgenic plants .However, these genes based on the re-sistance to antibiotic and herbicides are redundant since transgenic plants have been selected and identified .Due to the presence of selectable marker gene and its products , the environment pollution and food safety of transgenic plants are strongly concerned by consumers .With the development of transgenic technology , it is very important to eliminate the selectable marker gene in transgenic plants .In this review , utilization of selectable marker gene , methods of marker gene excision consisted of co-transformation , site-specific recombination , intrachromosomal recombination , recombination by transposon , removal of chloroplast marker gene , regeneration of direct marker-free plants, as well as the developmental directions of this technology were discussed .%选择标记基因广泛应用于植物转基因工程中，然而这些基于除草剂和抗生素类抗性选择标记基因的利用，在转基因筛选和鉴定完成后功能多余。当前转基因植物的标记基因及相关产物对环境污染和食用安全的潜在影响，已经引起了人们的广泛关注。随着转基因技术的不断发展和人们对转基因植物和食品安全性的关注，删除转基因植物中的选择标记基因非常重要。文章着重讨论了植物转基因过程中，选择标记基因的利用，删除选择标记基因的几种方法，包括共转化法、位点特异性重组、染色体内重组、转座子介导的重组、删除叶绿体转化中选择标记基因，以及无选择标记基因植株的直接再生等。同时，还对这些技术的发展作了展望。

摘要： 日前，由中南林业科技大学承担的2014年度国家林业公益性行业科研专项重大项目“林木纤维乙醇生物共转化关键技术创新与示范”项目在我校启动，中国林科院林产化学工业研究所、常德联合生物能源研究所、陕西德融科技信息发展有限公司3家项目协作单位将与中南林业科技大学一道共同攻克生物乙醇制备技术的技术难题。

摘要： 利用农杆菌介导遗传转化方法,将带有分别由Ubi组成型启动子和GluB-4水稻种子特异型启动子调控的GsHLP2/ GsHLP8基因、选择标记基因为Bar基因的双T-DNA植物表达栽体pTTBUG2、pTTBUG8、pTTBGG2、pTTBGG8转入水稻.共获得转化苗124株,PCR结果表明,高赖氨酸蛋白基因GsHLP2/GsHLP8及Bar基因已经共转化到水稻基因组上,共转化率为61.1％.通过Bialaphos抗性试验对转基因后代进行抗性检测,结果表明T1种子对Bialaphos的抗性出现分离.进而对T1代植株进行PCR检测,获得只合有目的基因而不合有选择标记基因的植株,为培育无选择标记转高赖氨酸蛋白基因水稻提供材料.

摘要： 本发明提供了一种基因工程菌及其制备方法，以双营养缺陷型菌株作为表达宿主，表达宿主通过一次电转化同时转入两种载体，其中一种载体含有外源目的基因、以及表达宿主的一种营养缺陷的补偿基因，另一种载体含有UPR关键基因HAC1p、以及表达宿主的另一种营养缺陷的补偿基因。本发明提供的工程菌含有不同基因剂量的功能基因和外源目的基因，能够通过筛选获得分泌表达外源目的基因高产工程菌株。

摘要： 本发明提供了一种基于双菌株/双质粒遗传转化柑桔的共转化方法，包括外植体预培养，农杆菌浸染步骤，其特征在于：预培养基础培养基为MS培养基，添加4mg/L 6‑苄氨基腺嘌呤（6‑BA）、1mg/L吲哚乙酸(IAA)、100μM乙酰丁香酮（AS）。本发明填补了国内外柑桔多基因共转化的空白，解决了如何实现双菌株/双质粒共转化柑桔的问题。

摘要： 本发明涉及一种在精炼厂中采用的延迟焦化器单元中将废塑料与石油渣油原料一起转化的方法。本发明的方法的目的是将任何类型的废塑料(包括聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯等，包括添加金属的多层塑料)与来自原油精炼的石油渣油材料(例如还原的原油，减压渣油等)一起转化。增值的轻质馏出物产物如车用汽油、LPG、中间馏出物等，是在本发明的方法中共转化时生产的，并且与烃类渣油的热裂解产物一起被收取和处理。在本发明的方法中进行共转化时，添加金属的塑料中的残余金属会沉积在固体石油焦炭中。

摘要： 本发明公开了一种重劣质油与煤高效共转化的装置及方法,所述装置包括进料单元、气化单元、裂解单元、粉焦返料单元；进料单元包括原料油进料系统及煤粉进料系统，完成原料油及煤粉的稳定输送；气化单元包括气化区、气化分离器、颗粒回流器，完成半焦与煤的气化，裂解单元包括预混区和提升裂解区，完成原料油、固体介质的共裂解；粉焦返料单元包括裂解分离器、变压收集罐、二级变压缓冲罐、半焦收集罐、半焦给料器，完成气固分离及固体半焦的气化区和裂解区返料；本发明有效弥补重劣质油单独裂解石油焦产率低、提供热量受局限的缺陷，提供热载体及富氢反应气有效改善重劣质油裂解过程中边壁效应引起的生焦问题，提高裂解油的收率和品质。

摘要： 本发明属于植物基因工程研究技术领域，具体涉及一种多基因叠加共转化提高油菜综合抗逆性的方法。该方法包括：多基因植物表达载体的构建、载体的鉴定、载体转化农杆菌、制备转化液、浸花法转化油菜、筛选、鉴定、自交获得纯合体等步骤；所述多基因植物表达载体中，包含依次串联的5种抗逆功能基因和3种选择标记基因，具体排列顺序为：LB‑HYG–GUS‑BAR‑ICE1‑LOS5‑CBF3‑ABAR‑NCED3‑RB。本发明通过优化抗性基因组合，并将多个抗逆关键节点基因构建于同一表达载体中。在将该载体转化植物体后，一次转化即可使植物体能够同时适应多种逆境条件，提高植物的综合抗逆能力，表现较好的生产应用价值。

摘要： 本发明公开一种煤与油渣共转化装置及方法，煤与油渣共转化装置，包括进煤系统、油渣预炼系统及共转化系统；在油渣前期处理过程中加入了油渣预炼器，使油渣能够预热并且混合均匀生成油浆，不仅避免输送管道的堵塞，而且有效提高了后续反应过程的转化效果，在锁斗、给料斗内部底侧设置有气体冲击锥、流化给料装置等，防止输送过程中煤粉在管路中堵塞，保证了煤粉给料的不间断，在给料器前设置有输送气控制器，可以达到煤粉的连续给料，保证了煤粉进料量的准确性；油渣、煤粉在转化器内与反应气均匀反应，分子间有效碰撞概率提高，提高了反应转化率及产品煤气和焦油的品质，废弃油渣与煤粉在转化器内共同转化，达到了废弃物的有效利用和转化，并且生成了热值较高的煤气和品质较好的煤焦油产品。

摘要： 本发明提供了一种基于双菌株/双质粒遗传转化柑桔的共转化方法，包括外植体预培养，农杆菌浸染步骤，其特征在于：预培养基础培养基为MS培养基，添加4mg/L？6-苄氨基腺嘌呤（6-？BA）、1mg/L吲哚乙酸(IAA)、100μM乙酰丁香酮（AS）。本发明填补了国内外柑桔多基因共转化的空白，解决了如何实现双菌株/？双质粒共转化柑桔的问题。

摘要： 本发明提供一种双金属高效催化剂、制备方法以及甲烷‑二氧化碳共转化制备乙醇/乙醛的方法。所述催化剂通过将金属Co和Cu分步骤负载到载体钛酸锶上，利用相邻的钴纳米颗粒和铜簇，以及Cu与载体界面位点的协同，在光热条件下催化C‑C键交叉偶联反应，实现甲烷和二氧化碳共同转化为收率和选择性都较高的乙醇和乙醛。

摘要： 本发明公开了一种催化裂化柴油与甲醇共转化的方法，包括如下步骤：1)将劣质柴油与氢气混合，进入一个加氢精制反应装置，进行深度脱硫脱氮反应；2)加氢精制柴油与甲醇混合后进入径向固定床催化裂解装置，进行催化裂解反应，其中径向固定床催化裂解装置为并列两个反应器，采用加氢精制柴油与甲醇从反应器中间进料方式进行催化裂解反应。本发明方法利用劣质柴油和甲醇共转化生产低碳烯烃和轻质芳烃，在劣质柴油全转化条件下，产物中C3～C4低碳烯烃与轻质芳烃总收率60wt％，可实现以柴油和甲醇为原料增产化工品的目的。

摘要： 本发明涉及一种在精炼厂中采用的延迟焦化器单元中将废塑料与石油渣油原料一起转化的方法。本发明的方法的目的是将任何类型的废塑料(包括聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯等，包括添加金属的多层塑料)与来自原油精炼的石油渣油材料(例如还原的原油，减压渣油等)一起转化。增值的轻质馏出物产物如车用汽油、LPG、中间馏出物等，是在本发明的方法中共转化时生产的，并且与烃类渣油的热裂解产物一起被收取和处理。在本发明的方法中进行共转化时，添加金属的塑料中的残余金属会沉积在固体石油焦炭中。