HBx

摘要： Objective:Hepatitis B virus(HBV)infection is a major public health problem worldwide.However,the regulatory mechanisms underlying HBV replication remain unclear.Cullin 4 B-RING ubiquitin E3 ligase(CRL4 B)is involved in regulating diverse physiological and pathophysiological processes.In our study,we aimed to explain the role of CUL4 B in HBV infection.Methods:Cul4 b transgenic mice or conditional knockout mice,as well as liver cell lines with CUL4 B overexpression or knockdown,were used to assess the role of CUL4 B in HBV replication.Immunoprecipitation assays and immunofluorescence staining were performed to study the interaction between CUL4 B and HBx.Cycloheximide chase assays and in vivo ubiquitination assays were performed to evaluate the half-life and the ubiquitination status of HBx.Results:The hydrodynamics-based hepatitis B model in Cul4 b transgenic or conditional knockout mice indicated that CUL4 B promoted HBV replication(P<0.05).Moreover,the overexpression or knockdown system in human liver cell lines validated that CUL4 B increased HBV replication in an HBx-dependent manner.Importantly,immunoprecipitation assays and immunofluorescence staining showed an interaction between CUL4 B and HBx.Furthermore,CUL4 B upregulated HBx protein levels by inhibiting HBx ubiquitination and proteasomal degradation(P<0.05).Finally,a positive correlation between CUL4 B expression and HBV pg RNA level was observed in liver tissues from HBV-positive patients and HBV transgenic mice.Conclusions:CUL4 B enhances HBV replication by interacting with HBx and disrupting its ubiquitin-dependent proteasomal degradation.CUL4 B may therefore be a potential target for anti-HBV therapy.

摘要： Hepatitis B virus(HBV)infections are a global public health issue.HBV covalently closed circular DNA(cccDNA),the template for the transcription of viral RNAs,is a key factor in the HBV replication cycle.Notably,many host factors involved in HBV cccDNA epigenetic modulation promote the development of hepatocellular carcinoma(HCC).The HBV cccDNA minichromosome is a clinical obstacle that cannot be efficiently eliminated.In this review,we provide an update on the advances in research on HBV cccDNA and further discuss factors affecting the modulation of HBV cccDNA.Hepatitis B virus X protein(HBx)contributes to HBV cccDNA transcription and the development of hepatocarcinogenesis through modulating host epigenetic regulatory factors,thus linking the cccDNA to hepatocarcinogenesis.The measurable serological biomarkers of continued transcription of cccDNA,the effects of anti-HBV drugs on cccDNA,and potential therapeutic strategies targeting cccDNA are discussed in detail.Thus,this review describes new insights into HBV cccDNA mechanisms and therapeutic strategies for cleaning cccDNA,which will benefit patients with liver diseases.

摘要： 原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其中乙肝相关性肝癌(以下简称肝癌)是原发性肝癌中最常见的,严重威胁我国人民的生命健康,对其分子机制的研究有助于预防及治疗肝癌。肝癌发生机制复杂,而HBx在肝癌发生机制中起着至关重要的作用,现主要从HBx导致肝癌的研究新进展方面作一综述。

摘要： 本文基于Hill动力学与Michaelis-Menten方程,建立理论模型研究乙型肝炎病毒(HBx)通过与环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)相互作用促进肝癌(HCC)发生发展的一种物理机制.理论模型考虑HBx-CPAP(中心体P4.1相关蛋白)-AKT(蛋白激酶B)-GSK3(糖原合成酶激酶3)-P53通路信号传导特性.研究发现,CREB对HBx有扩增效应,较高浓度的CREB使得P53抑癌功能下降,并促使炎性因子(NF-κB)呈现出二次增长,为HBx诱发HCC提供了炎性微环境.CREB还会调控AKT呈现二次增长,影响细胞糖原代谢,在一定程度上促使了HCC的发生发展.理论结果符合实验,进一步揭示了HBx通过与CREB相互作用促进HCC发生发展的一种物理机制,可为设计阻断肝炎向肝癌转变通路的治疗方案提供理论依据.

摘要： 目的:研究冬虫夏草(cordyceps sinensis)提取物对乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)诱导的人系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)增殖和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)积聚的作用及潜在机制。方法:用重组表达载体pCMV-HBx稳染人系膜细胞建立HBx过度表达模型,用空载体转染对照组。用MTT法和DNA合成法检测细胞增殖。蛋白质印迹法用于检测磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白和细胞外基质的表达。结果:HBx转染人系膜细胞可诱导系膜细胞增殖、基质积聚。HBx转染的HMCs可增强系膜细胞PI3K/Akt通路的活性,应用冬虫夏草可抑制这种作用。结论:冬虫夏草可通过抑制PI3K/Akt信号通路减弱HBx诱导的人系膜细胞增殖和细胞外基质的产生。

摘要： 目的探讨雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、乙肝病毒基因X开放读框编码的乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X pratein,HBx)在乙肝相关性肝癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学(strept avidin-biotion complex,SABC)法检测69例乙肝相关性肝癌和相应癌旁组织中mTOR、HBx蛋白的表达,并探讨其与乙肝相关性肝癌临床病理特征及预后的关系。结果免疫组化结果显示:mTOR、HBx蛋白在癌组织(57.97%,66.67%)的表达均高于癌旁组织(11.59%,17.39%),差异有统计学意义(χ^(2)分别为32.711、34.381,P0.05)。经Spearman分析,两者表达呈正相关(r=0.644,P=0.000)。随访结果显示:mTOR、HBx蛋白高表达组中位生存时间为13个月,95%置信区间为10.754~15.246,低表达组中位生存时间为27个月,95%置信区间为22.671~31.329,经Log-rank检验分析比较差异有统计学意义(P=0.031)。结论mTOR、HBx蛋白相互作用可能共同参与了乙肝相关性肝癌的发生与发展,且与患者预后有关。

摘要： 目的 探究微小RNA-27a(microRNA-27a,miR-27a)在HBV感染中的作用及分子机制.方法 实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测miR-27a对HBV DNA和HBV RNA的影响.ELISA法检测miR-27a对HBeAg和HBsAg的影响.生物信息学预测miR-27a的靶基因,然后用双荧光素酶报告基因检测、qRT-PCR和western blot检测miR-27a是否能够直接靶向靶基因以及对靶基因mRNA和蛋白表达的影响.最后用qRT-PCR检测HBV蛋白表达对miR-27a的影响.结果 MiR-27a能抑制HBV DNA、HBV RNA、HBeAg和HBsAg等HBV复制和表达的指标.生物信息学预测和双荧光素酶报告基因检测表明miR-27a能够直接靶向HBx,抑制HBx mRNA和蛋白表达.反之,HBx蛋白表达能抑制细胞内miR-27a的表达.结论 MiR-27a通过直接靶向HBx进而抑制HBV的复制和表达,可以作为一种新的治疗HBV感染的潜在靶点.

摘要： 目的 探讨雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、乙肝病毒基因X开放读框编码的乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X pratein,HBx)在乙肝相关性肝癌组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学(strept avidin-biotion complex,SABC)法检测69例乙肝相关性肝癌和相应癌旁组织中mTOR、HBx蛋白的表达,并探讨其与乙肝相关性肝癌临床病理特征及预后的关系.结果 免疫组化结果显示:mTOR、HBx蛋白在癌组织(57.97％,66.67％)的表达均高于癌旁组织(11.59％,17.39％),差异有统计学意义(x2分别为32.711、34.381,P0.05).经Spearman分析,两者表达呈正相关(r=0.644,P=0.000).随访结果显示:mTOR、HBx蛋白高表达组中位生存时间为13个月,95％置信区间为10.754～15.246,低表达组中位生存时间为27个月,95％置信区间为22.671～31.329,经Log-rank检验分析比较差异有统计学意义(P=0.031).结论 mTOR、HBx蛋白相互作用可能共同参与了乙肝相关性肝癌的发生与发展,且与患者预后有关.

摘要： 目的 乙型肝炎病毒(HBV)是原发性肝癌发生发展的重要诱因,乙肝病毒x蛋白(HBx)是HBV引起疾病过程中的关键致病基因.探讨益气化瘀解毒方对HBV相关性肝癌中HBx表达的影响.方法 实验分为空白对照组、益气化瘀解毒方组、重楼皂苷I组、二甲双胍组、益气化瘀解毒方加重楼皂苷I组、益气化瘀解毒方加二甲双胍组,以HBV质粒转染HepG2的受体细胞(HepG 2.2.15)作为观察对象,免疫印迹法(Western blot,WB)、实时荧光定量PCR法检测不同药物组对HepG 2.2.15细胞中HBx基因蛋白和mRNA表达水平的影响;重楼皂苷I作为益气化瘀解毒方中的一部分,并通过分子对接验证重楼皂苷I对肝癌的影响.结果 益气化瘀解毒方组、重楼皂苷1组、二甲双胍组、益气化瘀解毒方加重楼皂苷I组、益气化瘀解毒方加二甲双胍组组均能不同程度下调HBx、mRNA表达(P<0.01);分子对接结果表明重楼皂苷I与HBx有较好的亲和性.结论 益气化瘀解毒方可通过下调关键致癌基因HBx的方式来抑制肝癌的发生,从而对肝癌起到一定的治疗作用,重楼皂苷I可能为该方的主要活性成分.

摘要： The majority of hepatocellular carcinoma(HCC)cases are associated with the hepatitis B virus(HBV)infection.Autophagy related protein 9A(ATG9A)is a transmembrane protein required for autophagosome formation.In order to investigate the role of ATG9A in HBV-associated HCC,ATG9A protein expression was determined in tumor liver tissues and compared with adjacent nontumor tissues from HCC patients with or without HBV infection.In HBVassociated HCC tissues,ATG9A protein level was increased in tumor liver tissues,but not in cases of non-HBV HCC.Our findings suggested that ATG9A might be involved in HBV and cancer cell survival.Therefore,we aimed to analyze the function of ATG9A in HBV replication using RNA interference to evaluate the HBV DNA level using real-time PCR.In the present study,there were no significant differences between shATG9A-transfected HepG2.2.15 cells and the mock control.However,we found that silencing ATG9A affected apoptosis in HepG2.2.15 and HepG2 cell lines.Our results indicated that ATG9A might be partly involved in the survival of HCC.Thus,the inhibition of ATG9A together with other targets might be a potential drug target for HCC treatment.

摘要： 本发明公开了一种Stat3靶向CRISPR/Cas载体、一种Stat3‑HBx双靶向CRISPR/Cas载体以及两种重复靶向靶向HBx的CRISPR/Cas载体，具体涉及一种Stat3靶向单功能质粒、一种Stat3‑HBx双靶向CRISPR/Cas载体、两种重复靶向HBx的CRISPR/Cas载体，以及上述载体的构建方法。发明人通过实验证明了该发明中构建的载体具有针对HBV相关的肝癌细胞具有特异性靶向治疗作用，本发明相应保护上述沉默基因载体、载体的构建方法、载体对Stat3和HBx双沉默策略以及载体在制备HBV慢性感染及抗肝癌相关药物中的应用。

摘要： 本发明涉及纳米药物技术领域，具体涉及一种共载HBx‑siRNA和五味子油的阳离子脂质体纳米粒、制备方法及其用途。本发明建立针对HBx的小干扰RNA，选取具有保肝作用的五味子油，利用阳离子脂质体可以同时装载水溶性物质和脂溶性物质的特性，将两者同时装载于阳离子脂质体内，对其制备工艺进行优化，并对最优工艺下制备出的共载HBx‑siRNA和五味子油的阳离子脂质体纳米粒进行体外抑制乙型肝炎的药效学研究。实验证明，在阳离子脂质体纳米粒中五味子油具有良好的协同HBx‑siRNA抑制乙型肝炎的作用。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体为一种靶向表观基因调控对乙型肝炎病毒分子HBx1C及其应用。本发明根据生物信息学及表观遗传工程和免疫学原理，设计具有针对乙肝病毒（HBV）基因靶向特异性亲和作用、且可以对乙型肝炎病毒基因的DNA进行表观甲基化修饰的全新蛋白分子HBx1C基因，通过腺病毒载体导入细胞内，可高效表达出针对HBV病毒靶向特异的蛋白分子，并可对病毒基因产生甲基化化学修饰。体内外实验证实具有高效抑制HBV表面抗原表达的功能，达到抗乙肝病毒的治疗效果，可用于制备表观遗传工程治疗乙型肝炎的药物，具有广泛的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种Stat3靶向CRISPR/Cas载体、一种Stat3‑HBx双靶向CRISPR/Cas载体以及两种重复靶向靶向HBx的CRISPR/Cas载体，具体涉及一种Stat3靶向单功能质粒、一种Stat3‑HBx双靶向CRISPR/Cas载体、两种重复靶向HBx的CRISPR/Cas载体，以及上述载体的构建方法。发明人通过实验证明了该发明中构建的载体具有针对HBV相关的肝癌细胞具有特异性靶向治疗作用，本发明相应保护上述沉默基因载体、载体的构建方法、载体对Stat3和HBx双沉默策略以及载体在制备HBV慢性感染及抗肝癌相关药物中的应用。

摘要： 本发明提出了一种靶向敲除HBx蛋白的pCMVHBV‑HBx(‑)质粒以及质粒的构建方法，构建方法步骤以下：以pCMVHBV质粒为模板，设计HBx的CDS突变型引物进行PCR扩增，扩增产物经凝胶回收，孵育，大肠杆菌转化，测序验证得到pCMVHBV‑HBx(‑)质粒。本发明的pCMVHBV‑HBx(‑)质粒可以靶向敲除HBx蛋白，显著抑制pgRNA和cccDNA的形成。

摘要： 本发明涉及纳米药物技术领域，具体涉及一种共载HBx‑siRNA和五味子油的阳离子脂质体纳米粒、制备方法及其用途。本发明建立针对HBx的小干扰RNA，选取具有保肝作用的五味子油，利用阳离子脂质体可以同时装载水溶性物质和脂溶性物质的特性，将两者同时装载于阳离子脂质体内，对其制备工艺进行优化，并对最优工艺下制备出的共载HBx‑siRNA和五味子油的阳离子脂质体纳米粒进行体外抑制乙型肝炎的药效学研究。实验证明，在阳离子脂质体纳米粒中五味子油具有良好的协同HBx‑siRNA抑制乙型肝炎的作用。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体为一种乙型肝炎病毒HBV来源HBx蛋白包涵体的可溶化和纯化方法。该制备方法包括以下步骤：使用重组表达系统表达HBx；收集含有重组表达的HBx蛋白的细胞，在冷却条件下使用裂解缓冲液破细胞，收集含有HBx蛋白包涵体的部分；在上述获得的含有HBx蛋白包涵体的部分中，加入溶解缓冲液重悬，变性；对上述产物复性并去除核酸，纯化，获得HBx蛋白；上述步骤在小于等于10°C的环境条件下完成。使用本发明的方法可得到稳定均一的单体HBx样品，浓度可达到15mg/ml。该蛋白样品可以作为科学研究试剂，利用该蛋白样品还可以制备HBx的单克隆抗体。

摘要： 本发明提供一种双香豆素在制备HBx蛋白稳定性抑制剂中的用途。申请人通过实验发现利用HBx蛋白稳定性抑制剂，特别是双香豆素，可以有效的降低HBx的稳定性，进而抑制HBV病毒的复制，达到治疗乙肝的目的，为乙肝的治疗提供了新的路径，对人类的健康事业具有十分积极的意义。

摘要： 本发明公开了一种检测HBV基因型和/或X区突变的方法、试剂盒，HBx的CDS标准序列、引物及应用。选取测序序列中间HBx的CDS与10种HBx的CDS标准序列进行同源性分析及比对，得出待检HBV基因型和/或X区突变的结果；进一步还能通过测序峰图中套峰情况判断单一基因型与混合基因型，若无套峰或数目小于10个，则判定为单一基因型；若套峰数目≥10个，则判定为混合基因型。本发明提供了一套便捷、准确性高的同时检测10种HBV基因型及X区突变类型检测的方案，可以为HBV感染者疾病进展风险评估、抗病毒人群的筛选、抗病毒方式选择及疗效预测提供参考依据。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体为一种HBV中HBx蛋白核心区段HBxΔNΔC的纯化方法和HBxΔNΔC单克隆抗体。本发明通过改变原有纯化方法中各种缓冲液的配方和纯化工艺，得到有活性的、稳定的、均一的、高纯度的、单体的HBxΔNΔC样品，便于进行标准化、大规模的生产和制备；利用得到的HBxΔNΔC进一步制备得到鼠源HBxΔNΔC单克隆抗体和可稳定表达鼠源HBxΔNΔC单抗的杂交瘤细胞株。本发明方法得到的HBxΔNΔC以及HBxΔNΔC单抗可作为科学研究试剂，鼠源HBxΔNΔC单抗还可作为乙型肝炎病毒HBV感染疾病的检测试剂，将鼠源HBxΔNΔC单抗进行人源化可得到人源化的HBxΔNΔC单抗，可作为科学研究试剂、HBV感染疾病的检测试剂和辅助治疗制剂。