体外增殖

摘要： 目的探讨钠碘转运体(NIS)报告基因的共表达对嵌合型受体T(CAR-T)细胞体外增殖和杀伤活性的影响。方法慢病毒感染法制备CAR-T细胞(仅表达CD19 CAR的T细胞)、NIS-T细胞(仅表达NIS报告基因的T细胞)和NIS-CAR-T细胞(共表达NIS和CD19 CAR的T细胞),然后按T细胞蛋白表达情况分为4组∶T细胞组(未转染的T细胞)、CAR-T组、NIS-T组、NIS-CAR-T组。流式细胞术检测各组NIS和CAR转染率。各组细胞常规培养24、48、72 h,CCK-8法检测增殖能力。各组T细胞为效应细胞,Nalm6肿瘤细胞为靶细胞,按效靶比0.5∶1、1∶1、2∶1、4∶1共培养24、48、72 h,乳酸脱氢酶细胞毒性检测法(LDH)检测各组细胞对肿瘤细胞的杀伤率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测共培养上清液中各组细胞因子人干扰素-γ(IFN-γ)和人肿瘤坏死因子-β(TNF-β)释放水平。摄碘实验检测表达NIS蛋白各组细胞的NIS功能。结果CAR-T细胞、NIS-CAR-T细胞的CAR转染率分别为91.91%、99.41%,NIS-T细胞、NIS-CAR-T细胞的NIS转染率分别为47.83%、50.24%。常规培养24、48、72 h CAR-T细胞与NIS-CAR-T细胞增殖率差异无统计学意义(P>0.05)。0.5∶1、1∶1、2∶1和4∶1效靶比作用24 h时CAR-T细胞杀伤率(%)均高于NIS-CAR-T细胞(P0.05)。CAR-T细胞与NIS-CAR-T细胞均存在IFN-γ和TNF-β释放现象,释放水平均高于对照组(P0.05),但均高于对照组T细胞(P<0.05)。结论NIS报告基因的共表达不影响CAR-T细胞中CAR转染率,对细胞增殖和杀伤活性无抑制现象。

摘要： 多菌种共酵工艺在低温长时的发酵条件下可赋予黄酒丰富的低聚糖。该研究以半干型黄酒为原料,对黄酒中低聚糖进行分离纯化及结构表征。利用75%乙醇沉淀黄酒中低聚糖,并经Sevage法除蛋白、300 Da与3000 Da膜分离、冷冻干燥等途径获得粗黄酒低聚糖,其提取率达31.80%。粗黄酒低聚糖经琼脂糖凝胶柱DEAE Sepharose Fast Flow与葡聚糖凝胶柱Sephadex G15纯化可获得纯度为84.21%的黄酒低聚糖组分a(Huangjiu oligosaccharide-a,HJO-a)。通过建立小鼠粪便菌群体外发酵模型,探究HJO-a对肠道菌群的益生作用。结果表明,黄酒低聚糖被肠道菌群酵解后可提高发酵液中乙酸、丙酸、丁酸与异丁酸的含量,降低发酵液pH。此外,黄酒低聚糖显著提高了发酵液中肠道双歧杆菌、乳杆菌与拟杆菌的丰度(P<0.05),并显著抑制了发酵液中大肠杆菌的增殖(P<0.05)。上述结果揭示了黄酒低聚糖可发挥潜在的益生元作用。该研究为黄酒低聚糖的提取纯化及功能活性分析提供一定的理论依据。

摘要： 为探讨雪樱子多糖(AcLP)对鸡淋巴细胞体外增殖的影响,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定AcLP的安全浓度,并检测不同浓度的AcLP单独或协同伴刀豆球蛋白(ConA)对鸡淋巴细胞增殖的影响。结果显示:AcLP对鸡外周血淋巴细胞的最大安全浓度为13.625 mg·mL^(-1)。AcLP浓度在0.026~1.703 mg·mL^(-1)时,单独刺激鸡外周血和脾脏淋巴细胞,其吸光度值均显著高于细胞对照组;协同ConA时,其吸光度值均显著高于ConA对照组。AcLP浓度在0.053~1.703 mg·mL^(-1)时,协同ConA刺激鸡脾脏淋巴细胞时,其吸光度值均显著高于ConA对照组。表明AcLP单独或协同ConA均可对鸡外周血淋巴细胞和脾脏淋巴细胞体外增殖起到促进作用。

摘要： 为探讨雪樱子多糖(AcLP)对鸡淋巴细胞体外增殖的影响,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定AcLP的安全浓度,并检测不同浓度的AcLP单独或协同伴刀豆球蛋白(ConA)对鸡淋巴细胞增殖的影响.结果显示:AcLP对鸡外周血淋巴细胞的最大安全浓度为13.625 mg·mL-1.AcLP浓度在0.026～1.703 mg·mL-1时,单独刺激鸡外周血和脾脏淋巴细胞,其吸光度值均显著高于细胞对照组;协同ConA时,其吸光度值均显著高于ConA对照组.AcLP浓度在0.053～1.703 mg·mL-1时,协同ConA刺激鸡脾脏淋巴细胞时,其吸光度值均显著高于Co-nA对照组.表明AcLP单独或协同ConA均可对鸡外周血淋巴细胞和脾脏淋巴细胞体外增殖起到促进作用.

摘要： 目的 探讨尿毒症患者血清甲状旁腺激素(PTH)对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)体外增殖及磷脂酰肌醇-3/蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路的影响.方法 选取2015年1月～2018年9月成都市第三人民医院肾内科收治的72例尿毒症患者,根据血清PT H水平分为正常组16例、轻中度增高组33例、重度增高组23例,常规体外培养大鼠GMC细胞,比较3组12、24、48 h GMC细胞光密度值、GMC细胞周期时相分布、mTOR、Caspase-3表达情况.结果 重度增高组12、24、48 h GMC细胞光密度值均高于正常组、轻中度增高组,且轻中度增高组12、24、48 h GMC细胞光密度值均高于正常组(P<0.05);3组GMC细胞光密度值在12、24、48 h随时间推移逐渐递增(P<0.05);与正常组相比,轻中度增高组、重度增高组GMC细胞进入S、G2/M期明显增多(P<0.05);重度增高组GMC细胞进入S、G2/M期细胞多于轻中度增高组(P<0.05);轻中度增高组、重度增高组mTOR表达量高于正常组,Caspase-3表达量低于正常组(P<0.05);重度增高组mTOR表达量高于轻中度增高组,Caspase-3表达量低于轻中度增高组(P<0.05).结论 尿毒症患者血清可导致GMC增殖,且甲状旁腺功能亢进可促进GMC增殖,提高PI3K/Akt/mTOR信号通路表达,PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制剂可能有助于抑制GMC增殖,延缓尿毒症患者肾功能衰竭进程.

摘要： 为探究山药低聚糖及其组分分别对不同益生菌的体外增殖作用,利用超声辅助提取法从山药中提取山药低聚糖,并依次通过活性炭色谱柱和Sephadex LH-20凝胶色谱柱,得到了数均分子质量分别为0.74、0.94、1.25 kDa的3个组分山药低聚糖.同时以山药低聚糖作为碳源,增殖培养婴儿双歧杆菌、两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌、BB-12双歧杆菌以及罗伊氏乳杆菌5种益生菌.结果表明,相比于低聚木糖培养基,BB-12双歧杆菌、两歧双歧杆菌和罗伊氏乳杆菌的OD600值分别提高了13.9％,8.24％和7.18％.以分离纯化后的山药低聚糖的3个组分分别作为碳源,增殖培养上述3种益生菌.结果表明,不同组分的山药低聚糖对不同益生菌的增殖作用具有显著性差异.山药低聚糖是一种较好的益生元,具有应用于益生菌业的潜力.

摘要： 目的 观察苏木乙酸乙酯提取液(SAEE)对急性冠脉综合征患者外周血CD4+T淋巴细胞的体外增殖及Th17/Treg比例的影响.方法 通过SAEE干预急性冠脉综合征患者外周血单个核细胞,以稳定型心绞痛患者作为对照.运用MTT法检测外周血CD4+T淋巴细胞的增殖,流式细胞术检测Th17、Treg百分比含量,RT-PCR检测白细胞介素-17A (IL-17A) mRNA、叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3) mRNA的表达.结果 与稳定型心绞痛患者比较,急性冠脉综合征患者CD4+T淋巴细胞体外增殖能力显著增加,IL-17A的表达显著增加,Foxp3的表达显著降低,Th17/Treg比值显著增高,差异均具有统计学意义(P＜0.01);与急性冠脉综合征组比较,SAEE能够显著抑制CD4+T淋巴细胞体外增殖能力,降低IL-17A的表达,升高Foxp3的表达,调控Th17/Treg的比值,其中以苏木乙酸乙酯高剂量组效果最佳,差异均具有统计学意义(P＜ 0.01).结论 SAEE能够通过抑制外周血CD4+T淋巴细胞增殖,调控Th17/Treg的平衡,达到抑制免疫反应和抗动脉硬化的作用.

摘要： 日前,中国科学技术大学生命科学学院毕国强教授课题组与同行合作,利用高分辨冷冻电镜单颗粒分析技术首次解析了人类疱疹病毒6B型的近原子分辨率结构。相关研究成果日前在线发表在国际著名期刊《自然·通讯》上。人类疱疹病毒6型(HHV-6)属于疱疹病毒家族β疱疹病毒亚家族,根据其表面抗原不同,又被分为HHV-6A和HHV-6B两类密切相关的病毒类型。很多幼儿都会被HHV-6病毒感染,并可能产生发烧、腹泻、红疹等临床症状。HHV-6病毒能够在人体中终身潜伏,并在免疫力低下的人群中引发严重疾病,它在脑组织中的二次暴发将导致患者认知紊乱、残废或者死亡。研究显示,HHV-6病毒甚至还与阿尔茨海默症和癫痫有关。HHV-6病毒感染造成广泛危害,但目前尚没有其病毒高分辨率结构,以及基于结构的药物或者疫苗抗病毒方案。由于与宿主细胞高度黏合,HHV-6B很难实现体外增殖培养,成为其原子分辨率结构解析的一大难题。

摘要： [背景]猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染猪而引起的一种急性肠道传染病,常导致病猪水样腹泻、呕吐、脱水.自2010年起,其大规模的暴发给养猪业造成巨大的经济损失.由于对PEDV免疫机理及侵入机制知之甚少,至今仍缺乏有效的PED防治措施.[目的]研究orf3对PEDV体外增殖的影响.[方法]利用基于RNA同源重组的PEDV反向遗传学操作技术拯救一系列携带不同orf3基因及orf3基因缺失的重组PEDV;将获得的重组PEDV以MOI 0.1感染Vero细胞,分别于感染的第8、16、24、32、40、48 h测定其TCID50并绘制病毒生长曲线;分别在感染25 h和36 h利用全自动细胞计数分析仪对6孔板内的细胞进行计数,并于感染后的第12、24、36、48 h用CCK-8试剂盒对其细胞活力进行测定.[结果]RT-PCR结果及细胞病变观察证明成功拯救到了携带不同orf3基因或orf3基因缺失的重组PEDV;进一步的免疫组化分析结果证实PEDV的ORF3蛋白可以在Vero细胞中合成.SPSS软件分析表明携带orf3基因的重组PEDV的滴度(TCID50)显著高于缺失orf3基因的重组PEDV的滴度;带有orf3基因的重组PEDV感染Vero细胞25 h和36h时的活细胞数显著高于缺失orf3基因的重组病毒感染相同时间时的活细胞数;而且重组PEDV感染Vero细胞24 h后,带有orf3基因的重组PEDV的细胞活性显著高于缺失orf3基因的重组病毒.[结论]ORF3蛋白对于PEDV在Vero细胞中的增殖具有促进作用,该作用是通过延缓或减少感染细胞的死亡实现的.本研究为揭示PEDV orf3基因的功能和PEDV复制机制的研究提供理论基础.

摘要： 利用不同截留分子量超滤膜分离酶解的果胶溶液获得3种果胶低聚糖溶液,冷冻干燥得不同分子量范围果胶低聚糖.用果胶低聚糖替代葡萄糖,适量添加至青春双歧杆菌发酵液中,置于厌氧培养箱中培养.测定发酵液的OD值,计算益生指标(PI),研究果胶低聚糖体外增殖青春双歧杆菌的效果.结果表明,添加果胶低聚糖的青春双歧杆菌培养基在48 h发酵液PI值达到0.5以上,说明果胶低聚糖对青春双歧杆菌具有良好的增殖作用.

摘要： 目的:观察金线莲多糖(ARPS)对小鼠脾淋巴细胞体外增殖、细胞周期调控机制以及分泌IL-2、IFN-γ的影响. 方法:MTT法检测ARPS以及ARPS协同ConA、LPS对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;流式细胞仪检测ARPS对小鼠脾淋巴细胞周期的调控作用;ELISA法检测ARPS对小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ的影响. 结果:在试验浓度范围内,ARPS对小鼠脾淋巴细胞没有毒性作用,且可促进小鼠脾淋巴细胞增殖,并呈现剂量依赖关系.ARPS与ConA或LPS共同作用小鼠脾淋巴细胞时,细胞存活率高于ARPS、ConA或LPS单独刺激组,表现出明显的协同效应(P＜0.01);ARPS能降低G0/G1期淋巴细胞百分率,增加S期、G2/M期淋巴细胞百分率,与空白对照组相比,差异极显著(P＜0.01);ARPS可促进小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ,与空白对照组相比差异极显著(P＜0.01). 结论:ARPS可促进小鼠脾淋巴细胞增殖并与ConA、LPS具有协同作用.其作用机制可能与促使小鼠脾淋巴细胞通过G1期限制点,加速G0/G1期向S期、S期向G2/M期转化进入细胞增殖周期,并且可能与其促进IL-2、IFN-γ的分泌有关.

摘要： 目的:研究猴头菇多糖(HEP)对小鼠脾淋巴细胞体外增殖及细胞周期的影响. 方法:四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HEP单独或协同ConA、LPS对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞周期的变化. 结果:HEP在6.25～100μg/mL质量浓度范围内能显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖,且48h效果最佳;HEP与ConA或LPS共同作用小鼠脾淋巴细胞时,小鼠脾淋巴细胞的OD值高于ConA和LPS单独的作用,表现出明显的协同效应;流式细胞仪检测表明,HEP通过促进脾淋巴细胞从G0/G1期进入S期,从而促进脾淋巴细胞增殖. 结论:HEP可单独或协同ConA、LPS促进小鼠脾淋巴细胞增殖及DNA的合成.

摘要： 目的:观察金线莲多糖(ARP)对小鼠脾淋巴细胞体外增殖、细胞周期及分泌1L-2、IFN-γ的影响. 方法:MTT法检测ARP单独及协同ConA、LPS对小鼠脾淋巴细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;ELISA法检测细胞因子IL-2和IFN-γ的含量. 结果:在试验浓度范围内,ARP对小鼠脾淋巴细胞没有毒性作用,与空白对照组比较,OD值明显升高(P＜0.05),在一定范围内呈量-效关系;ARP与ConA或LPS共同作用小鼠脾淋巴细胞时,其OD值明显高于ConA、LPS单独刺激组(P＜0.05);与空白对照组相比,ARP组G0/G1期淋巴细胞百分率降低(P＜0.01),S期、G2/M期淋巴细胞百分率升高(P＜0.01);ARP组IL-2、IFN-γ分泌量明显高于空白对照组(P＜0.05). 结论:ARP可促进小鼠脾淋巴细胞增殖并与ConA、LPS具有协同作用.其作用机制可能与促使小鼠脾淋巴细胞通过G1期限制点,加速G0/G1期向S期、S期向G2/M期转化进入细胞增殖周期,并且可能与其促进IL-2、IFN-γ的分泌有关.

摘要： 目的：研究猴头菇多糖(HEP)对小鼠脾淋巴细胞体外增殖及细胞周期的影响.rn 方法：四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HEP单独或协同ConA、LPS对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞周期的变化.rn 结果：HEP在6.25～100μg/mL质量浓度范围内能显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖,且48h效果最佳;HEP与ConA或LPS共同作用小鼠脾淋巴细胞时,小鼠脾淋巴细胞的OD值高于ConA和LPS单独的作用,表现出明显的协同效应;流式细胞仪检测表明,HEP通过促进脾淋巴细胞从G0/G1期进入S期,从而促进脾淋巴细胞增殖.rn 结论：HEP可单独或协同ConA、LPS促进小鼠脾淋巴细胞增殖及DNA的合成.

摘要： 目的:观察金线莲多糖(ARP)对小鼠脾淋巴细胞体外增殖、细胞周期及分泌IL-2、IFN-γ的影响.rn 方法:MTT法检测ARP单独及协同ConA、LPS对小鼠脾淋巴细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;ELISA法检测细胞因子IL-2和IFN-γ的含量.rn 结果:在试验浓度范围内,ARP对小鼠脾淋巴细胞没有毒性作用,与空白对照组比较,OD值明显升高(P＜0.05),在一定范围内呈量-效关系;ARP与ConA或LPS共同作用小鼠脾淋巴细胞时,其OD值明显高于ConA、LPS单独刺激组(P＜0.05);与空白对照组相比,ARP组G0/G1期淋巴细胞百分率降低(P＜0.01),S期、G2/M期淋巴细胞百分率升高(P＜0.01);ARP组IL-2、IFN-γ分泌量明显高于空白对照组(P＜0.05).rn 结论:ARP可促进小鼠脾淋巴细胞增殖并与ConA、LPS具有协同作用.其作用机制可能与促使小鼠脾淋巴细胞通过G1期限制点,加速G0/G1期向S期、S期向G2/M期转化进入细胞增殖周期,并且可能与其促进IL-2、IFN-γ的分泌有关.

摘要： 本研究探索了一套包括鸡外周血和脾脏T淋巴细胞的分离、纯化和刺激增殖培养的实验方法。脾脏细胞和外周血全细胞通过鸡T淋巴细胞分离液进行初步分离，获得单核免疫细胞，随后采用尼龙毛柱进行二次纯化，获得鸡T淋巴细胞。单独添加PHA,ConA或rchIL2均不能显著增加鸡T淋巴细胞体外增殖能力，rchIL2只有与PHA或ConA结合使用才能产生明显的刺激作用，且在相同rchIL2浓度条件下，ConA共刺激效果优于PHA。50 ng/μ1 rchlL2,12 g/μ1ConA条件下作用36h，鸡外周血T淋巴细胞体外活力增加为原来的1.8倍，鸡脾脏T淋巴细胞体外活力增加为原来的2.6倍。RPMI-1640培养基中添加10% FBS,2%鸡血清及上述浓度刺激物，培养温度40°C,5%C02条件下进行T淋巴细胞的培养，T淋巴细胞在体外存活时间长达3周，足以满足一般体外实验。为后期T淋巴细胞的相关研究提供实验基础。

摘要： 目的:动态观察IL-12对细胞因子诱导的杀伤细胞体外增殖,体内外的细胞毒活性的影响.方法:采用三种不同的细胞因子组合扩增CIK细胞,即IL-2组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1和IL-2;IL-2加IL-12组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1、IL-2和IL-12;IL-12组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1和IL-12.细胞计数法测定细胞的增殖,流式细胞术分析细胞表型.MTT法测定CIK体外细胞毒活性,并通过做扫描和透射电镜,对CIK细胞杀伤的肿瘤细胞进行形态学观察.通过动物实验研究CIK细胞体内的抗肿瘤作用.结果:三种方法均可使细胞增殖能力显著增加,对CD3+CD56+细胞的诱导作用也无明显差异,IL-12与IL-2联合作用组促增殖能力和细胞毒性作用明显强于其他两组(P＜0.05).被CIK细胞杀伤的肿瘤细胞的死亡形式是坏死和凋亡.动物实验证实CIK有较强的体内抗瘤活性,可延长荷瘤鼠的生存期,联合IL-12与IL-2诱导的CIK细胞疗效较好.结论:IL-12同样可以用于CIK细胞的诱导,而联合IL-12与IL-2诱导的CIK细胞其增殖能力和体内外抗肿瘤活性均有所增强.

摘要： 体外分离、培养小鼠牙乳头细胞并诱导其多向分化,探讨小鼠牙乳头细胞体外增殖及分化能力.选取出生四天内的SFP级C57乳鼠,分离下颌骨,在体式显微镜下分离双侧下颌第一前磨牙牙胚,剥离附着的成釉器及牙囊,将收集的小鼠牙乳头置于含10％双抗的PBS中,反复冲洗,加入125μl的0.25％胰酶中,在37°C孵箱消化10min.

摘要： 通过比较低氘水组(25ppm、50ppm和l00ppm)与饮用水组的细胞生长情况,确定低氘水对人肝癌细胞SMMC-7721的分裂增殖抑制作用.随着培养时间的推移,肝癌细胞在低氘水的培养环境下表现出一定的生长速度放缓趋势.

摘要： 目的:大鼠原代心肌细胞及心脏干细胞(CSCs)培养条件的筛选及丹参素(DS-182)对两种细胞体外增殖的影响.方法:对比组织块培养法及差速培养法,选取适宜培养基、消化液浓度、消化时间、差速贴壁时间及心脏成纤维细胞(CFs)抑制剂等因素.分别用MTT比色法、ELISA法及流式细胞术(FCM)检测丹参素对大鼠心肌细胞及CSCs体外增殖的影响.结果:确定DMEM/F121∶1培养基、100ml/L胎牛血清(FBS)、2.5g/L胰蛋白酶、5min/次×5次的消化时间及120min的差速贴壁时间为最适分离纯化条件.MTT比色法检测显示,与空白对照组相比,经浓度为7.8×10-4～1×10-1mol/L的DS-182处理12、24、48和72 h后,细胞的吸光度(A)值明显增加(P＜0.05).ELISA法检测显示,与空白对照组相比,经浓度为3.9×10-4～1×10-1 moL/L的DS-182处理24h后,细胞的A值明显增加(P＜0.05).FCM检测显示,经浓度为0.1mol/L的DS-182处理24h后,c-kit+的细胞数占细胞总数的比例增加了27.0％.结论:改良了一套较为完整的大鼠心肌细胞及CSCs的分离纯化方法.DS-182在一定浓度下(7.8×10-4～1×10-1mol/L)对大鼠心肌细胞及CSCs的增殖具有明显的促进作用.

摘要： 本发明涉及检测体外细胞增殖用载体及体外细胞增殖动态检测方法。动态检测体外细胞增殖用载体，其特征在于，载体包括：依次连接的PLKO.1序列、CMV序列、eGFP序列、IRES序列和Puro序列。本发明构建的稳转细胞株，与同类细胞株相比，荧光亮度强、光稳定性好、背景信号低，且对细胞的生理无显著性影响。所述检测方法包括：用本发明的载体、psPAX2载体和PMD2.G载体三载体包装慢病毒；用步骤一得到的慢病毒转染目标细胞，嘌呤霉素筛选、流式细胞术分选，得到稳转细胞株；选择合适的细胞数量加入细胞培养板中，待细胞贴壁后，高内涵细胞成像系统采集图像；处理数据，并绘制细胞增殖曲线。本发明自动化程度高，误差小，重复性好，灵敏度高。

摘要： 本发明涉及检测体外细胞增殖用载体及体外细胞增殖动态检测方法。动态检测体外细胞增殖用载体，其特征在于，载体包括：依次连接的PLKO.1序列、CMV序列、eGFP序列、IRES序列和Puro序列。本发明构建的稳转细胞株，与同类细胞株相比，荧光亮度强、光稳定性好、背景信号低，且对细胞的生理无显著性影响。所述检测方法包括：用本发明的载体、psPAX2载体和PMD2.G载体三载体包装慢病毒；用步骤一得到的慢病毒转染目标细胞，嘌呤霉素筛选、流式细胞术分选，得到稳转细胞株；选择合适的细胞数量加入细胞培养板中，待细胞贴壁后，高内涵细胞成像系统采集图像；处理数据，并绘制细胞增殖曲线。本发明自动化程度高，误差小，重复性好，灵敏度高。

摘要： 本发明公开了血清胸腺因子体外促进人羊膜间充质干细胞增殖、制备增殖培养基的用途。本发明发现，血清胸腺因子可以有效促进人羊膜间充质干细胞的增殖，并且呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性，且血清胸腺因子干预培养不会影响人羊膜间充质干细胞的多向分化能力，因此可以在人羊膜间充质干细胞培养基中添加有效浓度的血清胸腺因子制成提高人羊膜间充质干细胞增殖效率的培养基。

摘要： 本发明涉及一种膜联蛋白A2/S100A10异源四聚体抑制剂A2ti‑1在体外抑制伪狂犬病毒复制增殖的方法及应用，所述抑制剂A2ti‑1可以用于抑制伪狂犬病毒体外复制增殖的相关抗病毒药物的开发。本发明在PK‑15细胞上验证了A2ti‑1在不低于62.5μM的使用浓度下，与对照组相比，PRV感染后的DNA含量、病毒滴度和结构蛋白的表达水平均显著降低，说明A2ti‑1可用于抑制伪狂犬病毒的体外复制增殖。

摘要： 本发明涉及增殖和/或修饰含有来自无血清培养下的单核细胞级分的血管内皮祖细胞的细胞群体的方法，通过所述方法获得的细胞群体，用于缺血性疾病的含有所述细胞群体的治疗剂的生产方法等。在本发明中，简化了制备用于缺血性疾病的治疗的细胞群体的方法，并且提供了在那样的治疗中更有效的细胞群体。提供了方法，其特征在于在含有干细胞因子、白介素‑6、FMS‑样酪氨酸激酶3配体、血小板生成素和血管内皮细胞生长因子的无血清培养基中培养来自骨髓、脐带血或外周血的单核细胞，从而增殖内皮祖细胞。还提供了通过所述方法获得的细胞群体。

摘要： 本发明提供一种鸭圆环病毒的体外增殖及培养方法，包括如下步骤：(1)采集健康成年番鸭血，进行PBMC的分离培养，制备PBMC细胞悬液；(2)将检测为鸭圆环病毒阳性的病料，加入到PBMC细胞悬液中培养。本发明提供了一种体外增殖培养DuCV的方法，接毒培养后病毒滴度有大幅度的提高，能够实现在实验室完成病毒的分离鉴定，对其致病机理及危害的研究提供较大的帮助。

摘要： 本发明提供了一种脐血NK细胞的体外增殖培养基、体外培养试剂盒和体外培养方法，涉及细胞体外培养技术领域。本发明所述体外增殖培养基不包含动物血清，使用时减少免疫反应，应用更安全。本发明利用所述体外增殖培养基对脐血NK细胞进行体外增殖，操作简单易行，成本低廉，无需包被和分选，不需要滋养层细胞，不含动物源成分，安全性和稳定性好，可用于Ficoll分离的PBMC的直接培养，并得到更多量满足临床使用标准的NK细胞。利用本发明所述体外培养方法制备的NK细胞，CD3‑CD56+细胞表达率高达90％以上，并且高表达NKG2D、NKp30、NKp46等活化性受体，体外杀瘤活性强。

摘要： 本发明公开了一种咖啡酸衍生物促进脐带间充质干细胞体外增殖和制备促增殖培养基的用途。通过本发明实验可以发现，咖啡酸‑4‑2‑羟乙基吗啉酯可以显著促进hUCMSCs体外增殖，具有剂量依赖效应和时间依赖效应，咖啡酸‑4‑2‑羟乙基吗啉酯扩增的hUCMSCs依然维持很强的多向分化能力，可以作为种子细胞。因此，咖啡酸‑4‑2‑羟乙基吗啉酯可以用于促进人hUCMSCs体外增殖、用于制备促进人hUCMSCs体外增殖的培养基。

摘要： 本发明提供一种用于肌源性细胞体外增殖的化学成分明确的培养基，该培养基通过添加细胞培养补充因子，代替血清在肌源性细胞增殖过程中发挥的作用，来避免血清存在的一系列问题，使肌源性细胞在至少3代(9天)的传代过程中保持每代增殖3倍左右的增殖能力，且活细胞比例维持在90％左右。在分子水平上，本发明的化学成分明确的用于肌源性细胞体外增殖的培养基能够显著提高肌源性基因的表达，同时也显著提高细胞外基质蛋白基因的表达。此外免疫荧光结果显示，本发明的化学成分明确的用于肌源性细胞体外增殖的培养基在传代过程中维持肌源性蛋白、细胞外基质蛋白和细胞特异性蛋白表达的阳性细胞比例，维持细胞种群保持不变。

摘要： 本发明是关于一种体外增殖自然杀伤细胞及自然杀伤T细胞的方法，由周边血液单核细胞中培养并增殖自然杀伤细胞及自然杀伤T细胞，包括使用微量白介素‑2促进细胞增殖并活化自然杀伤细胞及自然杀伤T细胞，该方法可明显提高细胞生长倍数及自然杀伤细胞及自然杀伤T细胞所占比例，并且所得到的自然杀伤细胞及自然杀伤T细胞可用于制备肿瘤疫苗等医药组成物。