摘要:
目的:元宝枫叶中含有多种生物活性成分,如黄酮、强心甙、绿原酸、甾体、鞣质、多糖等.酶动力学实验研究表明元宝枫叶对脂肪酸合成酶(FAS)有强抑制作用,该酶是治疗癌症的新的潜在靶部位,抑制FAS有可能成为一条新的化疗途径.通过高效液相色谱(HPLC)分离分析,表明元宝枫叶含有游离的没食子酸和大量的水解没食子酸,从基础研究的角度,可探索元宝枫中的生物活性成分的抑癌作用机理;并且为开发中国广博的天然产物资源提供了新的思路.元宝枫中黄酮类化合物含量较高.研究元宝枫叶中主成分之一的黄酮类化合物是否与抑制FAS存在一定的相关性,可以促进元宝枫叶中黄酮的分离和利用. 方法:采用高效液相色谱法在Diamonsil C18色谱柱 (5 μm, 4.6×250 mm),流动相:甲醇-0.025 mol/L 磷酸水溶液(15:85);流速:1.0 mL/min;检测波长:272 nm;柱温:室温;分离测定了元宝枫叶中游离和水解没食子酸的含量.用HPLC测定元宝枫中游离和水解没食子酸的含量.称取3g元宝枫叶粉末(过40目筛)置于锥形瓶中,加入乙醇溶液,水浴提取,在室温放冷备用.在505nm下测定吸光度,并根据标准曲线测定总黄酮含量.于340nm波长下测定NADPH每分钟吸光度的变化作为酶活性指标--DAi,只加入萃取溶剂的测活结果DA0做为对照.计算快结合抑制程度If:If=(1-DAi/DA0)×100%,作为对FAS的抑制率.测定不同提取液量对FAS的抑制程度,使FAS酶活力被抑制50%时的提取物浓度(IC50)作为衡量快结合抑制能力的指标.比较元宝枫提取物抑制FAS活性的大小.结果:游离没食子酸含量为0.045%;水解没食子酸含量为1.456%.黄酮提取率最高的工艺条件为:35°C温度下,乙醇浓度为70%,固液比为1:30,提取1小时,黄酮的提取率为8.43%.抑制FAS的最佳工艺条件为:55°C温度下,乙醇浓度为50%,固液比为1:30,提取2小时,IC50的值为0.011.结论:游离没食子酸含量较少,水解没食子酸含量大.元宝枫叶提取物中黄酮类物质的含量与对FAS抑制效果之间不是正相关,表明只有一部分黄酮类成分对FAS有抑制作用.而元宝枫叶中含有大量的水解没食子酸,抑制FAS元宝枫活性成分可能与没食子酸和黄酮类成分的结合形式有关.