免疫印迹技术

摘要： 研究神经细胞黏附分子(NCAM)在脑源性神经生长因子(BDNF)对帕金森(PD)模型大鼠受损多巴胺(DA)能神经元中的保护和存活作用。在SD大鼠右侧纹状体内立体定位注射6-羟多巴胺(6-OHDA)制备早期PD模型,随后分为4组:NCAM组(同侧黑质内仅注射anti-NCAM抗体),BDNF组(同侧黑质内注射BDNF),CAM阻断组(同侧黑质内注射anti-NCAM抗体1小时后注射BDNF),对照组(同侧黑质内注射PBS),采用免疫组织化学染色技术和免疫印迹技术,观察各组酪氨酸羟化酶(TH)的表达变化。

摘要： 目的:分析和评估多重微球流式荧光免疫技术(MBFFI)检测抗核抗体谱的结果和临床应用价值.方法:同时用MBFFI和免疫印迹技术检测333例自身免疫病患者、44例其他疾病患者和59例健康者血清的抗核抗体谱,进行结果的一致性检验,并用间接免疫荧光技术检测抗核抗体,比较3种方法的灵敏度、特异度.结果:MBFFI与免疫印迹技术检测所有标本抗核抗体谱一致率为83.26％,Kappa值=0.655;病例组各项目一致率在79.88％至99.40％之间,Kappa值在0.106至0.958之间.对照组各项目一致率在96.61％至100.00％之间,其他疾病组各项目一致率在95.45％至100.00％之间.间接免疫荧光技术诊断自身免疫病的灵敏度最高(P<0.01),MBFFI诊断自身免疫病的特异度最高(P<0.05),MBFFI与间接免疫荧光技术联合检测可提高灵敏度(P<0.01).结论:多重微球流式荧光免疫技术检测抗核抗体谱与免疫印迹技术相比,一致性尚可,特异度更高,可以替代免疫印迹技术成为新一代的抗核抗体确认试验检测方法.

摘要： 目的 研究CSRP1(cysteine and glycine rich protein 1)蛋白在大肠癌组织中的表达情况,并探究其临床意义.方法 CSRP1蛋白的差异表达情况应用色谱及质谱联用技术分析筛选,初筛实验的准确性验证选用免疫印迹试验.结果 分析质谱鉴定相关结果显示,CSRP1蛋白在大肠癌组织中的表达明显低于其在正常组织中的表达,免疫印迹试验结果与质谱分析结果吻合,确保了其准确性.结论 CSRP1蛋白在大肠癌组织中下调表达,其表达情况与肿瘤的发展、调节有密切的关系.

摘要： Objective To study the effect of new generation histone deacetylase inhibitor LBH589 single-drug or combined with the mouse serum which contains the radix echinopsis on multiple myeloma (MM) cell line U266 and their mechanism.Methods The acetylation level of α-tublin which was a substrate of HDAC6 was detected by Western blot.The chemical force between Heat shock protein 90 (HSP90) and its client proteins was detected by immune precipitation (IP).Results The different concentrations of LBH589 single drug (0,20,50 nmol/L),and 50 nmol/L combined with the mouse serum which contained the radix echinopsis (1 g/ml) were able to inhibit the proliferation of U266 cell.With the increase of drug concentration and the extension of time,the acetylation levels of α-tublin and HSP90 increased gradually (at 24 or 48 hours) in a dose dependent (P ＜ 0.05).The inhibition of LBH589 combined with the mouse serum was stronger than that of LBH589 single drug (P ＜ 0.05).Conclusion LBH589 could inhibit the growth of MM cells and their cell cycles,and induce the apoptosis of MM cell line U266.%目的 研究新一代组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂LBH589单药或联合中药禹州漏芦含药血清对人多发性骨髓瘤(MM)细胞株U266诱导凋亡作用及其机制.方法 利用免疫印迹技术(Western blot)分析不同浓度LBH589作用HDAC6特异底物α-微管蛋白乙酰化水平;采用免疫沉淀(IP)法检测不同浓度LBH589作用后热休克蛋白90(HSP90)与其客户蛋白的亲和力.结果 Westernblot分析显示不同浓度LBH589(0、20、50 nmol/L)单药及50 nmol/L与禹州漏芦含药血清(1g/ml)联合均能够抑制U266细胞增殖,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,α-微管蛋白乙酰化水平、HSP90乙酰化的程度逐渐上调,变化呈剂量依赖性(P＜0.05),且LBH589与禹州漏芦含药血清联合组抑制作用较单药组明显(均P＜0.05).结论 LBH589能够抑制MM细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导人MM细胞株U266凋亡.

摘要： nptⅡ编码新霉素磷酸转移酶,是转基因实验中最常用的筛选标记基因之一.本研究中,表达了重组新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)蛋白质,制备了单克隆抗体,建立了用免疫印迹检测转基因水稻中NPTⅡ蛋白质的方法,调查了NPTⅡ蛋白质的表达特征,包括遗传特征、表达时空特征、表达丰度和亚细胞定位等.结果表明,该方法可检测到单粒稻米的0.25％(约0.025 mg)样品中的NPTⅡ蛋白质,NPTⅡ的表达符合显性遗传规律,根据NPTⅡ的表达可对转基因T1代种子进行阴阳性及纯合株系的鉴定,对T1幼苗中NPTⅡ丰度的分析可为纯合单株的鉴定提供参考信息.定量分析表明苗期叶片中NPTⅡ蛋白质的含量约为鲜重的0.08‰.在CaMV-35S启动子驱动下NPTⅡ蛋白质在水稻苗期、成株期的叶片和根部组织中表达量较高,而在分蘖期、孕穗期较低,NPTⅡ在不同时期的根、茎、叶、穗子、花及种子等组织中均有表达,只是在分蘖节、茎节、穗轴和花药等组织中表达量相对较低.此外,NPTⅡ蛋白质的表达主要定位在细胞质中.综上所述,本研究建立了具有应用价值的检测NPTⅡ蛋白质的免疫印记方法并系统揭示了其在水稻中的表达特征.

摘要： 目的 研究侧向旋转致大鼠脑弥漫性轴索损伤后皮层和脑干Homerla蛋白表达规律及其意义. 方法 SD大鼠110只,体重(200±20)g,分为对照组和弥漫性轴索损伤(DAI)组,DAI组应用侧向旋转DAI致伤模型,对照组不予以旋转致伤,其余处理同DAI组,分别在伤后10 min,30 min,1h,6h,12h,24 h,48 h,72 h取大鼠皮层和脑干组织进行Homerla蛋白分子的免疫组织化学和免疫印迹分析检测. 结果 两种检测方法发现皮层Homerla蛋白自伤后30 min起表达,脑干Homerla自伤后10 min就开始表达,均持续至72 h,皮层各时间点Homerla表达均弱于脑干组织,而对照组未见该蛋白阳性表达. 结论 大鼠脑弥漫性轴索损伤后Homerla蛋白的表达在皮层和脑干组织表达程度有显著性差异,提示DAI后主要以脑干损伤较为严重,Homerla蛋白分子参与了神经元损伤后脑保护过程.

摘要： 目的研究侧向旋转致大鼠脑弥漫性轴索损伤后皮层和脑干Homer1a蛋白表达规律及其意义。方法 SD大鼠110只,体重（200±20）g,分为对照组和弥漫性轴索损伤（DAI）组,DAI组应用侧向旋转DAI致伤模型,对照组不予以旋转致伤,其余处理同DAI组,分别在伤后10 min,30 min,1 h,6 h,12 h,24 h,48 h,72 h取大鼠皮层和脑干组织进行Homer1a蛋白分子的免疫组织化学和免疫印迹分析检测。结果两种检测方法发现皮层Homer1a蛋白自伤后30 min起表达,脑干Homer1a自伤后10 min就开始表达,均持续至72 h,皮层各时间点Homer1a表达均弱于脑干组织,而对照组未见该蛋白阳性表达。结论大鼠脑弥漫性轴索损伤后Homer1a蛋白的表达在皮层和脑干组织表达程度有显著性差异,提示DAI后主要以脑干损伤较为严重,Homer1a蛋白分子参与了神经元损伤后脑保护过程。

摘要： 由中国农业科学院兰州兽医研究所刘在新和卢曾军研究员领导的研究团队，建立了口蹄疫感染和免疫鉴别诊断技术体系。该体系包括（1）口蹄疫病毒非结构蛋白BABC抗体检测ELISA试剂盒；（2）口蹄疫病毒非结构蛋白2C3AB抗体检测试纸条；（3）口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC单抗阻断ELISA抗体检测试剂盒；（4）口蹄疫病毒五种非结构蛋白抗体检测免疫印迹技术。

摘要： 目的建立结核分枝杆菌复苏因子抗体（RpfE—Ab）免疫印迹检测方法，并评价其在肺结核诊断中的应用价值。方法以原核表达结核分枝杆菌复苏因子蛋白作为抗原，应用免疫印迹法检测88例确诊肺结核患者血清和100例健康人血清中RpfE—Ab，并将结果与TSPOT-TB、抗结核抗体（LAM-Ab）结果进行比对。结果1：血清结核分枝杆菌复苏因子抗体检测方法在诊断肺结核中的敏感性为82．9％，特异性为92．0％。2：血清结核分枝杆菌复苏因子抗体检测方法在诊断肺结核中与TSPOT-TB、LAM—Ab检测方法之间无差异（χ2=0.92，P〉0．05，χ2=0．02，P〉0．05）。结论血清结核分枝杆菌复苏因子抗体检测可与TSPOT-TB、LAM—Ab同时作为肺结核辅助诊断方法。

摘要： 目的 研究探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的抗原表型特征,评价Hp根除治疗方法的临床疗效.方法 对我院收治的上胃肠疾病患者及许多胃肠外疾病,共800例,采用免疫印迹技术检测上述800例患者的幽门螺杆菌IgG抗体分型.对其中Hp抗体Ⅰ型志愿患者采取无痛胃镜检查以及病理检查,分析胃肠道疾病患者以及胃肠外疾病患者的患病概率与幽门螺杆菌感染的关系.采用二联抗生素法进行Hp根除治疗.结果 检出幽门螺杆菌阳性423例,阳性率为52.88％;其中Ⅰ型220例,占52.01％;Ⅱ型203例,占47.99％;自220例Ⅰ型Hp感染患者中,经评估后及患者意愿,挑选140例行无痛胃镜检查及病理检查,其中:慢性胃病70例,胃溃疡37例,十二指肠溃疡30例,胃癌3例;病理检查:慢性炎症90例,肠化20例,轻度不典型增生27例,胃癌3例.结论 采用免疫印迹技术可以一次性、快速检测到Hp抗体谱,同时对不同的抗体分型的检测特异性强,灵敏度高,有利于临床上对于胃肠道外疾病以及上消化道疾病的诊断.

摘要： 目的:探讨新疆维吾尔族系统性红斑狼疮(SLE)自身抗体与HLA-DQA1等位基因的相关性.方法:采用聚合酶链反应 序列特异性引物(PCR-SSP)技术对44例新疆维吾尔族SLE患者HLA-DQA1基因进行分型,同时采用免疫印迹技术测定患者自身抗体谱.结果:HLA-DQA1* 0302与ds-DNA呈正相关(x2=4.513,p=0.034).结论:新疆维吾尔族系统性红斑狼疮抗ds-DNA的产生可能与DQA1* 0302等位基因相关.

摘要： 目的:构建hERG钾离子通道蛋白(human ether-a-go-go-related gene potassium channel)shRNA表达载体质粒,获得稳定转染干扰质粒的人骨肉瘤细胞系MG-63、SOSP-9607.方法:将4对合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入pGPU6/GFP/Neo表达载体,并测序鉴定.使用脂质体法将重组的质粒转染至MG-63、SOSP-9607,通过G418筛选建立稳定转染的两种细胞系,采用免疫印迹(Western blot)技术检测hERG蛋白的表达.结果:测序结果证实shRNA与载体连接正确,免疫印迹实验证实hERG蛋白表达显著降低.结论:成功构建了hERG shRNA真核表达载体,获得了稳定表达hERGshRNA的人骨肉瘤细胞系MG-63和SOSP-9607.

摘要： 目的:构建hERG钾离子通道蛋白(human ether-a-go-go-related gene potassium channel)shRNA表达载体质粒,获得稳定转染干扰质粒的人骨肉瘤细胞系MG-63、SOSP-9607.方法:将4对合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入pGPU6/GFP/Neo表达载体,并测序鉴定.使用脂质体法将重组的质粒转染至MG-63、SOSP-9607,通过G418筛选建立稳定转染的两种细胞系,采用免疫印迹(Western blot)技术检测hERG蛋白的表达.结果:测序结果证实shRNA与载体连接正确,免疫印迹实验证实hERG蛋白表达显著降低.结论:成功构建了hERG shRNA真核表达载体,获得了稳定表达hERGshRNA的人骨肉瘤细胞系MG-63和SOSP-9607.

摘要： 目的:构建hERG钾离子通道蛋白(human ether-a-go-go-related gene potassium channel)shRNA表达载体质粒,获得稳定转染干扰质粒的人骨肉瘤细胞系MG-63、SOSP-9607.方法:将4对合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入pGPU6/GFP/Neo表达载体,并测序鉴定.使用脂质体法将重组的质粒转染至MG-63、SOSP-9607,通过G418筛选建立稳定转染的两种细胞系,采用免疫印迹(Western blot)技术检测hERG蛋白的表达.结果:测序结果证实shRNA与载体连接正确,免疫印迹实验证实hERG蛋白表达显著降低.结论:成功构建了hERG shRNA真核表达载体,获得了稳定表达hERGshRNA的人骨肉瘤细胞系MG-63和SOSP-9607.

摘要： 目的:构建hERG钾离子通道蛋白(human ether-a-go-go-related gene potassium channel)shRNA表达载体质粒,获得稳定转染干扰质粒的人骨肉瘤细胞系MG-63、SOSP-9607.方法:将4对合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入pGPU6/GFP/Neo表达载体,并测序鉴定.使用脂质体法将重组的质粒转染至MG-63、SOSP-9607,通过G418筛选建立稳定转染的两种细胞系,采用免疫印迹(Western blot)技术检测hERG蛋白的表达.结果:测序结果证实shRNA与载体连接正确,免疫印迹实验证实hERG蛋白表达显著降低.结论:成功构建了hERG shRNA真核表达载体,获得了稳定表达hERGshRNA的人骨肉瘤细胞系MG-63和SOSP-9607.

摘要： 检测自身免疫性疾病抗体的免疫印迹试剂盒及其制备方法，涉及一种检测多种自身免疫性疾病相关抗体的免疫印迹试剂盒，解决目前尚无用于多种自身免疫性疾病体检筛查的免疫印迹产品的技术不足；在所述的硝酸纤维素膜或尼龙膜上含有：分别由dsDNA、Sm/RNP、CCP、SSA、SSB、GAD、ICA、IA-2A、TG、AMA-M2共10种中的至少两种天然或重组抗原包被而成的两条以上平行的检测线，1条高浓度质控带，1条中浓度质控带，及1条低浓度质控带。克服单一自身抗体检测灵敏度和特异性不足、数种疾病相关自身抗体逐一单独检测在操作上的繁琐，大大提高检测效率和结果判断的准确度。

摘要： 本发明涉及抗体检测技术领域，特别涉及一种风疹病毒IgM抗体检测免疫印迹膜条及免疫印迹试剂盒。该膜条的制备方法包括如下步骤：将风疹病毒用抗原稀释液进行稀释，在95～105°C条件下处理4～6min；抗原稀释液的组成为：Tris‑HCl 8vt％～12vt％，SDS 3w/v％～5w/v％，甘油15vt％～25vt％，溴酚蓝0.01w/v％～0.02w/v％，水补足；抗原稀释液不包括还原剂；对抗原进行电泳分离，将风疹病毒蛋白转印至硝酸纤维膜，封闭。本发明将纯化后的风疹病毒经凝胶电泳对目的蛋白进行再次纯化，减少因目的蛋白中杂蛋白引起的非特异性反应，提升检测的灵敏度和特异性。

摘要： 本发明公开了一种检测水稻条纹花叶病毒(RSMV)的基于免疫胶体金的斑点免疫印迹方法及其应用。利用抗水稻条纹花叶病毒单克隆抗体1D4建立成快速灵敏、简单方便、准确高效地检测水稻和传毒介体电光叶蝉体内RSMV的基于免疫胶体金的斑点免疫印迹血清学检测技术，并开发成快速检测试剂盒。该斑点免疫印迹检测技术检测感染RSMV水稻病叶和携带RSMV电光叶蝉的灵敏度分别达到1:40960(w/v,g/mL)和1:5120倍稀释(单头/μL)。此简单快速、灵敏特异、准确高效的RSMV检测技术及其检测试剂盒为水稻条纹花叶病的快速诊断、抗病育种、预测预警及科学防控提供技术和物质支撑。

摘要： 本发明涉及一种检测自身免疫性肾病相关抗体的免疫印迹试剂盒及其制备方法，属于生物医学领域；包括：反应膜条、酶结合物、显色底物、洗涤液、样本稀释液和终止液，所述的反应膜条由载体和固定在载体上的硝酸纤维素膜或尼龙膜所组成，在所述的硝酸纤维素膜或尼龙膜上含有：分别由C1q、MPO、PR3、GBM、Nucleosome、dsDNA、PLA2R和YHSD7A八种抗原中4～8种天然或重组抗原包被而成特定组合的平行的检测线，1条高浓度为30~50μL/mL判断指示带，1条中浓度15~25μL/mL判断指示带，1条低浓度1~10μL/mL判断指示带；本发明克服单一自身抗体检测灵敏度和特异性不足、数种疾病相关自身抗体逐一单独检测在操作上的繁琐，大大提高检测效率和结果判断的准确度。

摘要： 检测自身免疫性疾病抗体的免疫印迹试剂盒及其制备方法，涉及一种检测多种自身免疫性疾病相关抗体的免疫印迹试剂盒，解决目前尚无用于多种自身免疫性疾病体检筛查的免疫印迹产品的技术不足；在所述的硝酸纤维素膜或尼龙膜上含有：分别由dsDNA、Sm/RNP、CCP、SSA、SSB、GAD、ICA、IA-2A、TG、AMA-M2共10种中的至少两种天然或重组抗原包被而成的两条以上平行的检测线，1条高浓度质控带，1条中浓度质控带，及1条低浓度质控带。克服单一自身抗体检测灵敏度和特异性不足、数种疾病相关自身抗体逐一单独检测在操作上的繁琐，大大提高检测效率和结果判断的准确度。

摘要： 本发明提供一种免疫化学和生物化学分析方法，特别适用于婴儿、采血困难和不愿采血者快速检测尿液中人类免疫缺陷病毒-I型(HIV-1)抗体的垂直流免疫印迹法。本发明是通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电转，将HIV-1抗原包被于硝酸纤维素膜(NC膜)上，然后将膜粘合于自制反应槽的底部，并与真空抽滤系统结合构成垂直流免疫印迹法检测方法。该方法使尿液样本在可控时间内垂直通过硝酸纤维素膜，加速抗原抗体反应，增加抗原抗体的结合度，从而提高检测灵敏度。通过本发明可快速检测尿液中的HIV-1抗体，确认HIV-1感染状况。可用于实验室诊断确认、药物治疗效果评价等，适宜基层普及使用，具有较大的推广应用价值。

摘要： 本发明公开了一种免疫印迹用膜条及其制作方法，利用定位工装对衬底进行固定，利用定位工装上的限位槽对待贴附于衬底上的各长条NC膜进行限位，无需另外进行测量，且确保了贴附精度，制备后的膜条上的各抗体线之间相互平行，确保了膜条的检测精度，同时制备流程简单，大大降低了操作人员的操作强度。

摘要： 本实用新型提供一种免疫印迹膜的载持结构及免疫印迹仪。免疫印迹膜的载持结构包括附板和防水胶带，所述附板竖直设置，免疫印迹膜背面靠于所述附板表面，所述防水胶带粘接于免疫印迹膜和所述附板之间。采用本实用新型技术方案，附板给免疫印迹膜提供附着平面，确保在移载过程中，免疫印迹膜的位置保持稳定；直接通过防水胶带来固定免疫印迹膜顶部，方便快捷，提高了实验效率；防水胶带对免疫印迹膜在试剂或清洗液中浮动的规制作用较小，有助于印迹膜与试剂或清洗液充分反应，提高实验结果准确度。

摘要： 本实用新型提供一种蛋白免疫印迹孵育盒及蛋白免疫印迹孵育装置，属于实验器材技术领域，包括盒体，所述盒体具有容纳空间，所述容纳空间被挡板分隔为多个小格；与所述盒体配合的盒盖；以及，至少一块隔板，每块所述隔板沿大致平行于所述盒体底壁的方向可拆卸安装于一个所述小格内，并将所述小格分隔为靠近所述盒体底壁的第一容纳空间以及远离所述盒体底壁的第二容纳空间；所述隔板上设置有连通所述第一容纳空间与第二容纳空间的孔。本实用新型通过在盒体小格内设置隔板，将两张膜隔开，避免了振摇时膜的重叠。成功的用一个格子的液体封闭两张膜，从而大大节省了抗体的使用量且对实验结果没有影响。

摘要： 检测自身免疫性疾病抗体的免疫印迹试剂盒，涉及一种检测多种自身免疫性疾病相关抗体的免疫印迹试剂盒，解决目前尚无用于多种自身免疫性疾病体检筛查的免疫印迹产品的技术不足；在所述的硝酸纤维素膜或尼龙膜上含有：分别由dsDNA、Sm/RNP、CCP、SSA、SSB、GAD、ICA、IA-2A、TG、AMA-M2共10种中的至少两种天然或重组抗原包被而成的两条以上平行的检测线，1条高浓度质控带，1条中浓度质控带，及1条低浓度质控带。克服单一自身抗体检测灵敏度和特异性不足、数种疾病相关自身抗体逐一单独检测在操作上的繁琐，大大提高检测效率和结果判断的准确度。