光棘球海胆

摘要： 海胆在海藻床生态系统结构和功能调控中发挥重要作用。深入理解流速对海胆摄食和生长的影响具有重要的生态学研究价值。研究了长时间(49 d)不同流速(2 cm/s, 10 cm/s和20 cm/s)对光棘球海胆幼胆(Mesocentrotus nudus,壳径:约20 mm)摄食行为、摄食量和生长的影响,以评估不同流速下,海胆摄食行为和生长的差异。实验结果表明,流速对光棘球海胆的存活无显著影响,但显著影响其生长。2 cm/s下海胆的壳径和体重显著大于10和20 cm/s。在实验开始后的第2周和第3周,2 cm/s下海胆的体重和壳径已显著高于20 cm/s。流速显著影响光棘球海胆的摄食量(P<0.001)和觅食行为(20 cm/s,P=0.004),但口器咬合行为未受显著影响(P=0.113)。管足附着时间在流速为10 cm/s和20 cm/s下显著长于其在2 cm/s。同样的,相较于2 cm/s(P=0.02)和10 cm/s(P=0.03),20 cm/s的流速可显著削弱光棘球海胆的翻正行为。综上,高流速(20 cm/s)通过影响海胆管足活动削弱其觅食行为(而非摄食行为),进而降低其摄食量和生长;流速为2—10 cm/s的海区更适合光棘球海胆的野外生存和底播增殖。对了解光棘球海胆的生态习性和优化其底播增殖技术提供了可参考的流速信息。

摘要： 全球近海底层水体低氧现象日趋频繁,严重影响到海洋生态系统的稳定性。为掌握光棘球海胆Mesocentrotus nudus对低氧胁迫的耐受能力,通过室内生态模拟实验,分析3种规格的光棘球海胆,即大规格海胆平均体质量(91.41±3.31)g、中规格(60.79±3.42)g和小规格(4.15±0.18)g,在3个溶解氧(Dissolved Oxygen,DO)浓度水平(0.5 mg/L、2.0 mg/L、3.0 mg/L)胁迫下的行为、存活、半致死时间(Median Lethal Time,LT_(50))以及超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力。结果表明,在DO 0.5 mg/L和DO 2.0 mg/L低氧胁迫下,海胆行为表现异常,低氧初期海胆表现为管足活力下降、吸附力降低,移动能力变弱,同时伴随棘脱落,随着低氧暴露时间延长,海胆各项活动能力进一步减弱,直至死亡;在DO 3.0 mg/L胁迫下,中、大规格海胆无死亡现象。3种规格海胆死亡率随低氧暴露时间延长都有所增加,其中在DO 0.5 mg/L胁迫下,3种规格海胆的最终死亡率都达到100%,但在DO 2.0 mg/L胁迫下,随低氧胁迫时间的延长,3种规格海胆都对低氧胁迫表现出不同程度的适应,很少死亡。3种规格海胆的LT_(50)在DO 0.5 mg/L和DO 2.0 mg/L两种低氧胁迫水平下存在差异,DO 0.5 mg/L胁迫下,大规格海胆的LT_(50)为70.50 h,中规格为34.64 h,小规格为34.02 h;DO 2.0 mg/L胁迫下,中规格海胆的LT_(50)延长至120.88 h,小规格海胆延长至107.15 h。此外,中规格海胆在两种低氧胁迫水平下,体内的超氧化物歧化酶活力均发生了明显变化,说明低氧胁迫已影响到光棘球海胆的抗氧化系统。本研究初次掌握了光棘球海胆在不同环境低氧胁迫下的生存和低氧适应情况,可为低氧海域光棘球海胆种群维持以及海胆养殖业的健康发展提供参考。

摘要： 为鉴定光棘球海胆Mesocentrotus nudus生殖细胞标记基因,通过基因克隆、荧光定量PCR及切片原位杂交等技术分析了光棘球海胆(湿体质量为76.8 g±10.0 g)母源因子(boule)基因的分子特征及动态表达模式.结果表明:光棘球海胆boule cDNA序列全长为1788 bp,其中,3'非编码区为601 bp,5'非编码区为146 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)为1041 bp,共编码346个氨基酸,包含一个保守的RRM结构域;荧光定量PCR结果显示,boule为母源因子,在整个胚胎发育时期均有表达;boule基因在处于生长期(stageⅡ)光棘球海胆的肠、管足、体腔液和性腺中均有表达,其中,boule基因在精巢表达量最高(P<0.05);在卵巢中表达量随卵母细胞的成熟而逐渐升高,在成熟期(stageⅣ)卵巢中达到最高,精巢中表达量仅在生长期(stageⅡ)及成熟前期(stageⅢ)有较高表达;切片原位杂交显示,boule基因在光棘球海胆精巢的生殖细胞中特异表达,卵巢中未检测到阳性细胞信号.研究表明,光棘球海胆boule基因是雄性生殖细胞标记基因,本研究结果可为海胆雄性生殖细胞发育相关研究提供数据资料.

摘要： 为鉴定光棘球海胆Mesocentrotus nudus生殖细胞标记基因,通过基因克隆、荧光定量PCR及切片原位杂交等技术分析了光棘球海胆(湿体质量为76.8 g±10.0 g)母源因子(boule)基因的分子特征及动态表达模式。结果表明:光棘球海胆boule cDNA序列全长为1788 bp,其中,3′非编码区为601 bp,5′非编码区为146 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)为1041 bp,共编码346个氨基酸,包含一个保守的RRM结构域;荧光定量PCR结果显示,boule为母源因子,在整个胚胎发育时期均有表达;boule基因在处于生长期(stageⅡ)光棘球海胆的肠、管足、体腔液和性腺中均有表达,其中,boule基因在精巢表达量最高(P<0.05);在卵巢中表达量随卵母细胞的成熟而逐渐升高,在成熟期(stageⅣ)卵巢中达到最高,精巢中表达量仅在生长期(stageⅡ)及成熟前期(stageⅢ)有较高表达;切片原位杂交显示,boule基因在光棘球海胆精巢的生殖细胞中特异表达,卵巢中未检测到阳性细胞信号。研究表明,光棘球海胆boule基因是雄性生殖细胞标记基因,本研究结果可为海胆雄性生殖细胞发育相关研究提供数据资料。

摘要： 为研究光棘球海胆的体液免疫机理,首先测定在不同反应基质中等量光棘球海胆吞噬细胞对不同处理的酵母细胞的吞噬率,其次比较分析从受调理酵母细胞和非调理酵母细胞以及光棘球海胆无细胞体腔液分离出成分的样品的电泳结果,随后将光棘球海胆无细胞体腔液进行提取分离后得到调理素样分子,最后于等渗缓冲溶液中测定等量光棘球海胆吞噬细胞在不同浓度调理素样分子和不同时间点作用下的吞噬率的变化.试验结果显示,光棘球海胆吞噬细胞分别在等渗缓冲液、经酵母细胞吸附过无细胞体腔液、光棘球海胆无细胞体腔液对非调理的酵母细胞和在等渗缓冲液中对受调理的酵母细胞的吞噬率之比为1.00:1.17:2.00:1.71.在3个样品里,仅有受调理酵母细胞分离出来的成分的电泳结果显示为1个明显条带.等渗缓冲溶液里,分别加入0.5、1.0、1.5 mL经纯化的调理素样分子后,4个时间点吞噬率均高于对照组,当调理素样分子浓度升高,吞噬率亦增加.试验结果表明,在光棘球海胆体腔液里含有某种调理素样分子,分子质量约156 ku,能促进光棘球海胆体腔液中吞噬细胞的吞噬作用.

摘要： 将质量为(25.04±1.75)g的光棘球海胆Mseocentrotus nudus随机分为三组,放入室内用网隔成3个区域的1000L水槽:每天用微量注射器由围口膜处注射10μL雌二醇应用液(雌二醇组)、睾酮应用液(睾酮组)和葵花籽油(对照组).持续注射14d后,收集海胆的体腔液,分离体腔液上清,检测激素含量;收集海胆的消化道和部分性腺组织用酶联免疫吸附技术、组织切片和酶标仪等检测其激素含量、性腺发育及性腺中dmrt1、foxl2和boule的表达水平变化.结果 表明:光棘球海胆精巢中睾酮的含量是卵巢中的2.99倍;卵巢中雌二醇和孕酮的含量显著高于精巢.经雌二醇处理,海胆精巢中dmrt1基因的表达量较对照组显著降低70.8％.经睾酮处理,卵巢中foxl2和boule基因的表达量显著上调,而精巢中dmrt1和boule基因的表达量分别降低72.6％和71.0％.推测,雌二醇和睾酮可能在光棘球海胆性腺发育中发挥重要的调控作用.

摘要： 为分析马粪海胆和光棘球海胆性腺的脂质组成和抗氧化活性,采用核磁共振和气相色谱—质谱技术对2种海胆性腺油脂的脂质成分和脂肪酸组成进行分析,并通过DPPH自由基清除法、羟基自由基清除法和超氧阴离子自由基清除法对其脂质的抗氧化活性进行研究.结果 显示,马粪海胆和光棘球海胆性腺脂质均以甘油三酯和磷脂为主,胆固醇、胆固醇酯和游离脂肪酸含量较低.马粪海胆和光棘球海胆性腺总脂富含C20:4n-6和C20:5n-3,且二者总量分别占脂肪酸含量的35.88％和34.98％;同时2种海胆性腺的中性脂和极性脂的脂肪酸组成存在较大差异,中性脂以C14:0和C16:0等饱和脂肪酸为主,而极性脂以C20:4n-6和C20:5n-3等多不饱和脂肪酸为主.马粪海胆和光棘球海胆性腺脂质对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基均具有较好的清除能力,DPPH自由基IC50分别为2.75和1.98 mg/mL,羟基自由基IC50分别为0.33和0.29 mg/mL,超氧阴离子自由基IC50分别为0.33和0.31 mg/mL.研究表明,马粪海胆和光棘球海胆性腺脂质具有较高的营养价值和抗氧化活性,可作为C20:4n-6、C20:5n-3和磷脂等功能性脂质因子的重要膳食来源.

摘要： 旨在明确光棘球海胆(Mesocentrotus nudus)转化生长因子-β(transforming growth factorβ,TGF-β)基因的序列及结构信息,探明该基因在海水酸化胁迫下的表达模式.利用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)技术首次获得光棘球海胆TGF-β 基因(命名为MnTGF-β)的全长cDNA序列.结果显示(1)光棘球海胆TGF-β 基因的cDNA全长为2299 bp,其中5'非编码区长度为745 bp,3'非编码区长度为261 bp;开放阅读框(ORF)长度为1290 bp,编码430个氨基酸,相对分子量为48.31 kD,理论等电点为5.34.(2)同源性及系统进化分析显示,光棘球海胆MnTGF-β 蛋白序列与紫球海胆(Strongylocentrotus purpuratus)SpTGF-β2蛋白序列高度保守(同源性97.69％).(3)实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测发现,MnTGF-β 基因在光棘球海胆性腺、体腔液、肠、围口膜、管足5种组织中均有表达,其相对表达量从高到低依次为管足>围口膜>肠>体腔液>性腺.(4)与自然海水组(pH 8.06±0.01)相比,当海水△pH为-0.3时,随酸化时间延长,MnTGF-β 基因在光棘球海胆性腺中的相对表达量呈先升高而后极显著降低(P<0.01)再极显著升高(P<0.01)趋势,在管足中的相对表达量呈现极显著上调趋势(P<0.01),而在肠组织中的相对表达量则先极显著降低(P<0.01)而后显著升高(P<0.05);当海水△pH为-0.4和-0.5时,随酸化时间的延长,MnTGF-β 基因在光棘球海胆性腺和管足中的相对表达量呈现先降低后升高的趋势,而在肠组织中的相对表达量则呈现极显著降低趋势(P<0.01).

摘要： A new method of deattachment of juvenile sea urchin Strongylocentrotus nudus by garlic juice was developed in this study.Compared with KCl solution(100 mmol/L,300 mmol/L and 500 mmol/L), vinegar(5%,10% and 15%)and the onion juice(30 g/L,40 g/L and 50 g/L),the survival rates of the sea urchin in all experimental groups of garlic juice(5 g/L,10 g/L and 15 g/L)were found to be 100%, while the survival rates of the sea urchin in KCl solution and onion juice was 85% —95%,and that of vine-gar groups was only 1.74% —32.33%.There were significantly higher deattachment in groups of garlic juice than in the other groups.In terms of the deattachment time,the medium and high concentrations of KCl,the high concentrations of onion and all concentrations of garlic had the shorter deattachment time, ranging from 8.25 s to 16.57 s.Among these groups,the high concentrations of KCl had the shortest de-attachment time,significantly lower than the medium concentrations of garlic,the high concentrations of onion and the low concentrations of garlic,without significant difference in the high concentrations of gar-lic and the medium concentrations of KCl.Furthermore,There was no significant difference in deattach-ment between the medium concentrations of garlic and the high concentrations of garlic.Considering the deattachment effect and the production cost,the garlic juice at 1 kg/100 L concentration is the most appro-priate treatment to deattachment of juvenile sea urchin.%本研究探讨了不同质量浓度大蒜汁溶液(5、10、15 g/L)对光棘球海胆稚海胆的剥离效果.与不同浓度KCl(100、300、500 mmol/L)、洋葱汁(30、40、50 g/L)和食醋溶液(5%、10%、15%)对稚海胆的剥离效果相比,大蒜汁3个质量浓度组剥离后存活率均为100%,而KCl组和洋葱组剥离后存活率为85% ~95%,食醋组的仅为1.74% ~32.33%,大蒜汁组显著高于其他剥离方式的各试验组.分析平均剥离时间,大蒜汁3个试验组与300、500 mmol/L KCl组以及50 g/L洋葱汁组所需剥离时间较短,为8.25~16.57 s,其中500 mmol/L KCl组所需剥离时间最短,显著低于10 g/L大蒜汁组、50 g/L洋葱汁组及5 g/L大蒜汁组,而与15 g/L大蒜汁组、300 mmol/L KCl组差异不显著,10、15 g/L大蒜汁组剥离时间差异不显著.综合考虑剥离效果与生产成本,采用质量浓度为10 g/L的大蒜汁进行光棘球海胆稚海胆剥离最适宜.

摘要： 本文对中间球海胆与光棘球海胆规模化杂交育苗技术进行了论述。文章指出，海胆规模化杂交育苗中,受精率为33﹪,在适宜的水温、光照及饵料等培养条件下,杂交海胆能够正常生长和附着变态,变态时间与母本相近.用0.1mol/l的lKCl诱导5min杂交海胆全部变态.杂交海胆在2～3mm以上剥离进入网箱培育有利于快速生长.稚胆培养温度12～15°C为宜.

摘要： 本发明公开一种用于鉴别紫海胆‑中间球海胆杂交种的PCR引物，核苷酸序列如下：上游引物：5'ttttatctcctccctttttatytct3'；下游引物：5'cctcwaaagtagttaagattgggac3'；鉴别方法依次按照如下步骤进行：提取具有紫海胆外形的待鉴别海胆个体DNA；将提取的DNA稀释至10 ng/μl为模板，以上游引物及下游引物进行PCR扩增，所述PCR反应条件为：94°C5min；94°C30s、50°C30s、72°C2min，35个循环；72°C5min；对PCR扩增产物进行电泳，出条带则为紫海胆‑中间球海胆杂交种。

摘要： 本发明公开了一种重组细粒棘球绦虫Severin蛋白在检测囊型包虫病和细粒棘球绦虫感染试剂盒中的应用；所述试剂盒中的包被抗原为重组细粒棘球绦虫Severin蛋白。本发明首次克隆、表达出细粒棘球蚴重组蛋白rEgSeverin，免疫印迹显示，该蛋白具有良好的反应原性；发现rEgSeverin免疫小鼠后，诱导产生良好的体液和细胞免疫反应，以诱导产生Th2型细胞因子为主。本发明基于rEgSeverin蛋白建立了检测细粒棘球绦虫抗体的间接ELISA方法，制备了ELISA试剂盒，其特异性高于商品化ELISA试剂盒，为家畜细粒棘球绦虫感染及囊型包虫病流行病学调查和诊断提供了一种有效的方法。

摘要： 本发明公开了一种用于微量样本分型检测多房棘球蚴和细粒棘球蚴的一管法巢式实时定量PCR检测试剂盒，设计内外引物、探针和PCR扩增条件的选择达到巢式PCR一管法完成，操作过程中避免开盖产生气溶胶污染，提高检测结果准确性。检测试剂盒内含有PCR内、外引物对序列、MGB分型检测探针序列、用于内质控的人源内参比基因引物对序列及探针序列。本发明可针对患者血清循环DNA等微量样本分型检测出含有多房棘球蚴和/或细粒棘球蚴的样品，准确度高，可准确地分型检测出多房棘球蚴与细粒棘球蚴源特异DNA序列；可以大批量快速分型鉴定多房棘球蚴与细粒棘球蚴；操作简便，可以对样本中微量虫源DNA进行扩增并达到分型检出的水平。

摘要： 本发明公开一种准确区分紫海胆‑中间球海胆和紫海胆上市性腺的方法，是以15种小分子代谢物的相对含量标准区间值为标志区分紫海胆‑中间球海胆杂交种上市性腺与紫海胆上市性腺，首先取待区分的海胆上市性腺并经过前期处理制成样本，通过液相色谱‑质谱联用分析仪对样本进行小分子代谢物检测，进而取样本中15种小分子代谢物的相对含量均位于标准区间值的海胆上市性腺为紫海胆‑中间球海胆杂交种的性腺。可以准确地将紫海胆‑中间球海胆杂交种上市性腺与紫海胆上市性腺进行区分，准确率达到100%，有助于紫海胆‑中间球海胆和紫海胆上市性腺的质量分级以及定价。

摘要： 本发明公开一种用于鉴别紫海胆‑中间球海胆杂交种的PCR引物，核苷酸序列如下：上游引物：5' ttttatctcctccctttttatytct 3'；下游引物：5' cctcwaaagtagttaagattgggac 3'；鉴别方法依次按照如下步骤进行：提取具有紫海胆外形的待鉴别海胆个体DNA；将提取的DNA稀释至10 ng/μl为模板，以上游引物及下游引物进行PCR扩增，所述PCR反应条件为：94°C 5min；94°C 30s、50°C 30s、72°C 2min，35个循环；72°C 5min；对PCR扩增产物进行电泳，出条带则为紫海胆‑中间球海胆杂交种。

摘要： 本发明公开一种中间球海胆与光棘球海胆杂交方法，其特征在于包括如下步骤：取自然成熟中间球海胆及光棘球海胆个体并进行催产；分别取中间球海胆卵子及光棘球海胆精子；将中间球海胆卵子与光棘球海胆精子混合，光棘球海胆精子的数量为自交精子用量的20～40倍，待受精膜举起后，洗卵；孵化中间球海胆(♀)*光棘球海胆(♂)受精卵至产生浮游幼体；培育浮游幼体。合适的受精卵孵化条件以及合适的浮游幼体培育条件，使受精卵胚胎发育正常，海胆幼苗成活率高。整个杂交过程简单易行，同现有技术相比，节省了人工促熟期所用的大量人力物力，节省了时间。用该杂交方法获得的海胆幼苗长成后，杂交优势明显，养殖成活率高，完全符合海胆出口标准，具有很高的经济价值。

摘要： 本发明公开一种中间球海胆与光棘球海胆杂交技术，其特征在于包括如下步骤：取自然成熟中间球海胆及光棘球海胆个体并进行催产；分别取中间球海胆卵子及光棘球海胆精子；将中间球海胆卵子与光棘球海胆精子混合，光棘球海胆精子的数量为自交精子用量的20～40倍，待受精膜举起后，洗卵；孵化中间球海胆(♀)*光棘球海胆(♂)受精卵至产生浮游幼体；培育浮游幼体。合适的受精卵孵化条件以及合适的浮游幼体培育条件，使受精卵胚胎发育正常，海胆幼苗成活率高。整个杂交过程简单易行，同现有技术相比，节省了人工促熟期所用的大量人力物力，节省了时间。用该杂交方法获得的海胆幼苗长成后，杂交优势明显，养殖成活率高，完全符合海胆出口标准，具有很高的经济价值。

摘要： 本发明公开一种活体鉴定光棘球海胆性别用DNA分子标记及鉴定方法，DNA分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，鉴定方法按照如下步骤进行：采集光棘球海胆管足，提取光棘球海胆DNA；以所得到的DNA为模板，进行PCR反应，所述PCR反应上下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示；所述PCR反应体系为模板30~100ng，2XPCRmix10µL，上游引物2µmol，1µL，下游引物2µmol，1µL，灭菌水补至20µl；所述PCR反应程序为98°C变性30s；98°C变性10s、60°C退火15s、72°C延伸1min、进行30个循环；72°C后延伸5min；4°C保存PCR反应产物；对PCR反应产物进行电泳检测，扩增出长度为405bp特异性条带的为雌性个体，否则为雄性个体。

摘要： 本发明公开一种光棘球海胆活体性别鉴定用DNA分子标记及鉴定方法，DNA分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，鉴定方法按照如下步骤进行：采集光棘球海胆管足，提取光棘球海胆DNA；以所得到的DNA为模板，进行PCR反应，所述PCR反应上下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示；所述PCR反应体系为模板30~100ng，2XPCRmix10µL，上游引物2µmol，1µL，下游引物2µmol，1µL，灭菌水补至20µl；所述PCR反应程序为98°C变性30s；98°C变性10s、60°C退火15s、72°C延伸1min、进行30个循环；72°C后延伸5min；4°C保存PCR反应产物；对PCR反应产物进行电泳检测，扩增出长度为362bp特异性条带的为雌性个体，否则为雄性个体。

摘要： 本发明涉及一种光棘球海胆油脂提取物，其中，所述油脂提取物包括饱和脂肪酸20质量％‑30质量％，单不饱和脂肪酸30质量％‑40质量％，多不饱和脂肪酸40质量％‑50质量％。本发明还提供了包括该油脂提取物的药物组合物、应用及其制备方法。该油脂提取物具有优良的抑制肝癌肿瘤细胞HepG2生长并促其发生凋亡的作用。