保护性抗原

摘要： 细菌产物可作用于神经元而改变其信号传导和功能。该研究发现背根神经节(DRG)感觉神经元富含ANTXR2—一种炭疽毒素的高亲和力受体。炭疽毒素由可与NATXR2结合的保护性抗原(PA)、以及水肿因子(EF)和致死因子(LF)组成。小鼠鞘内注射水肿毒素(ET=PA^(+)EF)作用于DRG神经元而产生镇痛效应。ET可抑制机械感觉和热感觉,以及福尔马林、角叉菜胶或神经损伤诱发的痛敏,其镇痛作用依赖于Na_(v)1.8^(+)或Advillin^(+)神经元上表达的ANTXR2受体。ET可调控小鼠感觉神经元和人源多能干细胞感觉神经元内的蛋白激酶A(PKA)通路,并减弱脊神经传导。炭疽毒素经进一步编辑,使其可携带包括肉毒毒素等外源蛋白物质进入DRG神经元而产生镇痛作用。该研究主要发现了细菌毒素和伤害感受器之间的相互作用,有助于开发镇痛新技术。

摘要： 为提高支气管败血波氏菌保护性抗原BcfA重组蛋白的表达量和可溶性,对编码BcfA N端373位氨基酸残基之后的BcfA基因碱基序列进行了克隆和表达,截短后的BcfA表达量提高了10倍,且主要为可溶性表达.Western blot结果显示,截短BcfA表达后的重组蛋白与支气管败血波氏菌感染康复血清反应依然明显.免疫保护力试验结果表明截短BcfA表达的重组蛋白依然对支气管败血波氏菌表现出良好的免疫保护作用.

摘要： 本研究旨在评估巴氏杆菌糖酵解酶全部9个成员作为抗原对巴氏杆菌的免疫保护效应.通过PCR扩增出多杀性巴氏杆菌C51-17株糖酵解酶的基因并将其连接到pET-28a(+)质粒上.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)工程菌后进行过夜诱导表达,收集菌体,超声破碎后取上清,纯化出巴氏杆菌糖酵解酶的重组蛋白.将巴氏杆菌糖酵解酶进行SDS-PAGE后转入PVDF膜上,孵育C51-17株感染康复血清,孵育二抗后进行ECL显色.将糖酵解酶免疫C57BL/6小鼠,待免疫组均产生高水平特异性抗体后使用C51-17株攻毒,比较各组存活率.测序结果显示,本研究成功将巴氏杆菌糖酵解酶全部9个成员的基因克隆到pET-28a(+)质粒上,经诱导表达和纯化成功获得了巴氏杆菌糖酵解酶的重组蛋白.Western blotting结果显示,磷酸葡萄糖异构酶(PGI)、丙糖磷酸异构酶(TPI)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GPD)、磷酸甘油激酶(PGK)、丙酮酸激酶(PYK)能与巴氏杆菌C51-17株感染康复血清反应.免疫保护力试验显示,PGI、醛缩酶(ALD)、GPD、PGK、磷酸甘油酸变位酶(PGM)、烯醇化酶(ENO)具有一定的免疫保护作用.本研究结果表明,巴氏杆菌糖酵解酶部分成员具有一定程度的免疫保护作用,为巴氏杆菌病防控研究提供了新的依据.

摘要： 本研究使用CRISPR/Cas9与HDR结合的技术,以疫苗株Bartha-K61和变异株JS-2012-ΔgE/gI为骨架,成功构建了gB基因互换的重组病毒BJB和JBJ、gC基因互换的重组病毒Bar-JSgC和JS-BargC、gD基因互换的重组病毒Bar-JSgD和JS-BargD.基因替换的重组病毒与其亲本病毒的体外生物学特性较为相似.其中,与亲本毒株JS-2012-ΔgE/gI相比,JS-BargC在PK-15细胞上的复制能力显著降低.小鼠免疫保护试验证明了gB替换能够显著改变Bartha-K61和JS-2012-ΔgE/gI的免疫原性,提示疫苗株免疫对变异株不保护现象与gB变异密切相关;gC和gD的变异在一定程度上改变了Bartha-K61的免疫原性.本研究为揭示PRV毒株间变异和免疫逃避机制提供了理论基础.

摘要： 为预测并鉴定猪丹毒丝菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)分子线性B细胞表位,首先通过多序列比分析已经全基因组测序的10株菌株的GAPDH一级结构保守性;然后使用在线软件Bepipred-2.0预测猪丹毒丝菌GAPDH线性B细胞表位,接下来通过人工化学合方式合成GAPDH表位对应的多肽;最后使用间接ELISA法检测这些多肽与猪丹毒丝菌GAPDH高免血清之间的反应.研究发现已经完成全基因组测序的10株菌株的GAPDH一级结构高度保守.通过软件预测,找到了猪丹毒丝菌GAPDH的3个潜在的表位.ELISA检测结果表明74 VLSERDPKNLPWKELGV90和178 HAYTNDQNTLDGPHAKGDLRRGRAAAQSIIPNSTGA213与GAPDH高免血清反应明显,是猪丹毒丝菌GAPDH的表位.成功预测并鉴定到2个猪丹毒丝菌的抗原表位,这些表位将为以后基于猪丹毒丝菌GAPDH表位的诊断、疫苗设计及致病机制研究提供技术基础.

摘要： 首先通过多序列比对分析不同血清型菌株GAPDH的一级结构保守性,然后使用在线软件Bepipred-2.0预测巴氏杆菌GAPDH线性B细胞表位,并通过人工化学合方式合成GAPDH表位对应的多肽.最后使用间接ELISA法检测这些多肽与巴氏杆菌GAPDH高免血清之间的反应,确认预测结果.研究发现,不同血清型菌株的GAPDH一级结构高度保守,只有D型菌株HN06发生A288T突变.本次试验预测到巴氏杆菌GAPDH的3个表位,ELISA检测结果表明177HATTATQKTVDGPSAKDWRGGRGAAQNIIPSSTGA211与GAPDH高免血清反应明显,是巴氏杆菌GAPDH的表位.本研究鉴定到了巴氏杆菌GAPDH的1个线性B细胞表位,这些表位将为以后基于巴氏杆菌GAPDH表位的诊断、疫苗设计及感染与免疫机制研究提供技术基础.

摘要： 过去一年以来,非洲猪瘟已经被人所熟知,尽管它不会直接传染人,但会导致家猪出现极高的发病率和死亡率,甚至带来猪肉市场的波动,造成巨大的经济损失。破解非洲猪瘟病毒“真相”,研发疫苗和防疫手段迫在眉睫。北京时间今天凌晨2时,中国科学院生物物理研究所饶子和/王祥喜团队和哈尔滨兽医研究所步志高团队在国际学术期刊《科学》杂志上发表了学术论文,首次解析了非洲猪瘟病毒全颗粒的三维结构,新鉴定出非洲猪瘟病毒多种结构蛋白,揭示了非洲猪瘟病毒多种潜在的保护性抗原和关键抗原表位信息,提出了非洲猪瘟病毒可能的组装机制,为开发效果佳、安全性高的新型非洲猪瘟疫苗奠定了坚实基础。

摘要： 布鲁氏菌是一种胞内寄生的革兰氏阴性球杆菌,具有多个种型,它所引起的布鲁氏病是一种人畜共患传染病.近年来,我国的布鲁氏病疫情非常严峻,感染人数迅速攀升,带来较大危害.疫苗是防控布鲁氏病的有效手段.目前,兽用布鲁氏菌疫苗已获得广泛使用,在控制布鲁氏病疫情方面起到重要作用.而人用布鲁氏菌疫苗研制较为困难,国外尚未有疫苗上市,我国唯一批准人用的布鲁氏菌疫苗为减毒活疫苗104M株.人用布鲁氏菌疫苗研制困难的主要原因,可能在于布鲁氏菌存在多个种型,且保护性抗原谱复杂,单一抗原很难起到完全保护作用.因此,寻找新的保护性抗原是发展新型布鲁氏菌疫苗的关键科学问题.

摘要： 副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPS)是革拉瑟氏病(Glasser's disease)的病原体,该病以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征,对养猪业危害严重并造成巨大的经济损失.HPS的主要毒力因子以及保护性抗原目前还不是很清楚,这大大妨碍了高效疫苗的研制和该病的免疫防制.一般来说,病原细菌的主要毒力因子和保护性抗原往往是其分泌到菌细胞外的毒素和一些酶类,以及位于细菌表面的外膜蛋白等.本研究利用免疫蛋白质组学(Immune proteomics)技术对HPS分泌组中的保护性抗原进行了筛选和鉴定.一共鉴定到了6种具有良好反应活性的蛋白，分别是亚铁血红素结合蛋白HbpA、过氧化氢酶Catalase、寡肽透酶OppA、寡肽胞周结合蛋白OppA2、外膜蛋白P2以及参与Fe3+和ATP结合转运的AfuA蛋白。以上6种蛋白经原核表达载体pET-28a(+)克隆后都得到了良好表达，纯化的6种重组蛋白经western blot及ELISA检测验证，均具有良好的反应活性;6种重组蛋白免疫小鼠后可以刺激机体产生较高滴度的抗体，对HPS血清5型强毒株Nagasaki 5倍LDP剂量菌的攻击能够提供良好的保护力，保护率均介于50~80%之间。结果表明，本研究筛选和鉴定到的这6种蛋白可以作为亚单位疫苗的候选抗原。

摘要： 本研究通过百日咳杆菌黏附素(PRN)基因的分段克隆表达及其在BALB/c小鼠的主动和被动免疫保护试验筛选PRN中的保护性抗原肽。利用大肠杆菌进行PRN的完整蛋白、N端和C端多肽及其RJ和RII区域多肽(双拷贝)的表达，命名为GST-PRN、GST-PN、GST-PC，GST-2PRJ和GST-2PRII通过SDS-PAGE分析，发现经大肠杆菌BL21表达的各重组蛋白分子量分别为96、66、57、50和51kDa，是PRN及其各片段与GST的融合蛋白。 经Bio-Rad Quantity One program分析，各重组蛋白和GST载体蛋白的表达量分别占菌体总蛋白的61.4%、69.2%、59.3%、44.7%、61.3%和32.8%，提取后的纯度分别为92.4%、95.2%、94.4%、88.3%、84.7%和91.5%。Western blot检测证实5种表达产物均具有良好的反应原性。在主动免疫保护试验中，5种表达产物均能诱导小鼠产生较高的PRN抗体水平;当使用3 LD50的支气管败血波氏杆菌(Bb)强毒株HH0809进行鼻腔攻击后，GST-2PRI的保护率为66.7%(6/9)，其余4者的保护率均为100%(9/9);当使用10 LD50的HH0809攻击时，其保护率分别为77.8%(7/9)、33.3%(3/9)，66.7%(6/9)，10%(1/10)和60%(6/10)。在被动免疫保护试验中，当使用10 LD50的HH0809进行腹腔攻击时，GST-2PI抗血清对小鼠的保护率为20%(2/10)，其余4者的保护率均为100%(10/10);但经天然PRN吸附后的5种兔抗血清均无任何保护力(0/5)。本研究表明PRN的N端和C端表达多肽均具有较强的针对Bb的保护力，且C端强于N端;而C端RII区域的保护力也显著强于N端RI区域。

摘要： 目的：利用基因重组技术获取炭疽杆菌保护性抗原(PA)。rn 方法：将炭疽杆菌保护性抗原编码基因pag与pET载体连接构建重组质粒，转化大肠杆菌DE3，诱导表达炭疽杆菌保护性抗原，并经亲和层析及凝胶过滤纯化此抗原。rn 结果：成功构建了重组菌株，纯化后PA纯度达90％，且经检测纯化产物具有天然PA的生物学活性。rn 结论：从大肠杆菌中纯化PA较以往从炭疽杆菌中获取PA简便易行。

摘要： 幽门螺杆菌感染在全世界人群中广泛存在，能引起多种胃部疾病，包括胃癌。尽管抗生素治疗已经应用在幽门螺杆菌感染的相关疾病中，但是人们仍然认为疫苗免疫是预防和治疗幽门螺杆菌感染的重要途径。有效的幽门螺杆菌疫苗对于世界范围内的公共卫生安全有着重要意义。本文将对幽门螺杆菌疫苗在保护性抗原、佐剂、动物模型、免疫机制等方面的研究进展进行一下综述。

摘要： 本文旨在揭示长角血蜱保护性抗原4D8的免疫原性。根据GenBank上登录蜱的4D8基因序列设计引物，用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因，将其连入pGEM(R)-T Easy载体，构建重组克隆载体pGEM(R)-T Easy—HL4D8.核苷酸测序,分析表明，克隆的长角血蜱4D8基因与青海血蜱同源性为90％、与肩突硬蜱同源性为8 1％。将此片段亚克隆到原核表达载体pGEX-4T.1，构建重组原核表达载体pGEX-4 T-1-HL4D8，经表达的重组蛋白,通过Western-blotting试验鉴定该重组蛋白的生物学活性。结果显示，该重组蛋白是分子质量约为41ku的融合蛋白，且表达产物能被兔抗长角血蜱全蜱蛋白阳性血清所识别。

摘要： 产气荚膜梭菌病是由产气荚膜梭菌引起的一种重要的人兽共患传染病，可导致山羊、绵羊等动物的肠毒血症或坏死性肠炎，D型产气荚膜梭菌所产生的α和ε毒素是引起动物上述病理变化和死亡的重要因素。虽然福尔马林灭活的毒素疫苗能使动物产生保护性抗体，但是，灭活苗潜在的安全性原因使其在应用上受到限制。因此，本文重点对基因突变了的α和ε的保护性抗原研究进展和现状作详细的综述，同时对构建α-ε融合基因菌株作现实分析和前景展望，为进一步研制预防羊出血症的α-ε双价基因工程疫苗奠定基础。

摘要： DNA疫苗作为一种新型的疫苗，由于其具有强效的激活CTL功能及免于接触活体致病微生物等诸多优点，已成为新世纪疫苗研制的一个热点。但是，其还存在在体内保护性抗原的表达量不够高，激发抗体能力还有待改善等问题，这使得DNA疫苗在临床上的普遍应用受到一定阻碍。鉴于此，研究人员对DNA疫苗进行了多种优化。本文从载体的选用，序列的优化，共表达免疫增强分子，选取有效导入途径等多个方面对DNA疫苗的设计进行了综述。

摘要： 鼠疫菌F1抗原和V抗原是两个主要的抗鼠疫保护性抗原。通过氢氧化铝佐剂吸附15μgF1、15μgrV、15μgF1+15μgrV抗原，分别制成鼠疫单组分疫苗和双组分疫苗。采用2剂(0,2周)皮下接种途径，分别免疫NIH小鼠和豚鼠，以皮上划痕人用鼠疫活疫苗1剂免疫作为对照。免疫6周后，采用间接ELISA法检测小鼠血清IgG滴度，与此同时，使用强毒鼠疫菌141株对豚鼠进行皮下攻击，以观察疫苗效力。小鼠血清抗体检测结果表明，鼠疫组分疫苗组血清F1抗体或/和rV抗体均高于鼠疫活疫苗组。豚鼠攻击试验结果显示，F1+rV组的存活率可达到90％(9/10)，而F1组和rV组分别为50％(5/10)和20％(2/10)。结论F1+rV鼠疫组分疫苗是安全有效的抗鼠疫疫苗，而单组分F1或rV鼠疫疫苗不能提供有效的抗鼠疫菌攻击保护。

摘要： 本文基于反向疫苗学原理，系统地开展了猪链球菌2型细胞壁相关蛋白的免疫蛋白质组学研究，成功鉴定了34种免疫原性蛋白，并从中筛选、鉴定了3种新型保护性抗原，新型保护性抗原均可诱导高水平的Th1和Th2型免疫应答，诱导高水平的调理吞噬抗体。其对发展新型疫苗和诊断抗原具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种流产嗜性衣原体MOMPa和MIPa和鹦鹉热衣原体MOMPp和MIPp编码基因共表达载体及其构建方法和表达方法，载体分别为在同一宿主菌中表达的pETDuet‑1、pRSFDuet‑1，载体上分别连接有流产嗜性衣原体MOMPa和MIPa和鹦鹉热嗜性衣原体MOMPp和MIPp四个编码基因。在此基础上本发明还公开了所述共表达载体的构建方法和表达方法。

摘要： 本发明提供了一种传染性法氏囊病病毒(IBDV)主要宿主保护性抗原(VP2)基因以及以家蚕为生物反应器生产传染性法氏囊病病毒主要宿主保护性抗原的方法，及基因工程注射疫苗和口服疫苗。本发明方法能够大规模、低成本生产传染性法氏囊病病毒(IBDV)主要宿主保护性抗原(VP2)蛋白。本发明疫苗价格低廉、使用简便且有效。

摘要： 本发明公开了一种特异性识别炭疽保护性抗原PA83的含化学修饰碱基的单链DNA适配体及其应用。本发明以炭疽保护性抗原(PA83)为靶标，利用含化学修饰核苷酸的核酸文库，以磁珠法SELEX筛选出高亲和力适配体AP5，该适配体可在多种干扰蛋白的环境下，特异性识别PA83蛋白；可以将其应用于基于表面等离子共振技术的适配体生物传感器和荧光偏振技术，用于检测PA83蛋白，从而检测炭疽芽孢杆菌，该适配体具备应用于构建炭疽芽孢杆菌保护性抗原新型检测技术的潜力。

摘要： 本发明公开了一种胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性抗原蛋白APJL_1380及其应用。本发明胸膜肺炎放线杆菌免疫保护性抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该免疫保护性抗原蛋白由582个氨基酸组成，其成熟多肽部分为25‑582位氨基酸。编码该免疫保护性抗原蛋白的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.2所示。本发明的免疫保护性抗原蛋白具有很好的免疫原性和免疫保护作用强，其具有制备用于检测胸膜肺炎放线杆菌抗体的试剂盒的应用、制备猪胸膜肺炎亚单位疫苗的应用、制备用于预防由胸膜肺炎放线杆菌引起的疾病的药物的应用。本发明为制备猪胸膜肺炎亚单位疫苗提供了新的材料，对猪胸膜肺炎的防制具有重要意义。

摘要： 本发明涉及包括携带炭疽保护性抗原的一种或数种表位的一种或数种多肽的重组融合蛋白，所述的表位多肽以单表位或组合在一起的多个表位的形式插入到乙肝核心抗原(HBcAg)蛋白或其片段的相同或不同的许可位点，形成了能够刺激机体对炭疽感染产生多种中和抗体的重组融合蛋白，建立了利用载体蛋白分析评价抗原表位的方法，初步评价了各种融合蛋白的免疫原性和保护性，为现有炭疽疫苗的使用和发展表位疫苗等新型疫苗提供依据。本发明还涉及编码相同多肽的多核苷酸，及本发明中重组融合蛋白的制备方法及其在制备用于预防和/或治疗炭疽感染制剂和/或药物中的应用。

摘要： 本发明公开了一种流产嗜性衣原体和鹦鹉热衣原体保护性抗原MOMP和MIP共表达载体及其构建方法和表达方法，利用分子克隆技术分别将流产嗜性衣原体的主要外膜蛋白(MOMPa)和巨噬细胞感染增强因子(MIPa)、鹦鹉热嗜性衣原体的主要外膜蛋白(MOMPp)和巨噬细胞感染增强因子(MIPp)编码基因分别与双表达载体pETDuet-1、pRSFDuet-1连接，构建共表达载体。本发明提供的共表达载体同时携带流产嗜性衣原体和鹦鹉热嗜性衣原体MOMP和MIP四个蛋白基因，并能够在同一宿主菌中表达，可以用于制备多价衣原体基因工程亚单位疫苗，防控多血清型的动物传染病，有利于提高我国动物衣原体病的防治技术水平，保证家畜养殖业健康发展、提高农牧民收入、保证公共卫生和畜产品安全。

摘要： 本发明涉及免疫学技术领域，尤其涉及一种猪产毒多杀性巴氏杆菌的保护性抗原蛋白及其应用、疫苗。该保护性抗原蛋白为PMT蛋白N端第1～520的多肽片段。实验表明，该保护性抗原蛋白具有较高的免疫原性，能有效预防和/或治疗猪萎缩性鼻炎。本发明还提供了表达所述抗原蛋白的大肠杆菌表达系统PET‑PMT‑N菌株，表达并纯化可获得95％可溶蛋白，免去了包涵体蛋白纯化及复性的难题，PMT‑N可纯化得到的目的蛋白产量提高至0.4‑0.8mg/ml，大大提高了生产产能，且疫苗免疫效果好、安全性高，制备过程简单，无需灭活，操作简单，利于生产放大。

摘要： 本发明涉及一种羊传染性脓疱病毒保护性抗原B2L，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明还提供了上述羊传染性脓疱病毒保护性抗原B2L的编码基因和关键性氨基酸构成以及应用。本发明获取了羊传染性脓疱病毒保护性抗原B2L的详细结构特征，对B2L蛋白的关键性氨基酸进行分析，将有助于今后开发羊口疮基因工程疫苗。

摘要： 本发明提供了一种传染性法氏囊病病毒(IBDV)主要宿主保护性抗原(VP2)基因以及以家蚕为生物反应器生产传染性法氏囊病病毒主要宿主保护性抗原的方法,及基因工程注射疫苗和口服疫苗。本发明方法能够大规模、低成本生产传染性法氏囊病病毒(IBDV)主要宿主保护性抗原(VP2)蛋白。本发明疫苗价格低廉、使用简便且有效。

摘要： 本发明公开了一种炭疽保护性抗原的亲和多肽的筛选方法，包括理论计算部分和实验验证部分，所述理论计算部分包括构建模板多肽、准备蛋白结构、实施分子对接、确定关键位点、选择突变位点、建立虚拟肽库和筛选亲和多肽；所述试验验证部分包括合成、提纯和鉴定炭疽保护性抗原的亲和多肽和测定亲和多肽与炭疽保护性抗原之间的亲和力。本发明的理论计算部分，采用计算机辅助设计软件，结合炭疽保护性抗原蛋白晶体结构特点，通过分子对接确定高价值突变氨基酸建立虚拟肽库，设计炭疽保护性抗原的亲和多肽。实验验证部分，选取理论亲和力提升较高的多肽序列，经合成、提纯和鉴定后，测定其与炭疽保护性抗原的亲和力。