HRM

摘要： 本研究根据鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和3型(DHAV-3)的5′UTR基因的保守区域,设计了1对特异性的引物,扩增目的片段大小约为199 bp.通过优化反应条件,建立了基于高分辨率熔解曲线(HRM)分析的鸭甲肝病毒1型和鸭甲肝病毒3型的鉴别检测方法.特异性试验结果表明,该方法能特异性地检测出DHAV-1和DHAV-3,检测其它常见鸭源病毒不能形成特异性的熔解峰;敏感性和重复性试验表明,对p-DHAV-1和p-DHAV-3阳性质粒的最低检测限分别为220 copies和28 copies,对不同批次的样品扩增效果良好,具有良好的批内和批间重复性.采用该方法检测临床样品,与传统的二重PCR方法比较,符合率为100％.该方法为DHAV-1和DHAV-3的临床疑似病例的鉴别检测、快速诊断以及分子流行病学调查等提供了技术支撑.

摘要： 人力资源管理(简称HRM)向人力资本管理时代过渡,我国企业因企业性质不同而呈现别样风貌,尤其以民营企业为主,其老板“一言堂”背后带来的系列管理难题,高级人力资源管理人才不足,民营企业从知名企业高薪引进人才而产生“水土不服”等弱点凸显。如何破解这道难题,深圳市人力资源管理协会会长曾晓华娓娓道来。

摘要： 该研究通过高分辨率溶解曲线(HRM)分析法对36例乳腺癌组织TOX3基因的7号外显子、PPP2R1A基因的6号外显子、PTEN基因的5号外显子进行突变位点检测,利用DNA测序分析法进一步验证。结果显示TOX3基因的7号外显子与PPP2R1A基因的6号外显子中无突变,但在PTEN基因5号外显子第1408位核苷酸序列由A突变为T,导致其编码氨基酸由N突变为Y,所检测的36例乳腺癌组织中有11例检测到突变,HRM结果与DNA测序结果分析一致。

摘要： 该研究通过高分辨率溶解曲线(HRM)分析法对36例乳腺癌组织TOX3基因的7号外显子、PPP2R1A基因的6号外显子、PTEN基因的5号外显子进行突变位点检测,利用DNA测序分析法进一步验证.结果显示TOX3基因的7号外显子与PPP2R1A基因的6号外显子中无突变,但在PTEN基因5号外显子第1408位核苷酸序列由A突变为T,导致其编码氨基酸由N突变为Y,所检测的36例乳腺癌组织中有11例检测到突变,HRM结果与DNA测序结果分析一致.

摘要： 目的 建立一种通过高分辨熔解曲线(H RM)-非标记探针基因分型分析方法,检测恶性疟原虫青蒿素耐药相关K13基因C580Y突变位点.方法 通过构建野生型和C580Y突变型质粒,设计相应引物、探针,应用HRM-非标记探针技术检测C580Y突变.结果 成功检测出标本中含有C580Y突变的基因型及野生基因型.检测野生型和突变型的探针峰的温度之差为5°C.结论 H RM-非标记探针技术是一种能够快速、准确、廉价、反应通量大的检测方法,适用于疫区恶性疟原虫青蒿素耐药相关K13基因突变的大批量检测.

摘要： Brassica rapa is one of the most important leafy vegetable crops with large cultivated area in China.To increase the availability of DNA markers in B.rapa,we developed insertion-deletion(InDel)markers utilizing high-resolution melting(HRM)curve analysis.We designed primers for 252 InDels(≥3 bp)evenly distributed in the genome and tested gene polymorphisms with eight accessions.In total,208 markers were specifically amplified,and 148 InDels with polymorphism were genotyped successfully using HRM.We further analyzed the correlation with InDel size,GC number,and predicted the difference in Tm values(Tm)using 208 markers with specific amplification.We found that the success rate of InDel markers was correlated with the GC number of InDel and the predicted-Tm,but not clearly correlated with the length of InDel.When the GC number within InDel was≥8,the successful rate exceeded 90.0%.When the predicted-Tm reached 0.5°C,the success rate was greater than 90.0%,and when it was≥0.6°C,the rate climbed to 100.0%,indicating their role as the optimal parameter for successful development of an applicable InDel marker.The polymorphic InDel markers can be easily genotyped using HRM.They are of great value in genetic analysis,construction of linkage map,and molecular marker-assisted selection in B.rapa.

摘要： The development of next generation sequencing(NGS)and high throughput genotyping are important techniques for the QTL mapping and genetic analysis of different crops.High-resolution melting(HRM)is an emerging technology used for detecting single-nucleotide polymorphisms(SNPs)in various species.However,its use is still limited in maize.The HRM analysis was integrated with SNPs to identify three types of populations(NIL population,RIL population and natural population),and the useful tags were screened.The patterns of temperatureshifted melting curves were investigated from the HRM analysis,and compared these with the kit.Among all 48 pairs of primers,10 pairs of them were selected:six pairs of primers for the NIL population,three pairs of primers for the RIL population,and one pair of primer for the natural population.The marker for the natural population was developed with a matching rate of 80%for the plant height trait,based on the data of the phenotypic characteristics measured in the field.This study provides an effective method for maize genotyping in the classification of maize germplasm resources,which can be applied to other plants for high-throughput SNP genotyping or further mapping.

摘要： 目的 探讨EGFR基因突变对非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床特征,预后的价值,揭示总生存期(OS)≥3年的生存特点.方法 回顾性分析2013年1月1日至2018年6月30日南京医科大学附属肿瘤医院接受个体化治疗的349例NSCLC患者临床资料.对应收集石蜡包埋组织标本,采用HRM法,检测组织中EGFR基因第18、19、20、21外显子的突变状态,分析EGFR基因突变与患者临床病理参数的相关性.Kaplan-Meier方法和χ2分析随访资料完整的249例患者EGFR基因突变对生存的影响,揭示OS≥3年生存影响因素.结果 在349例NSCLC肺癌患者中,EGFR基因突变率为50.4％,EGFR基因主要高突变人群是女性(62.2％)和腺癌患者(52.0％),0.05).截至2018年12月15日,249例随访完整的患者中,中位生存时间为23个月.EGFR基因的总突变和21突变,与野生型相比较,能显著提高无进展生存期(PFS)和OS,差异具有统计学意义(P0.05).OS≥3年和OS≤1年的患者在性别、TNM分期、淋巴结转移、EGFR总突变率、21的突变率及靶向治疗率方面差异有统计学意义(P<0.05).结论 EGFR基因的总突变和21突变的患者均能明显延长生存期.

摘要： As Human Resource Management (HRM) activities could add value through helping the companyachieve its strategic goals, it has played an important role in organisational development. Since People'sRepublic of China is an example of a developing country, this report focuses on examining the distinguishingfeatures of "HRM" in China, and how appropriate are Western-style HRM practices in this emerging country.

摘要： As Human Resource Management (HRM) activities could add value through helping the companyachieve its strategic goals, it has played an important role in organisational development. Since People'sRepublic of China is an example of a developing country, this report focuses on examining the distinguishingfeatures of "HRM" in China, and how appropriate are Western-style HRM practices in this emerging country.

摘要： As Human Resource Management (HRM) activities could add value through helping the companyachieve its strategic goals, it has played an important role in organisational development. Since People'sRepublic of China is an example of a developing country, this report focuses on examining the distinguishingfeatures of "HRM" in China, and how appropriate are Western-style HRM practices in this emerging country.

摘要： 本发明公开了一种快速区分四种血清型登革病毒的RT‑PCR‑HRM或PCR‑HRM引物、试剂及方法。根据四种血清型的登革病毒基因组序列比对结果，设计了三条引物，以RNA为模板加LC green染料进行一步法RT‑PCR或以构建的含登革病毒280bp碱基的质粒为模板加入LC green染料进行PCR扩增，扩增产物进行HRM分析，HRM标准曲线图与峰型图均可以明显的区分四种血清型的登革病毒。本方法操作简单、试剂成本低廉、检测灵敏度高且分型结果可靠，是一种对四种血清型登革病毒进行检测分型的创新方法。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种大豆HRM‑SNP分子标记点标记及其应用，进行大豆SNP标记的开发、浙鲜九号基因组DNA提取、高分辨率熔解曲线过程与分析、浙鲜九号基于HRM技术的SNP分型、浙鲜九号HRM分型验证、浙鲜九号SNP指纹图谱的构建。本发明具有高通量、分析时间短：一次可同时完成对96个或384个样品的分析，适合大规模开发和检测SNP位点；本发明操作简便，无需序列特异性探针以及后续测序，只需要设计PCR引物，进行PCR反应，接着直接进行HRM，便可完成对样品的基因型分析；本发明特异性好：PCR产物无需后续处理，完全闭管操作。

摘要： 一种实现UPLC‑HRMS中保留时间漂移校正与化合物注册的方法，通过UPLC‑HRMS同时定性和定量表征复杂样本中的化学成分，自动提取化合物信息并构建其质谱谱图，筛选质谱谱图中离子信息丰富的化合物作为标志物，采用动态时间规划算法进行样本间的时间漂移粗略校正，然后对EIC峰进行精细化校正，并根据校正后的保留时间结合化合物的高精度m/z值，利用网络链接聚类算法实现化合物注册。该方法适用于利用基于UPLC‑HRMS的大批量样本解析，包括代谢组学、脂质组学、蛋白质组学等研究领域，以及食品分析、中药分析等复杂样本解析。

摘要： 本发明涉及的是食品安全检测技术领域，尤其涉及沙门氏菌食源性致病菌的HRM血清分型方法、靶点基因、特异性扩增引物和试剂盒。沙门氏菌食源性致病菌的HRM血清分型方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤一，根据沙门氏菌的ykgD基因序列，ykgD基因序列如SEQ 1所示，在其突变区的两端设计特异性扩增引物对；步骤二，提取样品DNA，利用步骤一所得特异性扩增引物对采用HRM法进行扩增；步骤三，通过荧光曲线判断样品中是否含有沙门氏菌；上述的方法不涉及疾病的治疗和诊断方法。采用本发明的分型方法对沙门氏菌菌株进行血清分型时，检测速度快，结果准确可靠，操作简单，检测成本低。

摘要： 本发明公开了一种UPLC‑HRMS Profile模式非靶向代谢轮廓数据自动解析的方法，针对样品UPLC‑HRMS非靶标代谢轮廓解析获得样品中化学成分信息。该方法首先将UPLC‑HRMS Profile模式数据根据不同仪器自适应转化为Centroid模式数据；在转化后色谱信号的基础上按照预先设定的m/z精度进行聚类，选取强度最大的离子作为种子，估计EIC范围计算离子密度，实现EIC的构建；对所有m/z对应的EIC利用局部极小值实现基线校正；待基线校正后，利用多尺度平滑卷积运算结合窗口拓展的策略获得各EIC中的色谱峰位置，根据色谱峰的位置，提取对应的色谱峰；根据保留时间和色谱峰形相似以及碎片离子m/z差值实现峰注释；并根据峰高相似性实现碎片离子的识别，最终实现样品数据的自动化解析。

摘要： 本发明公开了一种快速鉴别鸭疫里默氏杆菌野毒株和GD12疫苗株的PCR‑HRM引物和方法。本发明首次建立了一种可快速区分鸭疫里默氏杆菌野毒株和GD12疫苗株的PCR‑HRM检测方法，操作简单，高通量，显著缩短了鸭疫里默氏杆菌野毒株和GD12疫苗株鉴别与检测所需时间，并且准确度高、特异性好、重复性佳，有利于在临床实践中推广应用。

摘要： 本发明提供鉴别丝状支原体山羊亚种和山羊支原体山羊肺炎亚种的HRM引物及方法，属于兽医传染病快速诊断技术领域。HRM内引物上游引物为107F：CAATACATCCATTARMACTCTTGA，下游引物为107R：GAATWCAYTCAGGTTGATTATTAGGA，该方法是利用与荧光染料结合的双链DNA在温度升高过程中会发生减色效应的特点，通过检测双链DNA在熔解过程中释放的荧光信号所形成的特征熔解曲线来鉴别两种支原体核酸序列上碱基的差别。包括DNA提取、PCR扩增得到目的序列和进行熔解曲线分析。本发明鉴别方法特异性强、敏感性高、重复性好，操作简便。

摘要： 本发明涉及一种鉴别禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的实时荧光定量PCR‑HRM引物及其方法，所述引物的核苷酸序列为：上游引物qDPF：5’‑CCTGGCGAATGTACTTRAAC‑3’，下游引物qDPR：5’‑CACCATCCCCAGCAATAC‑3’；本发明所设计的引物特异性强，利用该引物仅禽腺病毒C型与鸭腺病毒3型可见特异性阳性扩增信号，而其他家禽常见病原没有出现阳性扩增信号；本发明仅需上述一组引物，即可同时对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行进行鉴别诊断。本发明建立的方法简单、经济、方便高效、准确率高，可应用于禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的快速区分。

摘要： 本发明公开了一种快速区分四种血清型登革病毒的RT‑PCR‑HRM或PCR‑HRM引物、试剂及方法。根据四种血清型的登革病毒基因组序列比对结果，设计了三条引物，以RNA为模板加LC green染料进行一步法RT‑PCR或以构建的含登革病毒280bp碱基的质粒为模板加入LC green染料进行PCR扩增，扩增产物进行HRM分析，HRM标准曲线图与峰型图均可以明显的区分四种血清型的登革病毒。本方法操作简单、试剂成本低廉、检测灵敏度高且分型结果可靠，是一种对四种血清型登革病毒进行检测分型的创新方法。

摘要： 本发明公开一种UHPLC‑HRMS数据依赖性采集的信息解析方法，包括以下步骤：基于UHPLC‑HRMS采集得到数据依赖性采集数据，基于所述数据依赖性采集数据中的MS1数据构建EIC；提取所述EIC中的EIC峰；基于所述EIC峰，通过SVD建立MS/MS谱图；基于所述MS/MS谱图识别源内碎片离子，并根据所述碎片离子识别结果构建MS1谱图，完成UHPLC‑HRMS分析。本发明能有效实现EIC提取、EIC峰提取、MS/MS构建和碎片离子鉴定以及MS1谱图构建，改善假阳性和假阴性的问题。