体外筛选

摘要： 为科学配伍肠道健康食品中的益生菌与益生元,在相同的体外培养条件下评价乳双歧杆菌BL-99、婴儿双歧杆菌YLGB-1496、副干酪乳杆菌K56、副干酪乳杆菌ET-22等4株益生菌对12种益生元的利用特点,高通量筛选典型的合生元组合并分析其发酵特性。研究通过微生物菌落自动化工作站测定所有组合的生长速率,初步筛选特征组合,并与市售典型益生菌乳双歧杆菌BB-12和鼠李糖乳杆菌LGG对照,评价特征组合中益生元对益生菌的促增殖及促产酸能力,并通过益生元降解率和代谢产物分析评价其体外发酵特性。以代谢产物作为主要指标,结果显示不同益生元对益生菌的作用效果差异显著,乳双歧杆菌BL-99与乳糖组合的益生效果较好,而婴儿双歧杆菌YLGB-1496、副干酪乳杆菌K56、副干酪乳杆菌ET-22则与低聚半乳糖组合的益生效果较好。该研究通过高通量组合筛选,为益生菌与益生元的组合提供数据支持,为肠道健康食品开发奠定基础。

摘要： [目的]从中药中发现新颖的胆碱酯酶抑制剂(ChEI)。[方法]采用4种溶媒从14种中药中提取了56种粗提物,并对14种中药的56种中药提取物进行乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BuChE)抑制活性筛选。[结果]虎杖乙酸乙酯提取物和云木香石油醚提取物表现出AChE和BuChE双重抑制作用,这2种提取物为阿尔兹海默氏症的治疗提供了巨大的潜力。大多数中药乙酸乙酯提取物均显示出较强的BuChE抑制活性。提取物抑制AChE和BuChE的IC_(50)分别为16.00~42.03和11.29~41.92μg/mL。[结论]中药可以作为胆碱酯酶抑制剂的潜在来源。

摘要： 肿瘤新生抗原是由体细胞突变产生的能诱导肿瘤特异性T细胞识别的多肽,是一种肿瘤特异性抗原,是肿瘤免疫治疗的理想靶点.靶向肿瘤新生抗原的疫苗、T细胞受体嵌合T细胞疗法和肿瘤浸润淋巴细胞疗法均已进入临床研究阶段.准确快速地鉴定肿瘤新生抗原对于成功的免疫治疗至关重要,也是目前个性化免疫治疗中的一个难点.近年来有大量肿瘤新生抗原预测算法和筛选方法被开发,并应用于临床前和临床研究中.综述肿瘤新生抗原的主要来源、预测和筛选技术研究进展,并展望这一领域的未来发展方向.

摘要： 目的:评价新疆阿魏内生真菌提取物体外抗肿瘤细胞增殖活性,并筛选具有抗肿瘤细胞增殖活性的菌株,为进一步研究其抗肿瘤作用提供依据.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定117株新疆阿魏内生真菌菌液提取物和菌丝体提取物对人宫颈癌HeLa细胞和胃癌AGS细胞增殖的影响.结果:有43株链格孢属菌株的49份提取物在质量浓度为100μg·mL–1时,对肿瘤细胞抑制率达50％以上;其中15份对HeLa细胞、AGS细胞的增殖均具有显著抑制作用,且1938/TL168菌株提取物对HeLa细胞增殖的半数抑制浓度(IC50)低至(25.95±3.39)μg·mL–1.结论:阿魏内生真菌提取物可有效抑制肿瘤细胞增殖,具备抗肿瘤药物研发潜质.

摘要： 目的 利用建立的西尼罗假病毒报告系统,体外筛选获得抗西尼罗病毒抗体.方法 首先,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测由噬菌体展示技术筛选获得的13株抗西尼罗病毒候选抗体与靶蛋白-西尼罗病毒E蛋白结构域Ⅲ(DⅢ)的结合;其次,将收集的含有西尼罗假病毒的细胞培养上清稀释102倍,分别与相应浓度的候选抗体室温孵育1 h后,将假病毒上清+抗体混合液感染BHK21或者K562细胞,48 h后,裂解细胞测荧光素酶活性(RLU).结果 13株候选抗体均能识别并结合西尼罗病毒E蛋白DⅢ;其中2株抗体(抗体5和7)具有较好的中和活性,低浓度下(5 mg/L)即能有效阻断病毒入侵靶细胞;而2株抗体(抗体3和8)具有抗体增强效应(ADE),表现为靶细胞病毒感染增强.结论 利用建立的西尼罗假病毒报告系统,体外筛选获得2株具有中和活性的抗西尼罗病毒抗体.

摘要： 2011年新修订的经济合作与发展组织(OECD)化学品测试指南中增添了指南456——H295R细胞系类固醇生成试验,用来筛选和检测潜在的内分泌干扰物.H295R细胞能表达类固醇激素生成过程中涉及的所有酶类,已作为有效的体外筛选环境类固醇激素干扰物的模型,也可作为研究肾上腺皮质分化及其类固醇激素的分泌与调控以及雄激素产生的调节作用的模型.H295R试验已用于美国内分泌干扰物筛选项目(EDSP)的一级筛选,还发展了高通量H295R细胞系类固醇生成试验方法.本文主要就H295R细胞系的建立,在环境类固醇激素干扰中的应用,以及目前存在的问题作一综述.

摘要： 畜产品是人们日常饮食中至关重要的一部分,畜产品中的兽残问题也吸引了越来越多的关注.核酸适配体技术包含筛选、特异性识别两个过程.核酸适配体是一段体外筛选获得的单链RNA或DNA序列,能与靶物质特异性结合,被称为"化学抗体".与传统检测方法相比,具有检测周期短、成本低、不受环境制约等优点.该文围绕畜产品,在兽残传统检测方法的基础上,综述核酸适配体在各类兽药残留检测中的应用,并就核酸适配体在该领域的应用前景进行展望.

摘要： 目的 利用噬菌体随机七肽库体外筛选与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞特异性结合的小分子多肽. 方法 培养人乳腺髓样癌Bcap-37细胞作为靶细胞,人正常乳腺上皮细胞MCF-10A为吸附细胞,将噬菌体展示随机七肽库与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞进行减性体外筛选,用ELISA法鉴定噬菌体对人乳腺癌Bcap-37细胞的亲和力.提取亲和力较高的单克隆噬菌体DNA,测定DNA序列并翻译出相应的氨基酸序列,进行同源性分析. 结果 利用噬菌体随机七肽库通过4轮减性筛选获得了与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞特异结合的小分子多肽.ELISA法表明,第1,3,5,6,8,12,14,16,17,18和20号单克隆噬菌体与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞有很强的亲和力和特异性.测序结果显示,重复性最高的序列为LXRNTNX. 结论 利用噬菌体展示技术体外筛选获得了能与人乳腺癌Bcap-37细胞特异性结合的小分子多肽LXRNTNX,经检索该肽段与已知蛋白尚无同源性,因此它很有可能成为乳腺癌的早期诊断和靶向治疗新的靶点.

摘要： 以胆固醇同化吸收能力为指标,用高效液相色谱法从12株乳酸菌中筛选出2株具有较高降胆固醇能力的乳酸菌YXB23和YDA12,胆固醇降解率分别为(35.33±4.51)％和(33.53±2.91)％.经过16S rDNA分子鉴定,YXB23属于植物乳杆菌,YDA12属于乳酸片球菌.通过体外耐酸性实验、耐胆盐实验和模拟胃肠道实验发现YXB23和YDA12在pH2.5胁迫8h后的存活率分别为(99.42±0.30)％和(97.42±0.62)％;在胆盐的质量分数为0.2％时胁迫8h,YXB23和YDA12存活率分别为(77.51±0.46)％和(98.86±0.13)％,而胆盐的质量分数为0.3％时存活率分别为0％和(95.36±1.11)％;人工胃液消化3h后,YXB23和YDA12的存活率分别为(85.46±1.76)％和(85.41±1.47)％,将消化液转接入人工小肠液消化8h后,植物乳杆菌YXB23与乳酸片球菌YDA12的存活率分别为(90.47±2.94)％和(88.95±2.29)％.比较2株乳酸菌,筛选出YDA12为具有良好胃肠道耐性的潜在降胆固醇乳酸菌.

摘要： 目的 探讨体外筛选效率较高的引导核糖核酸(guide ribonucleic acid,gRNA)的方法.方法 以家兔扭转蛋白2A(torsin family 2 member A,TOR2A)基因的gRNA设计和筛选为例,介绍gRNA简单的体外筛选方法.首先根据TOR2A基因的外显子序列在线设计gRNA,选择3条gRNA序列(也可更多),将其分别插入到T7启动子之后,体外转录gRNA并纯化备用.设计包含gRNA打靶序列的一对引物,以基因组DNA为模板进行PCR扩增并胶回收PCR产物.将gRNA,PCR产物和Cas9内切酶组成的体系进行酶切实验,琼脂糖电泳判定gRNA引导的酶切效率.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示第1条gRNA未能引导Cas9内切酶对含打靶位点的PCR产物进行DNA酶切,第2条gRNA(GCTTGTCCATCTCGTCGAAG)和第3条gRNA(TCTCTTCCTCTTCGACGAGA)引导Cas9进行了比较彻底的酶切,第2、3条gRNA可用于后续研究.结论 此体外筛选方法是一种简单、可行和实用的gRNA的体外筛选策略.%Objective To explore a simple guide ribonucleic acid (gRNA) in vitro screening method.Methods gRNAs target rabbits torsin family 2 member A (TOR2A) gene were used as an example and screened out two efficiency gRNAs.First,design the gRNAs by online software.Three or more gRNA sequences were choose and inserted behind T7 promoter.After in vitro transcription,gRNAs were purified and then quantified by NanoDrop.Secondly,a pair of primers were designed to amplify about 300～1000 bp genomic sequence which included the gRNAs target sequences.The last step,PCRproducts,gRNA candidate and Cas9 nuclease were incubated together and then were checked by agarose gel electrophoresis.Results In this study,three gRNAs that target rabbits TOR2A gene were screened.The gRNA1 was failed to guide Cas9 to cleave the PCR products that contain the target sequences,while gRNA2 and gRNA3 were identified to successfully guide the Cas9 cleavage.Conclusion The gRNA in vitro screening method that used in this experiment was simple and efficient.

摘要： 目的:建立HPLC法体外筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法.rn 方法:采用HPLC法测定酶促反应体系中底物黄嘌呤在反应前后含量的变化,以此考察待测样品对黄嘌呤氧化酶的抑制作用.色谱条件:Agilent SB-C18柱,4.6mm×250mm,5μm;流动相,0.02mol·L-1 KH2PO4(含甲醇1％);流速,1.0mL·min-1;进样量,20μL;柱温,室温;检测波长,254nm.rn 结果:在该色谱条件下,酶促反应体系中的黄嘌呤与其它成分分离度良好.利用该方法对14种中药进行了筛选,发现使君子、苏木、虎杖和丹皮四味中药的70％乙醇提取物对黄嘌呤氧化酶抑制作用较强.rn 结论:该方法简单可行,准确性较高,可用于黄嘌呤氧化酶抑制剂的快速筛选.

摘要： 建立适用于化妆品添加剂的非酶糖基化抑制剂(NEGI)的体外筛选试验方法。选取近十种应用于抗衰老产品的活性物质进行方法验证及其考察。探讨非酶糖基化实验的实际应用。

摘要： @@1990年，Tuerk和Gold分别独立研制了一种新型的体外筛选技术，即指数富集的配体系统进化技术(Systematic evolution of ligand by exponential enrichment，SELEX)，用于研究小分子核酸与靶物质相结合的部位、序列及空间构像。适体(aptamer)，又称适配分子或适配子，实质是运用SELEX技术从人工体外合成的随机寡核苷酸序列库中反复筛选得到的能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的一段寡核苷酸序列。

摘要： 同位素微量试验法是WHO推荐的评估抗疟活性和检测抗疟药敏感性的方法,国内报道甚少.采用同位素微量试验法检测20个新化合物对恶性疟原虫Dd2、3D7克隆系的抗疟活性;结果显示,20个新化合物均没有明显的抗疟原虫活性;对照药物氯喹和奎宁显示了良好的抗疟活性,结果稳定、重复性好,表明同位素微量试验法是体外筛选新抗疟药的一个稳定、可靠的方法.

摘要： 用改良的o-phthalaldehyde法对经耐酸、耐胆盐试验证明,对pH3.0和0.3％牛胆酸钠有一定耐受性的10株乳酸菌的体外降胆固醇活性进行了测定.当培养基中含有0.3％胆盐时,37°C厌氧培养24h后,这些菌均表现出较强的降胆固醇活性.胆固醇脱除率从30.4％～43.6％不等.其中鸟肠球菌WZ38-2对胆固醇的脱除率最高;其次为植物乳杆菌WH13-1和WH23-1,脱除率分别为41.1％和40.1％。

摘要： 为了得到一株高效降胆固醇的乳酸菌并研究其降胆固醇的特性,本研究通过体外筛选得到一株降胆固醇能力为41.87﹪的乳酸乳球菌乳亚种Q,并用该乳酸菌发酵奶饲喂高脂模型大鼠,研究其对血清总胆固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、血清高密度脂蛋白(HDL-C)、血清总胆酸(TBA)、肝脏总胆固醇(TC)、粪便总胆固醇(TC)、粪便总胆酸(TBA)以及体重和肝、肾、脾重量的影响.结果发现28d后,实验组大鼠血清中TC、TG、TBA和肝脏中TC含量明显下降(P<0.05),粪便中TC和TBA含量也降低.各组间大鼠的HDL-C、体重、肝重/体重、肾重/体重、脾重/体重无显著差异.

摘要： 本文报导利用发酵技术,并在培养基中添加具有抗肿瘤效果的天然物质,得到复合糖,再经体外药物筛选和动物体内的抗肿瘤实验的研究.

摘要： 淋病奈瑟菌的实验室检测包括直接涂片、培养、免疫抗原检测，基因诊断等方法。本研究旨在以SELEX筛选技术为基础，筛选针对淋病奈瑟菌敏感和高特异性而且结合力强，不易受外界环境影响的的寡核苷酸分子，探索大分子物质筛选技术，为大分子物质的筛选提供一个技术平台，为SELEX技术的进一步完善提供新的方法和途径。利用筛选得到特异性的淋病奈瑟菌适体，为进一步建立相关的荧光标记适体技术快速检测靶目标的方法奠定基础。

摘要： 淋病奈瑟菌的实验室检测包括直接涂片、培养、免疫抗原检测，基因诊断等方法。本研究旨在以SELEX筛选技术为基础，筛选针对淋病奈瑟菌敏感和高特异性而且结合力强，不易受外界环境影响的的寡核苷酸分子，探索大分子物质筛选技术，为大分子物质的筛选提供一个技术平台，为SELEX技术的进一步完善提供新的方法和途径。利用筛选得到特异性的淋病奈瑟菌适体，为进一步建立相关的荧光标记适体技术快速检测靶目标的方法奠定基础。

摘要： 淋病奈瑟菌的实验室检测包括直接涂片、培养、免疫抗原检测，基因诊断等方法。本研究旨在以SELEX筛选技术为基础，筛选针对淋病奈瑟菌敏感和高特异性而且结合力强，不易受外界环境影响的的寡核苷酸分子，探索大分子物质筛选技术，为大分子物质的筛选提供一个技术平台，为SELEX技术的进一步完善提供新的方法和途径。利用筛选得到特异性的淋病奈瑟菌适体，为进一步建立相关的荧光标记适体技术快速检测靶目标的方法奠定基础。

摘要： 本发明公开了一种URAT1抑制剂体外活性筛选的细胞模型及其构建方法与筛选方法。该构建方法包括：将hURAT1基因连接在质粒上，将质粒转染至细胞中，经过药物筛选、DNA鉴定及蛋白质鉴定，得到URAT1抑制剂体外活性筛选的细胞模型。该筛选方法，包括：将待测药物、荧光素加入培养基中，接种上述细胞模型，进行共培养，除去培养基，得到培养后的细胞，裂解，测试荧光分光光度值，根据荧光分光光度值来判断待测药物是否URAT1抑制剂。与现有的通过放射性标记14C‑尿酸的方法相比，本发明的方法具有高灵敏度、定量、高特异性，对设备与测试环境要求不高，可避免放射性污染等优点，且可用于高通量筛选URAT1抑制剂。

摘要： 本发明公开了一种化妆品原料体外3D皮肤模型屏障修复功效的筛选方法，结合正常3D皮肤模型、SDS损伤3D皮肤模型和SDS持续损伤3D皮肤模型，对目标原料的屏障修复活性进行筛选，包含免疫学、分子生物学、毒理学三种维度的检测，构建化妆品原料的屏障修复功效评价方法，属于系统型评估方法，具有快速、高效、全面的优势；为皮肤护理产品屏障修复活性原料的前期验证及筛选提供快捷可靠的评价方法，为屏障修复原料的复配方案提供参考依据，也为护肤品行业动物替代实验、皮肤护理产品开发和功效验证的进一步研究提供有效依据。

摘要： 本发明提供了一种用模式生物斑马鱼和体外细胞双重筛选中药单体化合物毒性的方法。将待测中药单体化合物分别配制成供斑马鱼测定使用的工作液和供体外细胞测定使用的储备液，进行斑马鱼毒性测试和体外细胞毒性测试，统计斑马鱼的致死浓度LC50和非致死浓度LC0，以及细胞毒性IC75和IC0等测试结果，根据双重筛选结果得到的IC0、LC0测试结果共同判定中药单体化合物毒性的安全浓度大小。该方法结合斑马鱼体内毒性研究的特点与细胞系体外毒性研究的特点，共同判定药物的毒性，使检测的中药单体化合物毒性的安全浓度范围值更加准确，能更加全面准确的检测药物的体外毒性以及体内毒性用于药物的毒性验证和评价。

摘要： 本发明是一种快速筛选大分子免疫活性物质的体外模型构建方法，该方法包括：制备合格的条件培养基，并利用条件培养基刺激肠上皮细胞；然后将待测样(上室)和免疫感知细胞RAW264.7(下室)同时加入到Caco‑2肠上皮单层细胞共同培养和孵育；孵育后并弃除上室培养基，将待测样和条件培养基加入到上室；收集下室培养基，并检测炎症因子水平。本发明将肠上皮细胞和免疫细胞共同培养模拟肠道内环境，利用待筛样品和条件培养基共同作用于上层的上皮细胞模拟肠道内食物大分子对肠损伤和机体免疫调节作用。

摘要： 一种体外筛选程序性细胞死亡受体1‑配体1(PD‑L1)高亲和力和特异性DNA核酸适配体的新方法，简称内编码‑SELEX(Encoded‑SELEX)。本方法的起始随机DNA文库包含两个随机序列区域和位于其间的含有Ⅱ型限制性内切酶识别位点的固定区域(即内编码)。利用MCP‑SELEX预先富集文库，随后将文库与PD‑L1均相孵育，然后加入限制性内切酶。能够与PD‑L1结合的序列，其内编码结构被破坏，因而序列不被限制性内切酶切断，PCR扩增得以保留。所获得的核酸适配体具有内编码长度越长亲和力越高的特点，便于快速遴选高亲和力核酸适配体。荧光标记的核酸适配体成功用于正常人扁桃体组织和多种肿瘤组织切片PD‑L1表达水平的荧光成像，性能与抗体相当，具有优越应用价值。

摘要： 本发明涉及一种体外筛选PD‑L1的DNA核酸适配体的方法及其应用，属于生物技术领域。本方法为模块化‑SELEX，起始随机DNA文库包含两个随机序列区域和位于中间的固定区域。本方法由三个筛选模块组成，分别为快速富集模块、特异性提高模块和兼容性提高模块。模块化‑SELEX利用各种SELEX方法的独特优势，依次快速提高文库对靶标的亲和力、提高对主要干扰因素的特异性、提高对真实样本中靶标检测的兼容性。Modular‑SELEX得到的PD‑L1的DNA核酸适配体成功用于多种癌细胞、正常人体扁桃体组织切片和非小细胞型肺癌组织切片上PD‑L1的表达水平的检测。

摘要： 本发明公开了一种通过体外筛选产生对RNA进行可变剪接分子工具的方法。属于生物医药领域，具体步骤：利用脱氧核酶对前体mRNA进行可变剪接，产生两个待连接片段；利用具有RNA连接活性的脱氧核酶对片段进行连接，形成成熟的RNA，验证脱氧核酶进行体外剪接的可行性；利用具有RNA切割活性的脱氧核酶切除目的前体信使RNA的一个内含子，产生两个待连接的RNA片段；通过体外筛选的技术手段获得具有RNA连接酶活性的苏糖核酸酶；利用苏糖核酸酶连接两个外显子，产生有功能的信使RNA；苏糖核酸酶较天然核酸酶具有稳定性好，不易降解，安全低毒等优点。本发明有效地实现RNA的剪接，为治疗由RNA剪接错误导致的疾病提供一种分子工具。

摘要： 本发明提供一种体外筛选新型冠状病毒抑制剂的方法，属于生物分析检测领域。该方法通过体外检测荧光能量共振转移(FRET)信号变化来筛选抑制剂分子。具体的方法是，首先通过基因工程方法分别在新型冠状病毒的受体结合蛋白(RBD)及其受体人源血管紧张素转化酶2(hACE2)融合上标签蛋白，分别用FRET给‑受体荧光小分子分别标记这两个蛋白。在溶液中，用给体分子激发光激发，由于hACE2和RBD蛋白相互作用，发射受体分子荧光。当加入新冠病毒抑制剂后，hACE2和RBD蛋白被解离，此时，分子受体的荧光减弱，而给体荧光增强。应用该方法，可以在体外筛选新冠病毒抑制剂分子，具有灵敏、快速的特点。

摘要： 本发明提供一种免疫细胞向肿瘤迁移的负调控因子的体外筛选、鉴定方法。为了寻找能够驱动T细胞向肿瘤迁移的负调控基因，本发明的体外筛选、鉴定方法包括：步骤1、采用SLICE技术对免疫细胞进行基因组编辑；步骤2、采用嘌呤霉素puro筛选稳定表达的经基因组编辑的免疫细胞并进行扩增培养；步骤3、将扩增培养后的经基因组编辑的免疫细胞在驱动剂的作用下进行Transwell迁移实验，分别收集Transwell上室和下室中的细胞并进行基因测序分析。本发明适用于趋化因子、肿瘤细胞培养上清及肿瘤对免疫细胞的驱动作用，适用于各种免疫细胞向肿瘤迁移的负调控因子的筛选或鉴定，将大大推进抗肿瘤免疫治疗的发展。

摘要： 本发明开发了一种药物的体外筛选方法，使用肠道微生物体外培养方法、定量代谢组学、宏基因组学相结合来评估人体肠道微生物直接代谢药物的能力。本发明所述体外筛选方法可用于肠道微生态失调引起的肠道炎症、代谢性疾病、心血管疾病以及孤独症等治疗性药物的快速、大批量的筛查。