免疫层析法

摘要： 背景基于目前新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19),早诊断、早隔离、早治疗是防控传染的重要方法。建立方便快捷的免疫层析检测技术,对于防控SARS-CoV-2的传播十分必要。目的建立基于量子点标记技术的免疫荧光层析法检测抗SARS-CoV-2 N蛋白IgG抗体的方法,判断被检测者是否感染过SARS-CoV-2或者是否接种过SARS-CoV-2灭活疫苗。方法2020年8月将制备好的鼠抗人二抗和抗N蛋白抗体固定至硝酸纤维素(NC)膜上,分别作为检测线(T)和质控线(C),然后将量子点标记的SARS-CoV-2 N蛋白均匀喷洒在玻璃纤维上,干燥后组装、切割、包装成试纸条。用该试纸条分别检测35例COVID-19患者和50例健康人的血清,以酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒初筛结果作为对照,计算量子点荧光免疫层析法的检测特异度和灵敏度,并利用N蛋白抗体标准品检测试纸条灵敏度。结果本研究制备的试纸条特异度为100.00%,灵敏度为94.29%,灵敏性为8.53~17.06 ng/ml抗体浓度。结论采用量子点标记技术检测血清中的抗N蛋白IgG抗体,操作简单、快速,灵敏度及特异度强。

摘要： 本文建立了一种肝素结合蛋白(Heparin-binding protein, HBP)的定量检测方法,并检验该方法的性能。主要通过以时间分辨荧光纳米微球作为荧光标记物,结合双抗体夹心法原理和免疫层析技术,实现HBP的定量检测。本检测方法在5~1000 ng/mL线性范围内线性关系良好,方程为y = 0.0324x − 0.0971,R2 = 0.9975。本试剂的批内精密度CV ≤ 5.21%,批间精密度CV ≤ 7.06%。本试剂与中翰盛泰生物技术股份有限公司的肝素结合蛋白测定试剂盒(免疫荧光干式定量法)相关性较好,二者的阳性符合率与阴性符合率分别为96.23%和95.0%,本试剂的假阳性率和假阴性率分别为5.0%和3.77%,诊断符合率为94.52%。本研究建立了HBP定量检测方法,并且该方法具有操作简单、检测快速、结果准确的优点。

摘要： 幽门螺杆菌(Helicobacter pylor i,Hp)与慢性胃炎、胃溃疡、胃黏膜相关淋巴瘤及早期胃癌的发生密切相关,它被WHO列为Ⅰ类致癌物质。准确诊断Hp感染并针对其进行治疗非常重要。借助内镜的侵入性Hp检测会增加受检者的痛苦,其临床接受度较低,且存在适应人群的限制,不适用于相关疾病的普查。采用尿素呼气试验法进行Hp检测需要使用仪器,采用血清学试验法进行Hp检测不适用于复查。采用粪便标本检测法进行Hp检测具有操作便捷、费用低、敏感度高等优点,可用于广大患者的筛查。通过粪便检测Hp的方式有很多种,本文综述了目前临床上通过粪便检测Hp感染的热门检测方法,分析了其各自的利弊,旨在为相关研究提供参考依据。

摘要： 大环内酯类抗生素是非常重要的一类抗菌化合物,而泰乐菌素(tylosin,TYL)是最常用的预混大环内酯类抗生素。但是,这些药物的残留物会在人体中引起过敏反应,并对抗生素产生抗药性。为了评估TYL的残基,需要灵敏的分析方法以确保低浓度下的测定。该文开发了一种快速免疫层析侧流试纸条,用于专门测定牛奶样品中的TYL残留。该文筛选了抗TYL单克隆抗体。抗体滴度为2.56×10^(-5),IC_(50)为4.6091 ng/mL。该测试条由样品垫、共轭垫、包含质控线和线的硝酸纤维素(nitrocellulose membrane,NC)膜以及吸收垫组成。用试纸条测定TYL的不同标准样品(0、2、4、8、16、32、64 ng/mL)。用扫描仪计算出试纸的检出限(limit of detection,LOD)为1.5434 ng/mL,肉眼计算为10 ng/mL,计算其IC_(50)为7.8362 ng/mL,无需特殊设备,测试结果将在20 min内获得。牛奶的平行分析显示从试纸条和HPLC获得的结果相当,试纸与其他兽药无交叉反应。因此,该试纸条非常简便快捷,可作为定量、半定量或定性检测牛奶中TYL残留的筛选方法。

摘要： 当前新型冠状病毒肺炎疫情仍在世界范围内持续流行,新型冠状病毒肺炎患者临床表现呈现新的特点,快速且准确地诊断新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者对于疾病的防控至关重要。中华人民共和国国家卫生健康委员会新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)将血清学诊断作为确诊的依据。血清学诊断主要包括酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、侧流免疫层析测定(lateral flow immunoassay,LFIA)和化学发光免疫测定(chemiluminescent immunoassay,CLIA)。本文总结了国内外LFIA在COVID-19检测中的研究,供相关研究者和工作者参考。

摘要： 目的:建立一种血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,ATⅡ)的定量检测方法,并检验该方法的性能。方法:通过以时间分辨荧光纳米微球作为荧光标记物,结合双抗体夹心法原理和免疫层析技术,实现ATⅡ的定量检测。结果:工艺条件优化结果显示,T线包被浓度为1.0mg/mL、结合物稀释比例为6倍、检测时间为5min时,曲线梯度和线性最好。检测方法在5~700ng/L范围内线性关系良好,方程为y=10.226x–9.1429,R^(2)=0.9989,批内精密度CV≤2.90%,批间精密度CV≤4.90%,最低检测限为1.36ng/L,准确度检测相对偏差在±1.40%范围内,检测方法具有良好的分析特异性,交叉反应因子不会影响检测结果。测定血清样本中的ATⅡ浓度,与已上市化学发光法检测试剂盒检测结果相关性较好,二者的阳性符合率与阴性符合率分别为96.67%和98.18%,假阳性率和假阴性率分别为2.22%和2.73%,诊断符合率为97.50%。结论:研究建立的ATⅡ定量检测方法具有操作简单、检测快速、结果准确的优点。

摘要： 磁性侧流层析技术(MLFA)是一种将磁性纳米材料与侧流层析检测平台相结合的快速分析技术。在保留了传统侧流层析技术操作简单、快速实时、低成本优势的基础上,引入功能化磁性纳米材料,实现了复杂基质中目标物的选择性分离和富集,从而提高检测灵敏度和准确性。该文重点关注了近五年来MLFA技术在食品分析领域的研究进展,总结了磁性纳米材料的主要种类及MLFA的主要检测原理,并对食源性病原菌和真菌毒素、兽药等小分子有害物质的检测进行了介绍。最后,总结了MLFA技术的研究现状并对未来的发展方向进行了展望。

摘要： 目的:采用快速免疫层析法(ICA)筛查诊断围产期孕妇生殖道B族链球菌(GBS)感染者,观察抗菌药物干预围产期孕妇生殖道GBS感染者不良妊娠结局,为临床干预提供依据.方法:2018年1月～2020年9月,采用ICA检测围产期孕妇生殖道分泌物确诊GBS感染316例,按是否实施抗菌药物干预分为干预组(167例)和非干预组(149例),观察两组的不良妊娠结局,且进行统计学分析.结果:干预组胎膜早破及早产发生率低于非干预组,但差异均无统计学意义(χ2=0.372、2.301,P=0.576、0.174);干预组产褥热发生率低于非干预组,差异具有统计学意义(χ2=12.408,P=0.000).干预组新生儿窒息及胎儿窘迫发生率低于非干预组,但差异均无统计学意义(χ2=0.824、1.831,P=0.381、0.207);干预组新生儿感染发生率低于非干预组,差异具有统计学意义(χ2=7.403,P=0.000).结论:抗菌药物干预生殖道感染GBS的围产期孕妇,可改善不良妊娠结局,显著降低产褥热及新生儿感染的发生率.

摘要： 目的 建立一种基于免疫层析法(Immunochromatographic assay,ICA)的快速简便的人腺病毒(Human adenoviruses,HAdVs)检测方法.方法 利用抗原结合和病毒斑点实验检测发现单克隆抗体3C 11和7E6能特异性结合所有测试的人腺病毒,以这两个抗体建立ICA方法.使用培养病毒及10份临床咽拭标本检测了该方法的特异性及灵敏性.结果 该ICA能特异性结合HAdV-1、2、3、4、5、6、7、10及胃肠型HAdV-41,极限范围为0.16～103TCID50/ml,所有成功分离出病毒的临床样本也显示阳性.结论 ICA检测方法是一种灵敏度高、特异性强、方便快速检测HAdVs的方法.

摘要： [目的]为建立一种新型、高灵敏度,可直观与定量分析的快速检测方法,研究创新使用具有氧化还原酶活性的合金纳米材料,将其作为标记物制备免疫层析试纸.待反应结束,使用TMB显色剂对免疫反应进行级联放大,可以显著提高检测的灵敏度,不仅可直观判断,也可精确定量分析,这为免疫层析技术标志物筛选与敏感性提高开拓了新的思路与方法.[方法]采用超声水浴法,通过抗坏血酸(AA)还原K2Ptcl4和Na2Pdcl4成功出制备Pt-Pd合金纳米颗粒,将其用于标记口蹄疫A型纯化抗原FMDV-146S,作为捕获抗原纳米标记物,再将纯化的A型表达抗原及其抗体(FMDV-146S-Ab)包被在硝酸纤维素膜(NC)上,分别作为检测线(T线)和质控线(C线),经条件优化,建立口蹄疫A型病毒抗体Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条检测方法.对该免疫层析检测技术进行方法学考核,检测结果定量分析并建立标准曲线,同时与LPB-ELISA进行结果比对.[结果]该试纸条可在10 min内完成定性和定量检测,定量检测灵敏度为1:28/test,线性范围1:26/test—1:29/test;检测A型FMDV阳性血清,敏感性为98％,检测FMDV阴性血清、O型和Asia 1型的FMDV阳性血清以及其他动物常见病毒病阳性血清,特异性为94.8％;该试纸条重复检测效果良好;与OIE推荐LPB-ELISA法比较,相关性好,相关系数为0.9112.[结论]本研究开拓采用Pt-Pd合金纳米颗粒为标记物建立免疫层析方法,并首次应用于口蹄疫病毒抗体检测,结果证实其具备较高灵敏度,相比胶体金灵敏度可提高24倍,同时具备可操作性与重现性.该研究是快速免疫层析技术的新尝试,为合金类纳米材料应用提供新的思路,未来具有实践应用前景.

摘要： 基于纳米磁珠标记的免疫层析法,建立快速定量灵敏检测玉米内州萎蔫病菌(Clavibacter michiganensis subsp.nebraskensis,Cmn)的层析试纸条检测方法.用碳二亚胺(EDC)/N-羧基琥珀酰亚胺(NHS)交联法,使玉米内州萎蔫病菌单抗4G12偶联在纳米磁珠表面上,使用喷膜仪将玉米内州萎蔫病菌单抗4H4和羊抗小鼠IgG喷涂于硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质控线,基于双抗夹心法原理建立免疫层析试纸条.通过对检测线上超顺纳米磁珠的磁信号进行检测和结果分析,Cmn抗原最低检测限度为1.0×105CFU/mL,特异性良好且检测时间缩短为5min.该方法同时可根据检测线的光学反应进行定性判断,具有操作简便、灵敏度高等优点,并可根据磁信号强度定量检测实际玉米种子样品中Cmn的浓度,为植物病原细菌的快速高效检测提供了一种新型的检测方法.

摘要： 本课题研究,为了监测大米中的镉含量,使用镉(Cd)免疫层析法快速检测套件进行了验证实验.从镉的免疫层析法与电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)的对比验证实验结果来看,在检测精度上两者之间有很好的相关性(r2=0.94),这表明免疫层析法作为重金属的镉污染检测手段,得到了验证.本研究中,作为检测对象的国产7种大米的分析结果显示,受检测大米的镉浓度均低于食品中污染限量标准(GB2762-2012) 0.2mg· kg-1,判断均处于安全范围内.但,作为检测对象的大米样品中,不管产地,籼米比粳米的镉浓度高出2.8倍.

摘要： 目的：对广州万孚公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体(HIV1／2)口腔分泌物检测试剂盒(免疫层析法)的质量进行评价。方法：1183个受检者(包括514个HIV-1感染者、86个HBV感染者、33个HCV感染者、20个梅毒感染者，10个类风湿病人、520个正常人)，分别采集血浆样品和口腔分泌物样品，对口腔分泌物样本采用广州万孚公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体(HIV1／2)口腔分泌物检测试剂盒(免疫层析法)和北京玛诺生物制药有限公司的人类免疫缺陷病毒抗体口腔粘膜渗出液诊断试剂盒(胶体金法)平行检测，对来自同一受试者的血浆样本采用上海科华生物工程股份有限公司的人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)抗体诊断试剂盒(胶体金法)进行检测，结果：不一致的样品采用新加坡MP生物医学亚太私人有限公司的人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)抗体免疫印迹试剂盒进行进一步检测，评价考核试剂的阳性符合率、阴性符合率、总符合率。结果:广州万孚公司人类免疫缺陷病毒抗体(HIV1／2)口腔分泌物检测试剂盒(免疫层析法)与北京玛诺生物制药有限公司的人类免疫缺陷病毒抗体口腔粘膜渗出液诊断试剂盒(胶体金法)的阳性符合率为99.61％，阴性符合率为100.00％，总符合率为99.83％：与上海科华生物工程股份有限公司人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)抗体诊断试剂盒(胶体金法)的阳性符合率为98.06％，阴性符合率为100.00％，总符合率均为99.15％。广州万孚公司人类免疫缺陷病毒抗体(HIV1／2)口腔分泌物检测试剂盒(免疫层析法)对口腔分泌物样本的敏感性为98.25％[97.12％，99.38％]，特异性为100％[99.91％，100％]。结论:该口腔分泌物检测试剂的敏感性和特异性较好，可用于HIV抗体的初筛。

摘要： 传统的免疫层析法(Immunochromatographic Assay,ICA)主要是以胶体金为基础,具有操作简便、检测时间短、价廉等特点,但其主要用于定性和半定量分析.近年来各种新型纳米材料如量子点(Quantum Dots,QDs)和具有表面增强拉曼光谱(Surface-enhanced Raman Spectroscopy,SERS)效应的贵金属纳米颗粒的不断涌现及其在ICA的应用大大推进了新型定量ICA分析方法的研究.本研究建立了两种高灵敏定量免疫层析分析方法并应用于食品安全快速检测中。

摘要： 目的：了解郑州地区婴幼儿急性腹泻的原因.方法：收集2015年门诊2424例婴幼儿腹泻粪便标本采用免疫层析法快速检测轮状病毒和腺病毒.结果：轮状病毒阳性率10.23％,腺病毒阳性率3.51％.10月、11月为轮状病毒高发病季节,腺病毒全年散发,0～2岁为主要发病人群,无男女差异.结论：轮状病毒和腺病毒是婴幼儿急性胃肠炎和腹泻的主要原因,郑州地区的发病率低于南京、广州等地.

摘要： 由于泌尿生殖道衣原体感染并无特殊临床表现易误诊漏诊，实验室检查对衣原体感染早期的诊断和治疗对限制衣原体的传播及预防并发症的发生有着重要的价值。传统的衣原体检查方法是细胞培养法，但需要专门的设备，不易普及。英国UNIPATH公司的Clearview男、女两用衣原体快速检测试剂盒，是针对沙眼衣原体抗原而提供的一种检测方法，笔者用该法检测了199例性病门诊、泌尿科及妇科疑诊STD患者的沙眼衣原体抗原，现对检测结果进行报告。

摘要： 本研究采用免疫层析法对433份标本进行联合检测人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)，丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)，梅毒螺旋体抗体(抗-TP)和乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)。

摘要： 目的：比较评价流感病毒快速试剂检测人感染禽流感病毒H7N9的效果.rn 方法：选择浙江地区分离的人感染禽流感病毒H7N9及甲型H1N1流感病毒(2009)进行梯度稀释,分别用两种快速流感病毒检测试剂进行检测,并与荧光PCR检测结果进行比较.rn 结果：SD Bioline免疫层析试剂及Sofia免疫荧光法试剂检测人感染禽流感病毒H7N9的检测下限分别为5.5log10TCID50/mL和4log10TCID50/mL.同一种试剂检测H7N9的灵敏度低于检测甲型H1N1流感病毒(2009)的灵敏度.两种快速试剂检测H7N9及H1N1的灵敏度均低于荧光PCR方法.rn 结论：流感病毒快速试剂可以用于人感染禽流感病毒H7N9的检测,但阴性结果需要用荧光PCR方法进行进一步检测.

摘要： 目的：比较评价流感病毒快速试剂检测人感染禽流感病毒H7N9的效果.rn 方法：选择浙江地区分离的人感染禽流感病毒H7N9及甲型H1N1流感病毒(2009)进行梯度稀释,分别用两种快速流感病毒检测试剂进行检测,并与荧光PCR检测结果进行比较.rn 结果：SD Bioline免疫层析试剂及Sofia免疫荧光法试剂检测人感染禽流感病毒H7N9的检测下限分别为5.5log10TCID50/mL和4log10TCID50/mL.同一种试剂检测H7N9的灵敏度低于检测甲型H1N1流感病毒(2009)的灵敏度.两种快速试剂检测H7N9及H1N1的灵敏度均低于荧光PCR方法.rn 结论：流感病毒快速试剂可以用于人感染禽流感病毒H7N9的检测,但阴性结果需要用荧光PCR方法进行进一步检测.

摘要： 目的：比较评价流感病毒快速试剂检测人感染禽流感病毒H7N9的效果.rn 方法：选择浙江地区分离的人感染禽流感病毒H7N9及甲型H1N1流感病毒(2009)进行梯度稀释,分别用两种快速流感病毒检测试剂进行检测,并与荧光PCR检测结果进行比较.rn 结果：SD Bioline免疫层析试剂及Sofia免疫荧光法试剂检测人感染禽流感病毒H7N9的检测下限分别为5.5log10TCID50/mL和4log10TCID50/mL.同一种试剂检测H7N9的灵敏度低于检测甲型H1N1流感病毒(2009)的灵敏度.两种快速试剂检测H7N9及H1N1的灵敏度均低于荧光PCR方法.rn 结论：流感病毒快速试剂可以用于人感染禽流感病毒H7N9的检测,但阴性结果需要用荧光PCR方法进行进一步检测.

摘要： 一种免疫层析用试验片，其为具备凝集抑制垫、结合垫以及膜的免疫层析用试验片，所述膜具有捕捉目标物质的试验区域，所述凝集抑制垫包含脱盐剂，所述结合垫包含标记剂。

摘要： 本发明提供一种免疫层析分析方法，其中，通过免疫反应使待判定阴性或阳性的第1被检测物质以及掌控与第1被检测物质的比率从而作为阴性或阳性的判定基准的第2被检测物质分别发色，并通过将使两种被检测物质的发色信号变为同一强度的浓度设为第1被检测物质的判定的界限，该免疫层析分析方法不需要针对特定的装置或分析的专业知识，并且不用花费繁杂的劳力和时间。本发明还提供免疫层析分析装置以及免疫层析分析试剂盒。

摘要： 本发明的课题在于提供一种免疫层析分析试剂盒，其中即使是从口腔内采集的含有唾液的血液检体，也能够实现高灵敏度的检测，并且可以在没有感觉到疼痛和压力的情况下进行免疫层析分析，通过以下免疫层析分析试剂盒来解决上述课题：其中，在检体稀释液以及检测部的展开方向上游的至少一者中含有烷基葡糖苷类以及阴离子型表面活性剂。本发明还提供一种免疫层析分析装置以及免疫层析分析方法。

摘要： 本发明涉及一种双抗体夹心免疫竞争法检测布洛芬的量子点免疫层析检测卡及检测方法。所述检测卡包括衬板、检测抗原释放垫、量子点探针释放垫、层析膜和吸水垫；检测抗原释放垫包含由卵清白蛋白和布洛芬偶联而成的检测抗原；量子点探针释放垫包含标记有抗卵清白蛋白抗体的量子点探针；层析膜设有检测线和质控线，检测线固定抗布洛芬抗体，质控线固定卵清白蛋白抗原。检测抗原从释放垫溶入检测体系，与检测抗体和标记抗体形成双抗体夹心免疫复合物，产生荧光检测信号。在质控线的检测参照作用之下，根据检测线上的荧光信号来判断样品中是否含有布洛芬，增加了检测的信号强度和稳定性，提高了检测灵敏度和定量精密度。

摘要： 本发明涉及一种双抗体夹心免疫竞争法检测奥沙普嗪的量子点免疫层析检测卡及检测方法。所述检测卡包括衬板、检测抗原释放垫、量子点探针释放垫、层析膜和吸水垫；检测抗原释放垫包含由卵清白蛋白和奥沙普嗪偶联而成的检测抗原；量子点探针释放垫包含标记有抗卵清白蛋白抗体的量子点探针；层析膜设有检测线和质控线，检测线固定抗奥沙普嗪抗体，质控线固定卵清白蛋白抗原。检测抗原从释放垫溶入检测体系，与检测抗体和标记抗体形成双抗体夹心免疫复合物，产生荧光检测信号。在质控线的检测参照作用之下，根据检测线上的荧光信号来判断样品中是否含有奥沙普嗪，增加了检测的信号强度和稳定性，提高了检测灵敏度和定量精密度。

摘要： 一种免疫层析用试验片，其为具备凝集抑制垫、结合垫以及膜的免疫层析用试验片，所述膜具有捕捉目标物质的试验区域，所述凝集抑制垫包含脱盐剂，所述结合垫包含标记剂。

摘要： 本发明的课题在于提供一种抑制与食品中的除了麦醇溶蛋白以外的其他抗原发生交叉反应、且使特异性提高的用于检测麦醇溶蛋白的免疫层析分析装置。本发明涉及一种免疫层析分析装置，其包含试样添加部、标记物质保持部、具有检测部的层析介质部、以及吸收部，所述标记物质保持部及检测部含有识别α‑麦醇溶蛋白(α‑Gliadin)的抗体。

摘要： 本发明的课题在于提供一种免疫层析分析装置，其中无需繁杂的测定准备以及操作，可以在短测定时间内高效地测定血液、尿等多种检体中所含的各种成分，通过这样的免疫层析分析装置解决上述课题，在所述样本添加部中含有阴离子型表面活性剂，所述免疫层析分析装置用于展开用检体稀释液稀释含有被检测物质的检体而得到的检体含有液。

摘要： 本发明的课题在于提供一种免疫层析分析试剂盒，其中即使是从口腔内采集的含有唾液的血液检体，也能够实现高灵敏度的检测，并且可以在没有感觉到疼痛和压力的情况下进行免疫层析分析，通过以下免疫层析分析试剂盒来解决上述课题：其中，在检体稀释液以及检测部的展开方向上游的至少一者中含有烷基葡糖苷类以及阴离子型表面活性剂。本发明还提供一种免疫层析分析装置以及免疫层析分析方法。

摘要： 本发明提供一种免疫层析分析方法，其中，通过免疫反应使待判定阴性或阳性的第1被检测物质以及掌控与第1被检测物质的比率从而作为阴性或阳性的判定基准的第2被检测物质分别发色，并通过将使两种被检测物质的发色信号变为同一强度的浓度设为第1被检测物质的判定的界限，该免疫层析分析方法不需要针对特定的装置或分析的专业知识，并且不用花费繁杂的劳力和时间。本发明还提供免疫层析分析装置以及免疫层析分析试剂盒。