供体细胞

摘要： 体细胞核移植(somaticcell nucleartransfer,SCNT)是一种将已分化的细胞重编程恢复其全能性,进而生产与供体细胞基因型完全相同后代的无性繁殖技术。包括收集并成熟卵母细胞,供体细胞核处理,重构胚的体外激活,胚胎的培养和移植等过程。猪的SCNT技术的建立在农业和医学有广泛的应用。

摘要： 同一来源的供体细胞之间存在异质性.许多研究已经表明体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)效率与供体细胞有关.然而,鲜有在单细胞水平分析供体细胞异质性对核移植效率的潜在影响.本研究利用单细胞转录组测序技术对同一来源且随机挑选的52个猪耳组织成纤维细胞进行测序分析.结果表明有48个单细胞的基因表达模式相似,4个单细胞(编号为D11_1、D12_1、DW61_2和DW99_2)的基因表达模式与其他单细胞存在较大的差异,并且不存在基因表达模式完全相同的两个单细胞.以基因表达模式相似的48个单细胞作为对照,进一步分析了单细胞D11_1、D12_1、DW61_2和DW99_2的差异基因表达模式:首先利用R语言筛选4个单细胞的差异表达基因,并对前50差异表达基因进行汇总;然后对差异表达基因进行GO富集分析和KEGG通路分析.富集分析发现差异表达基因的主要分子功能包括能量代谢、蛋白质代谢和细胞对刺激的反应等;主要通路包括KEGG中富集的与细胞周期、细胞代谢、DNA复制相关的通路.根据以上研究结果并结合SCNT研究进展讨论了4个单细胞的差异基因表达模式对核移植胚胎发育效率的潜在影响.本研究揭示了猪耳组织成纤维细胞的转录组异质性,并提供了分析精英供体细胞的一种有效方法,为提高克隆效率带来新的思路.

摘要： 根据约翰霍普金斯大学硏究人员的一项新硏究,如果将接受骨髓移植的患者体内全身辐射量增加一倍,那么对于只有“半匹配”的供体细胞来说,植入率从仅约50%增加到接近100%。该研究结果于3月13日在线发表在《The Lancet Haematology》杂志上,可为患有严重和致命遗传性血液疾病(包括镰状细胞性贫血和P地中海贫血)的患者提供治愈的可能性。

摘要： 为阐明Dnmt1-siRNA对胎牛成纤维细胞(FBFCs)的影响,设计了3种针对Dnmt1的siRNA来转染FBFCs.结果显示:Dnmt1-siRNA3转染FBFCs 24,48,72 h后,Dnmt1 mRNA表达水平显著降低(P＜0.01).在转染后48 h,siRNA3对Dnmt1抑制效率达到近80％,Dnmt1-siRNA3处理的FBFCs增殖也受到显著影响,FBFC细胞活力下降、处于G0/G1过渡期细胞数量增多(P＜0.05).但Dnmt1-siRNA3组FBFC细胞的凋亡率也显著增加(P＜0.05).说明通过Dnmt1特异性siRNA能够有效地敲低FBFC中的Dnmt1 mRNA表达量,由于细胞周期分布变化,siRNA处理后FBFC作为核供体能提高SCNT的效率.%To determine the effects of siRNAs targeting Dnmt1 on fetal bovine fibroblast cells(FBFCs),three siRNAs against Dnmt1 were designed for transfection into FBFCs.The results showed that Dnmt1-siRNA3 significantly reduced the mRNA expression level at 24,48 and 72 h(P＜0.01).At 48 h post-transfection,the inhibitory efficacy of siRNA3 against Dnmt1 reached nearly 80％.Dnmt1-siRNA3 treatment of FBFCs also significantly inhibited their proliferation,reduced cell viability and arrested more cells in the G0/G1transition(P＜0.05).However,Dnmt1-siRNA3 increased the number of apoptotic cells(P＜0.05).This study demonstrated that specific siRNAs targeting Dnmt1 effectively knocked down Dnmt1 mRNA expression in FBFCs,suggesting that the improved SCNT efficacy observed in the siRNA-treated donor cells might be partially due to changes in the cell cycle distribution.

摘要： 诱导性多能干细胞(iPS)是干细胞领域的研究热点,在组织工程学研究、自体细胞移植、药物研制和开发等诸多领域有着广泛应用前景.其具有类似胚胎干细胞(ES)的自我更新和多分化潜能,在体内外可以分化成多种成熟细胞,并且避免了胚胎干细胞在伦理道德制约、免疫排斥等方面的诸多问题.近年来再生医学的发展,尤其是干细胞技术的进步,iPS作为良好的“种子细胞”已成为国内外干细胞研究领域的前沿热点.随着iPS研究的不断深入以及临床实践的探索,其有望成为再生医学领域的一把利器.本文就iPS的人类供体细胞对比及表观遗传学方面进行综述.%Induced pluripotent stem cells (iPS cells) are stem cell research focus areas,it has a broad application prospects in tissue engineering research,autologous cell transplantation,drug research and development and many other areas.Having self-renewal and multi-differentiation potential similar to embryonic stem cells,it can differentiate into more mature cells in vivo and in vitro,avoids the many problems in the ethical constraints,and other aspects of immune rejection.In recent years,the development of regenerative medicine,in particular progress Stem Cell Technology,induced pluripotent stem cells as a good "seed cells" has become a domestic and international forefront of stem cell research hotspot.With the induction of new pluripotent stem cell research,deepening and exploring clinical practice,which is expected to become a tool in the field of regenerative medicine.This paper reviews the comparison of human donor cells and epigenetic aspects of induced pluripotent stem cells.

摘要： 影响体细胞核移植效率的因素很多,供体细胞选择是核移植实验成功的基础和关键.本文参考近年来国内外在动物体细胞核移植技术方面的资料,从供体体细胞类型、细胞年龄、细胞传代及细胞周期对克隆效率的影响进行简要综述.

摘要： 曾培育出世界上第一只克隆犬“史努比（Snuppy）”的韩国科学家最近在《科学报告》杂志上发表论文称,他们在2010年与美国科学家合作,利用5岁大“史努比”的干细胞,成功孕育出4只第二代克隆犬,其中3只在9个月大时仍相当健康.这些现已7岁大的克隆犬,将为科学家们比较克隆动物与提供体细胞的父辈间的健康与寿命,提供独特的研究机会.

摘要： 据中新网消息,经过两个多月的漫长等待，一份特殊的“亲子鉴定”报告出炉，13头克隆小猪与“代孕”母亲无血缘关系，仅与供体细胞存在“亲子关系”。这从医学上证明了，世界首例机器人操作的体细胞克隆猪在中国天津诞生。

摘要： 经过两个多月漫长等待，一份特殊的“亲子鉴定报告”出炉：13头克隆小猪与“代孕”母猪无血缘关系，仅与供体细胞存在“亲子关系”，这从医学上证明了，世界首例机器人操作的体细胞克隆猪在中国天津诞生。

摘要： 本研究采用爪蟾卵母细胞抽提物处理和牛胎儿成纤维细胞(JBCFF),并以发生重编程的细胞为核供体进行体细胞核移植,研究其对克隆效率的影响.分别超排3只爪蟾,收集卵母细胞后提取其抽提物,用BCA蛋白浓度测定试剂盒确定其蛋白含量,SDS-PAGE分析其中所含蛋白的种类.应用细胞膜透化剂Digitonin对建立的JBCFF进行通透处理和PI染色,筛选最适浓度;并用获得的抽提物处理牛体细胞,获得重编程细胞.以发生重编程的体细胞为供体进行核移植,同时比较离子霉素+ 6-DMAP和A23187+ 6-DMAP两种组合激活后克隆胚的体外发育能力.结果,3个爪蟾卵母细胞抽提物样品的蛋白浓度分别为56.2255、64.6570和71.2158 μg/mL,其中所含蛋白种类一致,主要集中在40～55、70～100 ku之间.经过连续的筛选,透化剂Digitonin对JBCFF通透处理的最适浓度为7 μg/mL,PI染色显示透化效率为55.44％.爪蟾卵母细胞抽提物与体细胞共孵育后继续培养6～7 d,细胞聚集形成“克隆簇”.分别以“克隆簇”细胞和未处理细胞为核供体,制备的重构胚在融合率(92.83％和96.04％)、卵裂率(89.64％和89.78％)和囊胚率(24.06％和23.12％)均无显著差异(P＞0.05);离子霉素+6-DMAP和A23187+6-DMAP两种激活方式对克隆胚胎的分裂率(92.16％和92.28％)和囊胚率(23.21％和24.18％)均无显著影响(P＞0.05).爪蟾卵母细胞抽提物诱导和牛体细胞发生重编程,并恢复到较低的分化状态,但没有显著促进克隆胚胎的体外发育,可见缺少对胚胎发育起重要作用的重编程过程,还需要继续深入研究.

摘要： 本研究探讨了水牛供体细胞不同培养处理方法对细胞周期及其核移植效果的影响.流式细胞仪分析供体细胞周期的结果显示,水牛胎儿耳皮成纤维细胞或颗粒细胞,在增长期、汇合长满期或经血清饥饿培养或0.1μg/mL蚜栖菌素(APD)+0.5﹪胎牛血清(FBS)培养处理后,G0+G1期细胞比率差异显著(P＜0.05),其中以0.1μg/mLAPD+0.5﹪FBS培养处理的G0+G1期细胞比率最高(87.89﹪和89.04﹪);而增长期的G2+M期的细胞比率以及汇合长满期的S期细胞比率明显高于其他三组,但经血清饥饿处理后,DNA碎片明显高于其他三组(P＜0.05).当分别以0.1μg/mLAPD+0.5﹪FBS培养处理后的水牛胎儿耳皮成纤维细胞或颗粒细胞作供核时,重组胚的卵裂率及囊胚发育率,均显著高于血清饥饿处理或汇合长满期的同种供体细胞(成纤维细胞:70.14﹪ vs 58.29﹪和55.90﹪,21.33﹪ vs 10.55﹪和8.72﹪;颗粒细胞:74.35﹪ vs 60.51﹪和57.61﹪,22.17﹪vs10.26﹪和9.78﹪,P＜0.05),但汇合长满期或血清饥饿处理的供体细胞构建的重组胚,其卵裂率和囊胚率均没有显著差异(P＞0.05).将经APD处理后的供体细胞构建核移植胚胎,移植给受体水牛后有1头受体水牛妊娠并成功的产下后代.以上结果表明:0.1 μg/mL APD+0.5﹪FBS预培养处理供体细胞,能有效的抑制细胞停留在G0/G1期,并能提高其核移植胚胎的发育率,而且已成功的获得后代.但在本培养系统中,血清饥饿处理供核细胞是没有必要的.

摘要： 通过对猪的卵丘细胞和胎儿成纤维细胞的分离、培养和传代的研究，摸索出一套猪体细胞的分离、培养和传代的方法，建立了猪的供体细胞系。研究结果表明：猪的卵丘细胞单层的生长需要5～6 d；运用组织块法和酶消化法获得胎儿成纤维细胞，组织块法单层的生长需要10～11 d，酶消化法需要8～9 d。猪的卵丘细胞和胎儿成纤维细胞均可以建立并获得稳定的细胞系，这些供体细胞培养方法的应用可为猪体细胞核移植研究提供丰富的供体细胞材料来源。

摘要： 本文通过对猪的卵丘细胞和胎儿成纤维细胞的分离、培养和传代的研究,摸索出一套猪体细胞的分离、培养和传代的方法,建立了猪的供体细胞系.研究结果表明:猪的卵丘细胞单层的生长需要5～6d;运用组织块法和酶消化法获得胎儿成纤维细胞,组织块法单层的生长需要10～11d,酶消化法需要8～9d.猪的卵丘细胞和胎儿成纤维细胞均可以建立并获得稳定的细胞系,这些供体细胞培养方法的应用可为猪体细胞核移植研究提供丰富的供体细胞材料来源.

摘要： 本试验系统研究了电融合参数、以及不同形态、大小和代数的供体细胞对牛胚胎克隆效果的影响，旨在优化转脂肪型脂肪酸结合蛋白基因(A-FABP)体细胞核移植的技术体系，为克隆胚胎的生产、移植、并最终繁殖转A-FABP基因克隆牛奠定试验基础。

摘要： 本发明提供克隆哺乳动物的方法，在这些方法中，使供体染色体或供体细胞在插入去核的卵母细胞之前，先进行改变程序。本发明还描述了将染色体或细胞核插入受体细胞的方法的特征。

摘要： 本发明公开了一种基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞和方法。本发明提供的载体包括阻遏蛋白TetR表达载体和含有操纵基因TetO的双向表达载体，在融合前将两者共转染到供体细胞中。筛选阳性转染的细胞，药物诱导表达山羊TET3，将TET3诱导表达的阳性细胞作为最终供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的山羊体细胞克隆胚培养。本发明可以有效的降低供体细胞的甲基化水平，纠正克隆胚胎中的异常高甲基化现象，从而显著提高后期山羊体细胞克隆胚胎的发育率和质量，可以高效地体外生产山羊体细胞克隆胚胎，胚胎移植后的克隆山羊的出生率也显著提高。

摘要： 本发明提供克隆哺乳动物的方法，在这些方法中，使供体染色体或供体细胞在插入去核的卵母细胞之前，先进行改变程序。本发明还描述了将染色体或细胞核插入受体细胞的方法的特征。

摘要： 本发明提供了用于核移植的改进方法,包括将供体分化猪细胞核移植到去核猪卵母细胞中。产生的核移植单位可用于通过生成胎儿和子代来增殖基因型和转基因基因型。本发明有助于生成遗传工程或转基因的猪胚胎、胎儿、和子代,因为可遗传修饰并克隆增殖供体细胞核的分化细胞来源。

摘要： 本发明公开了用于构建HBB基因突变的镰刀型细胞贫血症模型猪核移植供体细胞的方法及应用。本发明提供了HBB‑gU1、HBB‑gD3、HBB‑mutant‑ss174和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。试剂盒的用途：制备重组细胞；制备镰刀型细胞贫血症模型猪；制备镰刀型细胞贫血症细胞模型或镰刀型细胞贫血症组织模型或镰刀型细胞贫血症器官模型。HBB‑gU1为sgRNA，其靶序列结合区如SEQ ID NO：18中第3‑22位核苷酸所示。HBB‑gD3为sgRNA，其靶序列结合区如SEQ ID NO：19中第3‑22位核苷酸所示。HBB‑mutant‑ss174为SEQ ID NO：20所示的单链DNA分子。NCN蛋白为Cas9蛋白或具有Cas9蛋白的融合蛋白。本发明对于研发镰刀型细胞贫血症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。

摘要： 本发明公开了一种基因编辑系统及其在构建双基因联合突变的痣样基底细胞癌综合征模型猪核移植供体细胞中的应用。本发明提供了SEQ ID NO：28所示PTCH1‑E6g2、SEQ ID NO：29所示PTCH1‑E7g1、SEQ ID NO：30所示TP53‑E4g1、SEQ ID NO：31所示TP53‑E4g4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。本发明还提供了制备重组细胞的方法，将PTCH1‑E6g2、PTCH1‑E7g1、TP53‑E4g1、TP53‑E4g4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到PTCH1基因和TP53基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途：制备重组细胞；制备痣样基底细胞癌综合征模型猪；制备痣样基底细胞癌综合征细胞模型或组织模型或器官模型。本发明对于痣样基底细胞癌综合征药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。

摘要： 本发明公开了一种基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞和方法。本发明提供的载体包括阻遏蛋白TetR表达载体和含有操纵基因TetO的双向表达载体，在融合前将两者共转染到供体细胞中。筛选阳性转染的细胞，药物诱导表达山羊TET3，将TET3诱导表达的阳性细胞作为最终供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的山羊体细胞克隆胚培养。本发明可以有效的降低供体细胞的甲基化水平，纠正克隆胚胎中的异常高甲基化现象，从而显著提高后期山羊体细胞克隆胚胎的发育率和质量，可以高效地体外生产山羊体细胞克隆胚胎，胚胎移植后的克隆山羊的出生率也显著提高。

摘要： 本发明提供涉及将来自无血清饥饿的细胞的供体分化的细胞核移植入与供体细胞相同种的去核卵母细胞的核移植改进方法。得到的核移植单位通过胎儿和后代的产生用于基因型和转基因基因型的繁殖以及等基因CICM细胞包括人等基因胚胎或干细胞的产生。由于可对供体细胞核的分化细胞来源进行遗传修饰和克隆繁殖，通过本发明可促进遗传工程或转基因哺乳动物胚胎、胎儿和后代的产生。

摘要： 本发明提供了既提高连续核转移的效率又提高随后产生转基因细胞和/或动物的效率的方法。这种新方法通过采用至少第二轮核转移，使供体细胞能够更有效地矫正其重新编程(reprogramming)，产生更多数量的有用的转基因胚胎。由于产生的胚胎增强了重新编程，本发明可以产生更健康的转基因动物。

摘要： 本发明提供一种改良的核移植方法,该方法包括将分化的供体细胞核移植至不同于供体细胞的物种的去核卵母细胞中。所获核移植单位用于制备等基因胚胎干细胞,尤其是人等基因胚胎细胞或干细胞。这些胚胎细胞或干样细胞对于制备目的分化细胞以及(例如通过同源重组在该细胞的基因组特异位点处)引入、除去或修饰目的基因是有用的。这些细胞可以含有异源基因,在细胞移植治疗和细胞分化的体外研究中尤其有用。本发明还提供了通过遗传改变供体细胞以抑制细胞凋亡,选择特定的细胞周期和/或增强胚胎生长和发育,从而提高核移植效率的方法。