共价闭合环状DNA

摘要： 肝内共价闭合环状DNA(cccDNA)的持续存在是导致乙型肝炎病毒(HBV)感染慢性化的主要原因。血清HBV RNA是包含前基因组RNA(pgRNA)及其剪切变异体的病毒样颗粒或衣壳抗体复合物,在一定程度上可反映肝内cccDNA的存在及活性,因而在反映抗病毒治疗应答、预测停药后复发方面具有重要意义。该文综述了血清HBV RNA在抗病毒治疗中的应用进展。

摘要： 乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)与机体免疫相关,在现症及既往乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清中均可测得,其在HBV自然史的判断及治疗策略中可发挥巨大作用。HBV感染慢性化与肝内共价闭合环状DNA(cccDNA)活跃转录和持续存在密切相关;抗-HBc定量与cccDNA水平有较好相关性,可作为综合评价HBV感染性疾病的一项指标。

摘要： 血清学标记物在慢性乙型病毒性肝炎(CHB)抗病毒治疗中有重要的临床意义。由于乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)存在于肝细胞内,直接测定需行肝组织穿刺活检,但临床上常因肝脏取材、检测技术及患者意愿难以实施,因此寻找一种创伤性低、准确性高、可重复性高的指标来反映HBV cccDNA转录活性是非常有必要的。血清HBcrAg水平与血清HBV DNA水平及肝内cccDNA水平密切相关,可以用来预测抗HBV治疗停药时机及复发情况。该文综述了HBcrAg检测在CHB患者中的应用情况。

摘要： 目的 使用preS1-tp融合蛋白作为新型的载体,介导针对乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白羧基端核定位信号(NLS)区的小干扰RNA(siRNA)进入感染HBV的肝细胞,从而抑制HBV复制和共价闭合环状DNA的形成.方法 以慢病毒感染系统为基础,建立表达人牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽的HepG2.2.15细胞,针对HBV NLS区设计合成siRNA;表达纯化preS1-tp融合蛋白,检测其进入细胞和与DNA结合的能力;以preS1-tp融合蛋白为载体,介导NLS siRNA递送至HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞中,观察其对HBV复制和共价闭合环状DNA水平的影响.多组间比较采用方差分析,计量资料用t检验分析组间差异.结果 成功构建HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞株并合成筛选出显著抑制HBV复制的HBV NLS siRNA.纯化并大量表达preS1-tp融合蛋白,以该融合蛋白为载体靶向输送HBV NLS siRNA,结果显示,融合蛋白可以有效靶向输送siRNA至HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞,不仅可有效抑制细胞中HBV mRNA,HBsAg和HBeAg表达,还能显著降低HBV DNA和共价闭合环状DNA的水平.结论 preS1-tp融合蛋白利用preS1与肝细胞HBV受体结合,tp与核酸结合的双功能特点,将针对HBV NLS的siRNA靶向至感染HBV的靶细胞,靶向阻断rcDNA转运入细胞核,使siRNA发挥抑制HBV复制和共价闭合环状DNA合成的作用,为HBV感染所致慢性乙型肝炎治疗提供新策略,为彻底清除体内HBV提供新的研究视角.

摘要： 乙型肝炎核心相关抗原(HBcrAg)主要构成部分为HBcAg、HBeAg和p22crAg.血清HBcrAg可预测HBV相关性肝脏疾病患者肝组织中HBV cccDNA水平、HBV相关性肝脏疾病患者HBeAg血清学转换,判断HBV相关性肝脏疾病临床治愈的终点,选择抗HBV治疗停药时机,预测HBV是否复发,预测HBV相关性肝脏疾病患者发生肝细胞癌变的概率.

摘要： 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是我国面临的重大公共卫生问题.尽管过去30年人们对HBV及HBV感染相关性肝细胞癌已有了相当深入的认识,但仍有大量关于HBV生命周期和病毒发病机制的问题亟待解决.由于缺乏HBV感染背景下可广泛使用的模式动物模型,所以制约了HBV研究的快速发展.本研究全面梳理了现有HBV小鼠模型在病毒学特征和致病性方面的不同侧重点.以HBV关键病毒学行为如病毒复制、共价闭合环状DNA的形成和持续性感染为关键词,建立不同处理手段与模型特征之间的相关性,从而便于选择正确模型开展针对性的研究,并基于此筛查有效治疗方案.

摘要： HBV引起尚未治愈的慢性感染,是世界范围内的主要健康负担.共价闭合环状DNA作为稳定的微染色体存在于受感染细胞的细胞核中,当新型治疗手段实现灭活或消除感染肝细胞中持久存在的共价闭合环状DNA,慢性感染自然过程和长期抗病毒治疗将不复存在.介绍了通过基因编辑、表观遗传修饰等方法靶向共价闭合环状DNA,以期完全性治愈HBV感染.

摘要： 目的:探讨血清HBV RNA在慢性乙型肝炎(CHB)抗病毒治疗过程中的动态变化及其临床意义.方法:慢性乙型肝炎患者62例采用恩替卡韦抗病毒治疗,分别在第0、7、14、30天以及第2、3、6、9、12个月来本院进行随访,TaqMan探针法定量检测HBV RNA水平,采用实时荧光定量PCR法进行HBV DNA水平检测,采用化学发光法进行HBsAg和HBeAg检测,采用酶法进行ALT及AST检测.结果:血清HBV RNA水平随着治疗时间的延长呈下降趋势,治疗3个月后下降速度趋缓,从9个月后变化不大.血清HBV RNA水平从0 d到6个月间,各个相邻监测点间变化均有统计学意义(均P＜0.05),在治疗6～12个月两个时间点间差异无统计学意义(P＞0.05).HBeAg(+)患者基线血清HBV RNA与HBV DNA(rs=0.68,P＜0.05)、HbsAg(ra=0.64,P＜0.05)、HBeAg(r=0.77,P＜0.05)均强相关.在治疗前6个月各时间点,HBV RNA 与 HBV DNA 呈强相关(rs＞0.5,P＜0.05).HBV RNA与HBsAg在治疗前3个月呈强相关(rs＞0.5,P＜0.05),治疗6～9个月时为弱相关(rs=0.23,P=0.31;rs=0.28,P=0.23).HBVRNA与HBeAg水平在各治疗时间点均为强相关(rs＞0.5,P＜0.05).HBeAg(-)患者在治疗30d1时血清HBV RNA与HBV DNA呈正相关(rs=0.62,P＜0.05),在治疗14 d时HBV RNA与HBsAg水平呈正相关(rs=0.60,P＜0.05).结论:抗病毒治疗时,慢性乙型肝炎患者血清HBV RNA水平随着治疗时间的延长呈下降趋势.患者血清HBV RNA水平与血清HBV DNA、HBsAg、HBeAg在治疗前和治疗初期有明显相关性,随着治疗时间延长,其相关性逐渐减弱.

摘要： 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)作为一种嗜肝DNA病毒,在感染肝细胞后会在细胞核中形成病毒转录复制的模板和基因储存库——共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),其持续存在是乙型肝炎慢性化和难以治愈的核心,也是此研究领域内的重点。从细胞样品中稳定抽提获取cccDNA对于保证cccDNA检测的准确性至关重要。Hirt法是一种抽提真核细胞染色体外DNA的方法,被用于HBV cccDNA的抽提,但存在操作复杂和耗时长等问题。为简化操作,有研究对Hirt法进行改良,结合硅胶膜离心柱来抽提染色体外DNA,但尚不清楚该法用于HBV cccDNA抽提与传统Hirt法的效果差异。本研究基于HBV cccDNA细胞转染系统、HBV复制细胞系及感染系统,以DNA印迹(Southern blot)和定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)作为检测评价手段,平行比较了传统Hirt-酚/氯仿法与改良Hirt-过柱法抽提HBV cccDNA的效果。结果表明,两种方法具有相当的抽提效率和抽提特异性,而改良Hirt-过柱法耗时更短,提示在进行细胞HBV cccDNA抽提时可选择改良Hirt-过柱法以提高实验效率。

摘要： 目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、共价闭合环状DNA(cccDNA)、合成前基因组RNA(pgRNA)水平检测在慢性乙型肝炎(CHB)诊治中的价值。方法选取2019年1月-2021年4月在郑州市某医院接受治疗的83例CHB患者为研究对象。采用定量聚合酶链式反应检测pgRNA水平;采用化学发光法检测血清HBsAg水平;提取肝活检组织中的DNA进行cccDNA检测。比较治疗前不同分期患者pgRNA、HBsAg以及cccDNA水平。分析治疗前患者血清pgRNA与HBsAg、cccDNA的关系。比较患者在治疗前、治疗6个月、12个月时的pgRNA、HBsAg以及cccDNA水平。比较pgRNA、HBsAg以及cccDNA水平在判断CHB患者病情进展情况中的价值,包括敏感度、特异度以及准确度。结果不同分期CHB患者的pgRNA水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ期CHB患者pgRNA水平均高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者,Ⅱ期CHB患者pgRNA水平高于Ⅲ、Ⅳ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。对于所有CHB患者,pgRNA水平与HBsAg、cccDNA水平呈正相关关系(P<0.05);对于Ⅰ、Ⅱ期CHB患者,pgRNA水平与HBsAg、cccDNA水平呈正相关关系(P<0.05)。治疗6、12个月时,患者pgRNA水平均低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗6、12个月时,患者HBsAg水平均低于治疗前;同时治疗12个月时,患者HBsAg水平低于治疗6个月时,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗6、12个月时,患者cccDNA水平均低于治疗前;同时治疗12个月时,患者cccDNA水平低于治疗6个月时,差异均有统计学意义(P<0.05)。cccDNA与pgRNA的AUC均较高,可作为判断CHB患者病情进展情况的指标,且pgRNA的预测敏感度、特异度以及准确度均较高。结论对CHB患者进行HBsAg、pgRNA以及cccDNA等指标的检测,可帮助医师准确判断患者病情进展情况,为疗效的评估、临床方案的选择提供可靠依据。

摘要： 目的:旨在探讨慢性HBV感染的自然病程中肝内HBV cccDNA和HBV血清标志物之间的关系.方法：共有103例初治HBV感染者参与实验,其中10例处于免疫耐受期,59例处于免疫清除期,8例处于低复制期,26例处于再活期.血清HBsAg测定采用Abbott化学发光法.血清HBV DNA测定采用实时荧光定量PCR.对于定量肝内共价闭合环状DNA，样本在质粒安全ATP依赖DNA酶处理后进行滚环扩增，最后用选择性cccDNA特异性跨缺口引物进行实时荧光定量PCR检测，人肌动蛋白基因作为内参.结果：免疫消除期患者中肝内cccDNA水平与血清HBsAg水平呈正相关((r=0.333,P=0.012)。其他3个阶段患者中此两者没有显着的相关性，(免疫耐受期，r=0.209, P=0.563;低复制期，rr=0.492 , P=0.262;再活期，r=0.085 , P=0.721)。此外，肝内cccDNA水平与血清HBV DNA水平只在低复制期患者中相关(r=-0.951, P=0.013)。观察的四个阶段受试者中肝内cccDNA水平和血清ALT水平或HBeAg水平无显着相关性。结论：在HBV感染的自然病程中，血清HBsAg和血清HBV DNA可以分别作为免疫消除相和低复制期患者肝内cccDNA的替代性指标。

摘要： 目的:旨在探讨慢性HBV感染的自然病程中肝内HBV cccDNA和HBV血清标志物之间的关系.方法：共有103例初治HBV感染者参与实验,其中10例处于免疫耐受期,59例处于免疫清除期,8例处于低复制期,26例处于再活期.血清HBsAg测定采用Abbott化学发光法.血清HBV DNA测定采用实时荧光定量PCR.对于定量肝内共价闭合环状DNA，样本在质粒安全ATP依赖DNA酶处理后进行滚环扩增，最后用选择性cccDNA特异性跨缺口引物进行实时荧光定量PCR检测，人肌动蛋白基因作为内参.结果：免疫消除期患者中肝内cccDNA水平与血清HBsAg水平呈正相关((r=0.333,P=0.012)。其他3个阶段患者中此两者没有显着的相关性，(免疫耐受期，r=0.209, P=0.563;低复制期，rr=0.492 , P=0.262;再活期，r=0.085 , P=0.721)。此外，肝内cccDNA水平与血清HBV DNA水平只在低复制期患者中相关(r=-0.951, P=0.013)。观察的四个阶段受试者中肝内cccDNA水平和血清ALT水平或HBeAg水平无显着相关性。结论：在HBV感染的自然病程中，血清HBsAg和血清HBV DNA可以分别作为免疫消除相和低复制期患者肝内cccDNA的替代性指标。

摘要： 目的:旨在探讨慢性HBV感染的自然病程中肝内HBV cccDNA和HBV血清标志物之间的关系.方法：共有103例初治HBV感染者参与实验,其中10例处于免疫耐受期,59例处于免疫清除期,8例处于低复制期,26例处于再活期.血清HBsAg测定采用Abbott化学发光法.血清HBV DNA测定采用实时荧光定量PCR.对于定量肝内共价闭合环状DNA，样本在质粒安全ATP依赖DNA酶处理后进行滚环扩增，最后用选择性cccDNA特异性跨缺口引物进行实时荧光定量PCR检测，人肌动蛋白基因作为内参.结果：免疫消除期患者中肝内cccDNA水平与血清HBsAg水平呈正相关((r=0.333,P=0.012)。其他3个阶段患者中此两者没有显着的相关性，(免疫耐受期，r=0.209, P=0.563;低复制期，rr=0.492 , P=0.262;再活期，r=0.085 , P=0.721)。此外，肝内cccDNA水平与血清HBV DNA水平只在低复制期患者中相关(r=-0.951, P=0.013)。观察的四个阶段受试者中肝内cccDNA水平和血清ALT水平或HBeAg水平无显着相关性。结论：在HBV感染的自然病程中，血清HBsAg和血清HBV DNA可以分别作为免疫消除相和低复制期患者肝内cccDNA的替代性指标。

摘要： 目的:旨在探讨慢性HBV感染的自然病程中肝内HBV cccDNA和HBV血清标志物之间的关系.方法：共有103例初治HBV感染者参与实验,其中10例处于免疫耐受期,59例处于免疫清除期,8例处于低复制期,26例处于再活期.血清HBsAg测定采用Abbott化学发光法.血清HBV DNA测定采用实时荧光定量PCR.对于定量肝内共价闭合环状DNA，样本在质粒安全ATP依赖DNA酶处理后进行滚环扩增，最后用选择性cccDNA特异性跨缺口引物进行实时荧光定量PCR检测，人肌动蛋白基因作为内参.结果：免疫消除期患者中肝内cccDNA水平与血清HBsAg水平呈正相关((r=0.333,P=0.012)。其他3个阶段患者中此两者没有显着的相关性，(免疫耐受期，r=0.209, P=0.563;低复制期，rr=0.492 , P=0.262;再活期，r=0.085 , P=0.721)。此外，肝内cccDNA水平与血清HBV DNA水平只在低复制期患者中相关(r=-0.951, P=0.013)。观察的四个阶段受试者中肝内cccDNA水平和血清ALT水平或HBeAg水平无显着相关性。结论：在HBV感染的自然病程中，血清HBsAg和血清HBV DNA可以分别作为免疫消除相和低复制期患者肝内cccDNA的替代性指标。

摘要： 目的:旨在探讨慢性HBV感染的自然病程中肝内HBV cccDNA和HBV血清标志物之间的关系.方法：共有103例初治HBV感染者参与实验,其中10例处于免疫耐受期,59例处于免疫清除期,8例处于低复制期,26例处于再活期.血清HBsAg测定采用Abbott化学发光法.血清HBV DNA测定采用实时荧光定量PCR.对于定量肝内共价闭合环状DNA，样本在质粒安全ATP依赖DNA酶处理后进行滚环扩增，最后用选择性cccDNA特异性跨缺口引物进行实时荧光定量PCR检测，人肌动蛋白基因作为内参.结果：免疫消除期患者中肝内cccDNA水平与血清HBsAg水平呈正相关((r=0.333,P=0.012)。其他3个阶段患者中此两者没有显着的相关性，(免疫耐受期，r=0.209, P=0.563;低复制期，rr=0.492 , P=0.262;再活期，r=0.085 , P=0.721)。此外，肝内cccDNA水平与血清HBV DNA水平只在低复制期患者中相关(r=-0.951, P=0.013)。观察的四个阶段受试者中肝内cccDNA水平和血清ALT水平或HBeAg水平无显着相关性。结论：在HBV感染的自然病程中，血清HBsAg和血清HBV DNA可以分别作为免疫消除相和低复制期患者肝内cccDNA的替代性指标。

摘要： 目的：建立新的原位检测肝组织中乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)的方法,探讨cccDNA在慢乙肝患者肝组织中的分布、定位及与肝组织病理的关系.方法：选取35例HBV感染患者病理检测剩余肝组织,包括14例慢性乙肝、4例肝硬化和l7例肝细胞癌患者,诊断标准符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2010年版).将患者肝组织样本固定,经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD酶)消化后,设计4对滚环引物和一对跨缺口引物,应用滚环扩增结合原位跨缺口PCR扩增技术检测肝组织中cccDNA的表达,并与传统的方法进行比较.同时应用该方法检测17例肝癌患者癌与癌旁组织cccDNA的表达分布情况,并与荧光定量PCR方法进行比较.结果：HBV cccDNA阳性信号为蓝色或紫蓝色呈团块状，定位于细胞核。肝癌患者癌及癌旁组织HBV cccDNA阳性率分别为10%( 2/20)和85%( 17/20 )，两者差异有显著性(P<0.01)。结论：成功建立了新的石蜡包埋肝组织HBV cccDNA的原位检测方法，该方法比传统原位检测方法具有较好的特异性、灵敏度和稳定性。肝细胞癌患者癌旁组织病毒复制水平高于癌组织。

摘要： 目的：建立新的原位检测肝组织中乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)的方法,探讨cccDNA在慢乙肝患者肝组织中的分布、定位及与肝组织病理的关系.方法：选取35例HBV感染患者病理检测剩余肝组织,包括14例慢性乙肝、4例肝硬化和l7例肝细胞癌患者,诊断标准符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2010年版).将患者肝组织样本固定,经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD酶)消化后,设计4对滚环引物和一对跨缺口引物,应用滚环扩增结合原位跨缺口PCR扩增技术检测肝组织中cccDNA的表达,并与传统的方法进行比较.同时应用该方法检测17例肝癌患者癌与癌旁组织cccDNA的表达分布情况,并与荧光定量PCR方法进行比较.结果：HBV cccDNA阳性信号为蓝色或紫蓝色呈团块状，定位于细胞核。肝癌患者癌及癌旁组织HBV cccDNA阳性率分别为10%( 2/20)和85%( 17/20 )，两者差异有显著性(P<0.01)。结论：成功建立了新的石蜡包埋肝组织HBV cccDNA的原位检测方法，该方法比传统原位检测方法具有较好的特异性、灵敏度和稳定性。肝细胞癌患者癌旁组织病毒复制水平高于癌组织。

摘要： 目的：建立新的原位检测肝组织中乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)的方法,探讨cccDNA在慢乙肝患者肝组织中的分布、定位及与肝组织病理的关系.方法：选取35例HBV感染患者病理检测剩余肝组织,包括14例慢性乙肝、4例肝硬化和l7例肝细胞癌患者,诊断标准符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2010年版).将患者肝组织样本固定,经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD酶)消化后,设计4对滚环引物和一对跨缺口引物,应用滚环扩增结合原位跨缺口PCR扩增技术检测肝组织中cccDNA的表达,并与传统的方法进行比较.同时应用该方法检测17例肝癌患者癌与癌旁组织cccDNA的表达分布情况,并与荧光定量PCR方法进行比较.结果：HBV cccDNA阳性信号为蓝色或紫蓝色呈团块状，定位于细胞核。肝癌患者癌及癌旁组织HBV cccDNA阳性率分别为10%( 2/20)和85%( 17/20 )，两者差异有显著性(P<0.01)。结论：成功建立了新的石蜡包埋肝组织HBV cccDNA的原位检测方法，该方法比传统原位检测方法具有较好的特异性、灵敏度和稳定性。肝细胞癌患者癌旁组织病毒复制水平高于癌组织。

摘要： 目的：建立新的原位检测肝组织中乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)的方法,探讨cccDNA在慢乙肝患者肝组织中的分布、定位及与肝组织病理的关系.方法：选取35例HBV感染患者病理检测剩余肝组织,包括14例慢性乙肝、4例肝硬化和l7例肝细胞癌患者,诊断标准符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2010年版).将患者肝组织样本固定,经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD酶)消化后,设计4对滚环引物和一对跨缺口引物,应用滚环扩增结合原位跨缺口PCR扩增技术检测肝组织中cccDNA的表达,并与传统的方法进行比较.同时应用该方法检测17例肝癌患者癌与癌旁组织cccDNA的表达分布情况,并与荧光定量PCR方法进行比较.结果：HBV cccDNA阳性信号为蓝色或紫蓝色呈团块状，定位于细胞核。肝癌患者癌及癌旁组织HBV cccDNA阳性率分别为10%( 2/20)和85%( 17/20 )，两者差异有显著性(P<0.01)。结论：成功建立了新的石蜡包埋肝组织HBV cccDNA的原位检测方法，该方法比传统原位检测方法具有较好的特异性、灵敏度和稳定性。肝细胞癌患者癌旁组织病毒复制水平高于癌组织。

摘要： 共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV复制的初始模板，其在肝细胞内的长期存在是导致乙肝病情慢性化及停药后复发的重要因素，因此检测HBV cccDNA具有重要临床意义，是评价HBV复制活跃程度和抗病毒疗效的重要指标。本研究收集了54例慢性乙型肝炎患者的肝组织标本和对应的血清，进行了HBV cccDNA定量、血清HBsAg定量，分析了两种定量指标之间及其与血清HBV DNA载量相关性。本研究结果表明，与血清HBV DNA相比，HBsAg与肝组织内cccDNA的相关性更好，支持在慢性乙肝患者中使用血清HBsAg定量评估患者的免疫和肝细胞内病毒的复制状态，帮助临床监测抗病毒治疗疗效、分析预后和选择停药时机。

摘要： 本发明公开了一种乙肝共价闭合环状DNA磁性捕获技术。本发明制备HBV cccDNA特异性DNA分子探针磁性纳米微球的方法，步骤如下：(1)采用化学共沉淀法制备Fe3O4纳米粒子；(2)采用反相乳液法制备硅壳磁性纳米颗粒；(3)对硅壳磁性纳米颗粒进行亲和素修饰；(4)偶联针对cccDNA特异序列的ssDNA探针。本发明还公开了前述方法制备得到的探针磁性纳米微球，以及应用该微球富集HBV cccDNA的方法。本发明方法制备的HBV cccDNA特异性DNA分子探针磁性纳米微球，可以有效特异捕获HBV cccDNA，能够实现HBV cccDNA的高效快速富集分离的，分离方法简单，应用前景良好。

摘要： 本发明的药物组合物包含共价闭合环状DNA形成抑制剂，其对治疗与形成共价闭合环状DNA相关的疾病具有疾病改善作用，所述共价闭合环状DNA相关的疾病包括乙型肝炎感染和涉及形成共价闭合环状DNA的任何疾病。

摘要： 本发明公开了一种检测乙型肝炎病毒中松弛环状DNA和共价闭合环状DNA突变位点的新方法，属于生物技术领域，是一种简便、易行、稳定、可靠的检测系统。在野生型模板、突变型模板及实际检测样本中分别应用，优化检测条件后，以模板DNA用量为约10

摘要： 本发明公开一种利用数字PCR(ddPCR)定量检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(cccDNA)的方法，采用T5核酸外切酶处理待测样本；设计特异性扩增cccDNA的引物对和探针，所述引物对序列如SEQ ID NO.:1和SEQ ID NO.:2所示，所述探针序列如SEQ ID NO.:3所示，利用ddPCR定量检测待测样本中HBV cccDNA。本发明提供的利用ddPCR定量检测乙型肝炎病毒cccDNA的方法，能够实现对低水平HBV cccDNA的高灵敏度、高准确性定量检测。

摘要： 本发明公开了基于PCR‑CRISPR‑cas13a检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的试剂盒。本发明提供了一种用于检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的试剂盒，含有Cas13a蛋白和crRNA，或者二者形成的复合体；所述crRNA包括用于与Cas13a蛋白结合的锚定序列和靶向乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA跨缺口区靶序列的向导序列；所述乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA跨缺口区靶序列如SEQ ID No.4所示。本发明是采用PCR技术联合CRISPR‑Cas13a技术检测HBV cccDNA，以此方法开发的HBV cccDNA新型检测试剂盒，具有特异性强、灵敏度高的特点，有着非常重要的临床应用前景和开发价值。

摘要： 本发明公开了一种乙肝共价闭合环状DNA磁性捕获技术。本发明制备HBV cccDNA特异性DNA分子探针磁性纳米微球的方法，步骤如下：(1)采用化学共沉淀法制备Fe

摘要： 本发明涉及一种乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA精确定量的方法。本发明所述的乙型肝炎病毒cccDNA精确定量的方法包括以下步骤：通过核酸定量控制样本的拷贝数在10000拷贝之内；采用双缺口法设计检测cccDNA及rcDNA的引物及探针；进行数字式PCR扩增；在数字PCR仪分析软件中调整分析参数，以阳性对照孔中阳性微粒平均荧光强度的1/2～1/3设为阳性阈值，然后通过数字式PCR仪自带软件分析待测样本计算样本中cccDNA拷贝数，排除由非特异性扩增造成的假阳性。本发明所述方法解决了rcDNA双缺口法PCR法的假阳性干扰问题，与其他数字PCR检测cccDNA相比，无需特异性DNA酶对样本进行处理，实现了闭管操作，减少了交叉污染风险并简化操作流程。

摘要： 本发明的药物组合物包含共价闭合环状DNA形成抑制剂，其对治疗与形成共价闭合环状DNA相关的疾病具有疾病改善作用，所述共价闭合环状DNA相关的疾病包括乙型肝炎感染和涉及形成共价闭合环状DNA的任何疾病。

摘要： 本发明涉及一种快速共价闭合环状DNA纯化试剂盒，是由以下方法完成，包括细菌沉淀、非碱裂解、硅胶膜结合环状DNA、洗柱、洗脱，是在上述方法的基础上增加了六氨合高钴和精胺成份，采用改良的非碱裂解液裂解细菌、通过多胺选择性地使线状的基因组DNA和RNA发生高度浓缩而丧失与硅胶膜结合的能力，仍然能够与硅胶膜结合，经过洗涤和洗脱就可以达到快速共价闭合环状DNA纯化试剂盒，本发明DNA纯化技术代替了两步式DNA纯化技术，完全省略了质粒粗提步骤，不依赖于大肠杆菌的种类对操作剧烈程度不敏感，步骤少，缩短质粒DNA纯化操作时间，节约人力、物力，适合于高通量质粒DNA纯化和工业级大规模质粒DNA纯化技术使用。

摘要： 本实用新型公开了一种乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA，包括盒体(1)、位于盒体(1)内的衬垫(2)，所述衬垫(2)包括第一层衬垫，所述第一层衬垫上设有至少有8个容器孔(3)，所述容器孔(3)分别设置有：PSAD反应试剂1管、特异性扩增HBV cccDNA引物5管、BstDNA聚合酶1管、LAMP反应缓冲液1管。本试剂盒试剂盒使用环介导等温扩增，无需PCR仪器或专门的仪器设备，所采用的引物及试剂用于扩增HBV cccDNA特异性高、敏感性强，扩增后易于判断，且操作简便灵活，易于掌握；该试剂盒设计合理、操作方便，易于推广。